一种高纯度苯肽类川芎提取物及其制备方法和在抗肝纤维化中的应用技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及一种高纯度苯肽类川芎提取物及其制备方法和在抗肝纤维化中的应用。本发明专利技术通过研究发现一种川芎来源的苯酞类提取物，与其他川芎传统提取工艺分离的活性提取物相比，该苯酞类提取物可发挥更显著的抗氧化损伤，缓解胶原过度沉积，降低血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆酸、碱性磷酸酶、总胆红素及肝脏丙二醛和羟脯氨酸水平，升高超氧化物歧化酶等，从而发挥更加优异的抗肝纤维化作用，并进一步分析其活性成分，从而为川芎在肝纤维化特别是胆汁淤积型肝纤维化防治的实际应用奠定基础。治的实际应用奠定基础。治的实际应用奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度苯肽类川芎提取物及其制备方法和在抗肝纤维化中的应用


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及一种高纯度苯肽类川芎提取物及其制备方法和在抗肝纤维化中的应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]肝纤维化(Liver fibrosis)是由细胞外基质应激性降解失衡、弥漫性过度沉积引起的肝脏损伤，也是原发性硬化性胆囊炎、原发性胆汁性肝硬化及肝癌等多种肝脏疾病的共有病理变化。早期肝纤维化的隐匿性和非侵入性诊断方法的缺乏增加了肝纤维化确诊和治疗的难度。肝星状细胞的活化是肝纤维化形成的中心环节，在肝星状细胞早期激活阶段，肝血窦内皮细胞通透性改变并伴有间隙纤维增生，导致肝细胞缺血并释放损伤相关模式分子，加重诱导免疫反应并释放大量炎症介质。炎症因子的肝中蓄积又持续活化肝星状细胞，进一步加速肝纤维化的进程。
[0004]目前肝纤维化动物模型多以小鼠为主，主要包括胆汁淤积型肝纤维化、刺激物诱导型肝纤维化、代谢性肝纤维化、酒精性肝纤维化及免疫性肝纤维化等。胆总管结扎是复制胆道梗阻性胆汁淤积肝纤维化模型的代表性方法，胆管结扎后小鼠肝脏组织可见明显汇管区及胆管周围肝细胞肿胀破裂，空泡变性及门静脉周围及窦周纤维化明显；随着基因操纵小鼠相关研究的不断深入，当多药耐药基因2(MDR2)缺失时可导致磷脂酰胆碱向胆汁内转运不足，诱发非脓性胆管炎伴门静脉炎，引起胆管增生，管腔狭窄阻塞；此外，四氯化碳或硫代乙酰胺是诱导纤维化模型的常用工具药物，模型较为成熟，成功率高，从第2周开始即可出现肝纤维化表征。然而，相比于以上化学药物干预等造模方法，胆管结扎法诱导的肝损伤与临床肝纤维化病人的病因及病理表现更为贴近。
[0005]中医药是“中国古代科学的瑰宝，打开中华文明宝库的钥匙”。大量的临床观察及实验研究证明中医药治疗多种肝纤维化时疗效确切、优势显著。近年来利用中药有效成分治疗肝纤维化的研究取得了较大的进展。因此，基于中药原料筛选出更多更加有效的肝纤维化特别是针对胆汁淤积型肝纤维化的治疗药物成为当前的研究热点。

