三七花在调控抗菌肽表达方面的用途及三七花总皂苷提取方法技术

本发明专利技术“三七花在调控抗菌肽表达方面的用途及三七花总皂苷提取方法”属于中药提取及其新用途技术领域。本发明专利技术一方面提供三七花在调控抗菌肽表达方面的用途。另一方面还提供三七花在清除自由基、或，抑制环氧合酶、或，抑制细胞炎症因子、或，抗糖化方面的用途。本发明专利技术验证了三七花提取物可有效促进抗菌肽表达并抑制果糖胺。本发明专利技术的提取方法得到三七花提取物的皂苷含量为70mg/g，纯度达到59.84％，提高了皂苷活性成分的含量和纯度，同时工艺简单，降低了成本和时间。了成本和时间。了成本和时间。

【技术实现步骤摘要】
三七花在调控抗菌肽表达方面的用途及三七花总皂苷提取方法


[0001]本专利技术属于中药提取及其新用途
，具体涉及三七花在调控抗菌肽表达方面的用途及三七花总皂苷提取方法。

技术介绍

[0002]三七花为五加科人参属植物三七的干燥花蕾(Flowerbuds of Panax Notoginseng(Burk)F.H.Chen)。《中国药典》(2010年版)规定三七地下部分主根、支根和根茎为药用部位，而三七花为三七的非传统药用部位。但是有研究表明三七花味甘微苦，性凉，具有生津，平肝的功效。现代药理研究表明其具有镇静安神、消炎镇痛、降血压等功效，药理作用广，副作用少，治疗效果持久且稳定。综上所述，三七花具有较高的应用价值，开发前景广阔。故要想全面系统地开发利用三七花，清楚其活性成分及功效就显得尤为重要。
[0003]相关研究表明三七花中总皂苷含量比传统药用部位三七根中的总皂苷含量高，但是二者中单体皂苷的含量却存在显著差别。三七花中含有大量的原人参二醇型人参皂苷，其中三七皂苷Fc和人参皂苷Rc，Rb2和Rb3含量较高。有文献报道三七总皂苷在某些药理作用如抗炎、抗衰老、提高机体免疫力等方面比人参总皂苷更具优势，故此对于三七花中活性成分抗炎的功效需要进行深入系统的研究。三七花是三七中皂苷的高含量部位，可以考虑将其作为三七主根的替代品，合理利用现有的药材资源。
[0004]抗菌肽原指昆虫体内经诱导而产生的一类具有抗菌活性的碱性多肽物质，分子量在2000～7000左右，由20～60个氨基酸残基组成。这类活性多肽多数具有强碱性、热稳定性以及广谱抗菌等特点。世界上第一个被发现的抗菌肽的是1980年由瑞典科学家G.Boman等人经注射阴沟通杆菌及大肠杆菌诱导惜古比天蚕蛹产生的具有抗菌活性的多肽，定名为Cecropins。除了上述昆虫来源的抗菌肽以外，后来持续不断的研究发现更多的抗菌肽可来自不同的物种，例如，植物源的抗菌肽、昆虫以外的其他动物(包括：两栖动物、哺乳动物、软体动物、甲壳类动物、鱼类等)来源的抗菌肽，细菌来源的抗菌肽(又称细菌素)、人源抗菌肽等。
[0005]LL
‑
37是迄今在人体中发现的抗菌肽cathelicidin家族中的唯一成员，也是人体内唯一的双亲性α螺旋结构的抗菌肽。LL
‑
37主要表达于某些骨髓源性细胞(中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等)、角质形成细胞、组织上皮细胞及某些腺体等易于与微生物发生接触的部位。作为天然免疫的重要成分,LL
‑
37在机体遭受外来微生物侵袭时能与其他抗菌肽一起提供迅速有效的第一线防御。众多研究表明，LL
‑
37不仅具有广谱的抗微生物活性，而且在获得性免疫中细胞因子的释放、免疫细胞的趋化和炎症性疾病的发生发展中也起着关键的作用。
[0006]LL
‑
37在体内和体外都具有强烈的抗微生物功能，这些微生物包括细菌、真菌和病毒等。大量研究发现，LL－37具有抗菌谱广，不易产生耐药菌株等特点，对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌等，均表现出较强的抗菌活性。
[0007]LL
‑
37还具有重要的免疫调节作用。LL
‑
37能调节不同的免疫和非免疫细胞释放细胞因子，这些细胞因子在炎症和抗炎症反应中都发挥了重要的调节作用。许多证据表明，LL
‑
37广泛参与许多炎症性皮肤病的发生发展过程。当机体出现创伤、炎症、感染时，皮损局部的角质形成细胞会生成大量的活性抗菌肽LL
‑
37，参与机体的防御反应。
[0008]LL
‑
37具有广谱的抗菌作用及其独特的免疫调节作用。然而，现有技术从未报道过三七花与抗菌肽之间的调控关系。

