一种用于诊断诱发复发性流产的基因的检测方法技术

本发明专利技术涉及基因检测技术领域，尤其涉及一种用于诊断诱发复发性流产的基因的检测方法，包括一组引物组合和一种质谱仪检测方法。本发明专利技术通过使用全新的引物组合进行飞行时间质谱检测，可以判断出样本中是否存在易患复发性流产的生物样本，并且通过使用飞行时间质谱技术可以在一个样本管中同时检测生物样品中8个位点的SNP，从而判断该生物样品是否为复发性流产易患样品，特异性好，反应灵敏，检测时间短，方法简单，成本低廉，临床应用价值高。临床应用价值高。临床应用价值高。

【技术实现步骤摘要】
ID NO：5所示核苷酸序列具有90％以上同源性的第五lncRNA和与SEQ ID NO：6所示核苷酸序列具有90％以上同源性的第六lncRNA。血清lncRNA是新颖的生物标志物，能大大提高复发性流产诊断的敏感性和特异性；
[0007]中国专利公开号：CN107177696A通过检测TNF
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α、CTLA4、MTHFR三个遗传易感基因对复发性流产进行预防和治疗；
[0008]中国专利公开号：CN103221421A通过对检查非母系样品、特别是从(预期)生物学父亲获得的样品中的人膜联蛋白A5(ANXA5)启动子，或检查从所述女性获得的绒毛膜活检或羊膜穿刺样品中的人膜联蛋白A5(ANXA5)启动子，或在将体外受精胚胎植入所述女性受试者之前，检查从所述体外受精胚胎的桑椹胚期之前或期间获得的单细胞样品中的人膜联蛋白A5(ANXA5)启动子中的某些核苷酸点突变对复发性流产倾向进行检测；
[0009]中国专利公开号：CN108486241A通过检测血清mRNA生物标志物实现复发性流产的诊断；
[0010]中国专利公开号：CN106987593A通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断诱发复发性流产的基因的检测方法，其特征在于，包括：步骤S1，用次氯酸钠清洁实验器材、超净台、生物安全柜、桌面、地面，然后用75％乙醇清洁并用紫外线照射30min，试剂轻微涡旋震荡和离心；步骤S2，配制PCR primer、配制UEP primer；步骤S3，配制PCR混合液；步骤S4，配制SAP混液；步骤S5，延伸反应；步骤S6，脱盐；步骤S7，配置分析仪参数；步骤S8，使用分析仪分析样本；步骤S9，分析完毕。2.根据权利要求1所述的用于诊断诱发复发性流产的基因的检测方法，其特征在于，在所述步骤S2中，配置PCR primer包括：步骤S201，将装有PCR primer干粉的离心管12000g离心10min；步骤S202，按照引物自带的nmol数稀释到100μM；步骤S203，混匀离心，静置10min；步骤S204，再次混匀离心，每条引物取2.5μL混到一起；步骤S205，补水至总体积500μL；在所述步骤S2中，配置UEP primer包括：步骤S206，将装有UEP primer干粉的离心管12000g离心10min；步骤S207，按照引物自带的nmol数稀释到500μM；步骤S208，混匀离心，静置10min；步骤S209，再次混匀离心，根据UEP线性稀释表格配制UEP引物mix，不要加水补足体积；步骤S210，取1μL UEP mix加到49μL水中；步骤S211，点样：速度140
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160，打至少两个点；步骤S212，观察每条UEP的高度，最低峰不低于最高峰高度的60％；步骤S213，调整峰低的UEP引物的体积；步骤S214，重复步骤S30至步骤S33，直到达到要求，加水补足体积。3.根据权利要求2所述的用于诊断诱发复发性流产的基因的检测方法，其特征在于，在所述步骤S3中，配制PCR混合液包括：试剂N＝1[μL]Dnase/Rnase
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Free Deionized water0.810x PCR Buffer with 20mM MgCl20.525mM MgCl20.425mM dNTP Mix0.10.5μM Primer Mix15U/μl PCR Enzyme**0.25ng/μL DNA2Total volume[μL]5
步骤S301，根据上表配制PCR混合液，并将PCR混合液加到96孔板中；步骤S302，加2μL DNA在步骤4.2.3.1配制的PCR混合液里；步骤S303，把板用膜封好，4000rpm离心5s；步骤S304，放于PCR仪进行以下热循环：95℃2min，45个循环，72℃5min，4℃forever。4.根据权利要求3所述的用于诊断诱发复发性流产的基因的检测方法，其特征在于，在所述步骤S4中，配制SAP混液在冰上的操作包括：试剂N＝1[μL]Dnase/Rnase
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Free Deionized water1.53SAP Buffer0.17SAP Enzyme(1.7U/μL)0.3Total volume总体积[μL]2步骤S401，根据上表配制SAP混合液，并加2μLSAP混合液到每一个孔里，把板用膜封好，4000rpm离心5s；步骤S402，放于PCR仪进行以下程序：37℃40min，85℃5min，4℃forever。5.根据权利要求4所述的用于诊断诱发复发性流产的基因的检测方法，其特征在于，在所述步骤S5中，延伸反应在冰上的操作包括：试剂N＝1[μL]Dnase/Rnase
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Free Deionized water0.62iPLEX Buffer0.2iPLEX Termination mix0.2Extend Primer Mix0.94iPLEX Pro Enzyme0.04Volume[μl]2步骤S501，根据上表配制iPlex延伸混液；步骤S502，每一个孔加入2μL iPLEX延伸混合液(加混液后总体积：9μL)；把板用膜封好，4000rpm离心5s；步骤S503，将96孔板放上PCR仪进行以下热循环：94℃30s，(94℃5s
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<52℃5s，80℃5s>x5)x40个循环，72℃3min，4℃forever。6.根据权利要求5所述的用于诊断诱发复发性流产的基因的检测方法，其特征在于，在所述步骤S6中，包括：步骤S601，把洁净树脂(Resin)铺平在垫有白纸的96/15mg dimple plate上，风干最少10min；步骤S602，在样本孔里加入41μL水，瞬时离心；步骤S603，加入15mg洁净树脂(Resin)：轻轻将样本板凌空反转，放在盛有树脂的dimple plate上，然后将dimple plate连样本板一起反转(过程中两板不可水平移动)，使树脂掉到孔里；步骤S604，用膜把板封好，放在旋转混匀仪上，转速10
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11，摇匀40min；步骤S605，将板以2000rpm离心5min。7.根据权利要求6所述的用于诊断诱发复发性流产的基因的检测方法，其特征在于，在
所述步骤S7中，包括：步骤S701，在分析仪中开启Typer软件，使用Assay Editor导入Assay信息；步骤S702，建立Project、Assay group和Assay；步骤S703，选择Import Assay Group in Designer format勾选Assay Group，选择Browse打开Assay文件并选择击Import进行导入；步骤S704，使用Plate Editor编板建立Custom和Project，再建立Plate；步骤S705，打开Sample建立Sample Customer和Projec...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛慧琴，
申请(专利权)人：薛慧琴，
类型：发明
国别省市：