技术实现思路

[0006]基于上述现有技术的不足，本专利技术提供一种高纯度苯肽类川芎提取物及其制备方法和在抗肝纤维化中的应用。本专利技术通过研究发现一种川芎来源的苯酞类提取物，与其他川芎传统提取工艺分离的活性提取物相比，该苯酞类提取物可发挥更显著的抗氧化损伤，缓解胶原过度沉积，降低血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆酸(TBA)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(T
‑
BIL)及肝脏丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(HYP)水平，升高超氧化物歧化
酶(SOD)等，从而发挥更加优异的抗肝纤维化作用，并进一步分析其活性成分，从而为川芎在肝纤维化特别是胆汁淤积型肝纤维化防治的实际应用奠定基础。基于上述研究成果，从而完成本专利技术。
[0007]为实现上述技术目的，本专利技术采用技术方案如下：
[0008]本专利技术的第一个方面，提供一种高纯度苯肽类川芎提取物，所述提取物为川芎经乙醇浸出后获得；优选的，上述乙醇浸出过程可采用渗漉法进行。
[0009]本专利技术通过对其活性组分进行分析鉴定，其主要活性组分为苯肽类化合物(特征性成分：洋川芎内酯A)。
[0010]本专利技术的第二个方面，提供上述苯肽类川芎提取物的制备方法，所述苯肽类川芎提取物其具体制备方法包括以川芎为原料，以乙醇为溶剂，采用渗漉法获得。
[0011]具体的，所述制备方法包括：
[0012]S1、将川芎粉碎得微粉采用乙醇进行浸泡，从而保证川芎微粉充分浸润；
[0013]S2、将经步骤S1浸泡后的川芎微粉加入渗漉筒中，然后从渗漉筒上部加入乙醇，控制渗漉液流出；
[0014]S3、将步骤S2获得的渗漉液经旋蒸后使乙醇完全挥发，然后经冻干处理后即得。
[0015]本专利技术的第三个方面，提供上述苯肽类川芎提取物在制备预防和/或治疗肝纤维化药物中的应用。
[0016]其中，所述肝纤维化具体为胆汁淤积型肝纤维化。
[0017]具体的，所述预防和/或治疗肝肝纤维化至少表现在具有如下任意一种或多种用途：
[0018](a)抗氧化损伤；
[0019](b)缓解胶原过度沉积；
[0020](c)降低血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆酸、碱性磷酸酶、总胆红素及肝脏丙二醛和羟脯氨酸水平，升高超氧化物歧化酶；
[0021](d)抗肝纤维化。
[0022]本专利技术的第四个方面，提供一种预防和/或治疗肝纤维化的药物组合物，所述药物组合物由上述苯肽类川芎提取物与至少一种其它药物活性成分和/或至少一种其它非药物活性成分构成。
[0023]其中，所述肝纤维化具体为胆汁淤积型肝纤维化。
[0024]本专利技术的第五个方面，提供一种预防和/或治疗肝肝纤维化的方法，所述方法包括：向受试者施用上述苯肽类川芎提取物或药物组合物。
[0025]上述一个或多个技术方案的有益效果：
[0026]上述技术方案提供了一种苯酞类中药提取物应用于抗肝纤维化的药物用途。上述苯酞类中药提取物经渗漉法分离提纯并超高效液相色谱法鉴定。药效学实验表明，该苯酞类中药提取物具有明显的降低血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肝脏丙二醛，恢复超氧化物歧化酶活性，改善胆汁淤积性肝纤维化的作用。与传统提取工艺分离的川芎组分及提取物相比，该苯酞类中药提取物表现出显著的抗纤维化优势效应。
[0027]上述技术方案制得的苯酞类中药提取物可用于进一步制备抗肝纤维化药物，较于目前临床上常用的抗胆汁淤积型肝纤维化手段，伞形科植物来源广泛、价格低廉、药效显
著，具有极高的临床治疗及新药转化意义。
附图说明
[0028]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0029]图1为本专利技术实施例中川芎苯酞类提取物UPLC图；注：含有标准品洋川芎内酯A的中药川芎总苯酞UPLC图，4号峰为川芎苯酞特征峰：洋川芎内酯A。
[0030]图2为本专利技术实施例中小鼠胆管结扎型肝纤维化损伤造模示意图；注：Sham为假手术组，BDL为胆管结扎手术组。
[0031]图3为本专利技术实施例中小鼠肝脏病理结构变化图；(A)H&E染色图；(B)Masson染色图；注：Sham为假手术组，BDL为胆管结扎手术组，BDL+CX
PHL
为川芎苯酞类提取物治疗组，BDL+CX
PA
为川芎酚酸类提取物治疗组，BDL+CX
AE
为川芎水提物治疗组。
[0032]图4为本专利技术实施例中小鼠血清中肝纤维化损伤指标检测；注：Sham为假手术组，BDL为胆管结扎手术组，BDL+CX
PHL
为川芎苯酞类本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高纯度苯肽类川芎提取物，其特征在于，所述提取物为川芎经乙醇浸出后获得；优选的，乙醇浸出过程采用渗漉法进行。2.权利要求1所述的苯肽类川芎提取物的制备方法，其特征在于，所述苯肽类川芎提取物其具体制备方法包括以川芎为原料，以乙醇为溶剂，采用渗漉法获得。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：S1、将川芎粉碎得微粉采用乙醇进行浸泡，从而保证川芎微粉充分浸润；S2、将经步骤S1浸泡后的川芎微粉加入渗漉筒中，然后从渗漉筒上部加入乙醇，控制渗漉液流出；S3、将步骤S2获得的渗漉液经旋蒸后使乙醇完全挥发，然后经冻干处理后即得。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，上述各步骤中，所述乙醇为高浓度乙醇，具体为80
‑
95％乙醇，优选的，所述乙醇为95％乙醇。5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，川芎微粉其全部通过5号筛，95％通过6号筛。6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述渗漉筒用80
‑
95％(优选为95％)乙醇预先润湿的脱脂棉球完全铺满，棉球滤材层厚度在1.5cm及以上；所述川芎微粉与乙醇(包含步骤S1预混乙醇和步骤S2中加入乙醇)的质量比为1:1
‑
20，优选为1:15；控制渗漉流速为0.5
‑
2滴/s，优选为1滴/s。7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，旋蒸采用真空旋转蒸发仪进行；所述冻干处理具体包括：将蒸发乙醇后的提取物经低温冷冻后进行真空冻干处理；优选的，所述制备方法还包括对制得的川芎提取物进行鉴定分析，包括采用UPLC方法对川芎提取物中的特征成分洋川芎内酯A进行鉴定分析；优选的，所述鉴定分析方法包括：将制...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓骄阳，刘闰平，李雅静，徐冰，孙蓉，丁明宁，黄娜娜，马之，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：