技术实现思路

[0009]基于本领域存在的上述空白，本专利技术首次提出三七花与抗菌肽之间的调控关系，并发现三七花在抗菌肽的表达方面起显著的促进作用。
[0010]本专利技术的技术方案如下：
[0011]三七花在调控抗菌肽表达方面的用途。
[0012]所述调控指正调控；
[0013]优选地，所述正调控指促进抗菌肽的表达或分泌。
[0014]所述抗菌肽选自：植物来源的抗菌肽、细菌来源的抗菌肽、动物来源的抗菌肽、人源抗菌肽；
[0015]优选地，所述抗菌肽为人源抗菌肽；
[0016]优选地，所述人源抗菌肽为抗菌肽LL
‑
37。
[0017]所述三七花为三七花提取物；
[0018]优选地，所述三七花提取物为三七花总皂苷。
[0019]更优选地，所述三七花总皂苷浓度为50μg/mL
‑
200μg/mL。
[0020]所述三七花提取物的提取方法包括：以乙醇为溶剂通过超声提取技术得到三七花粗提物，再用柱层析法以乙醇为洗脱剂对三七花粗提物进行分离纯化。
[0021]所述提取方法包括：在三七花中加入溶剂乙醇进行超声提取；
[0022]优选地，所述超声提取进行3次；每次超声提取后抽滤，将所得滤液进行浓缩得到三七花粗提物；
[0023]优选地，三七花与溶剂乙醇的料液比为1
‑
3g∶3
‑
10ml优先1g∶5ml；
[0024]优选地，超声提取的温度为40
‑
80℃优先60℃，超声提取的时间为10
‑
60min优先30min；
[0025]优选地，所述提取方法还包括：以层析柱平衡、上样过柱、洗脱为一个循环，共进行3个循环得到洗脱液；所述上样指将三七花粗提物做为样品加入层析柱；
[0026]优选地，所述样品与层析柱树脂的质量比为1
‑
3∶10
‑
30优先1∶20；
[0027]优选地，所述层析柱平衡指用95％乙醇冲洗层析柱；
[0028]优选地，所述洗脱指先用水将层析柱洗至无色、再用洗脱剂乙醇洗脱并收集洗脱液；
[0029]优选地，所述洗脱液经浓缩后得到三七花提取物；
[0030]优选地，所述浓缩指用旋转蒸发仪将滤液中的乙醇蒸除；
[0031]优选地，溶剂乙醇为70％
‑
80％优选75％的乙醇；洗脱剂乙醇为50％
‑
70％优选50％的乙醇。
[0032]三七花在清除自由基、或，抑制环氧合酶、或，抑制细胞炎症因子、或，抗糖化方面的用途。
[0033]所述自由基选自：DPPH、ABTS；所述环氧合酶选自环氧合酶
‑
2COX
‑
2；所述细胞炎症因子选自PGE
‑
2；
[0034]优选地，所述抗糖化指：抑制果糖胺；
[0035]优选地，所述三七花为三七花提取物；
[0036]优选地，所述三七花提取物为三七花总皂苷；
[0037]优选地，所述三七花提取物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.三七花在调控抗菌肽表达方面的用途。2.根据权利要求1所述的三七花在调控抗菌肽表达方面的用途，其特征在于，所述调控指正调控；优选地，所述正调控指促进抗菌肽的表达或分泌。3.根据权利要求1或2所述的三七花在调控抗菌肽表达方面的用途，其特征在于，所述抗菌肽选自：植物来源的抗菌肽、细菌来源的抗菌肽、动物来源的抗菌肽、人源抗菌肽；优选地，所述抗菌肽为人源抗菌肽；优选地，所述人源抗菌肽为抗菌肽LL
‑
37。4.根据权利要求1
‑
3任一所述的三七花在调控抗菌肽表达方面的用途，其特征在于，所述三七花为三七花提取物；优选地，所述三七花提取物为三七花总皂苷；优选地，所述三七花以三七花总皂苷溶液形式对抗菌肽起调控作用；更优选地，所述三七花总皂苷溶液中三七花总皂苷浓度为50μg/mL
‑
200μg/mL。5.根据权利要求1
‑
4任一所述的三七花在调控抗菌肽表达方面的用途，其特征在于，所述三七花提取物的提取方法包括：以乙醇为溶剂通过超声提取技术得到三七花粗提物，再用柱层析法以乙醇为洗脱剂对三七花粗提物进行分离纯化。6.根据权利要求6所述的三七花在调控抗菌肽表达方面的用途，其特征在于，所述提取方法包括：在三七花中加入溶剂乙醇进行超声提取；优选地，所述超声提取进行3次；每次超声提取后抽滤，将所得滤液进行浓缩得到三七花粗提物；优选地，三七花与溶剂乙醇的料液比为1
‑
3g∶3
‑
10ml优先1g∶5ml；优选地，超声提取的温度为40
‑
80℃优先60℃，超声提取的时间为10
‑
60min优先30min；优选地，所述提取方法还包括：以层析柱平衡、上样过柱、洗脱为一个循环，共进行3个循环得到洗脱液；所述上样指将三七花粗提物做为样品加入层析柱；优选地，所述样品与层析柱树脂的质量比为1
‑
3∶10
‑
30优先1∶20；优选地，所述层析柱平衡指用95％乙醇冲洗层析柱；优选地，所述洗脱指先用水将层析柱洗至无色、再用洗脱剂乙醇洗脱并收集洗脱液；优选地，所述洗脱液经浓缩后得到三七花提取物；优选地，所述浓缩指用旋转蒸发仪将滤液中的乙醇蒸除；优选地，溶剂乙醇为70％
‑
80％优选75％的乙醇；洗脱剂乙醇为50％
‑
70％优选50％的乙醇。7.三七花在清除自由基、或，抑制环氧合酶、或，抑制细胞炎症因子、或，抗糖化方面的用途。8.根据权利要求5所述的三七花在清除自由基、或，抑制环氧合酶、或，抑制细胞炎症因子、或，抗糖化方面的用途，其特征在于，所述自由基选自：DPPH、ABTS；所述环氧合酶选自环氧合酶
‑
2COX
‑
2；所述细胞炎症因子选自PGE
‑
2；优选地，所述抗糖化指：抑制果糖胺；优...

【专利技术属性】
技术研发人员：李丽，易帆，郭苗苗，张红燕，孟宪瑶，陈春宇，吴悦航，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：