用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物及应用制造技术

本申请提供一种用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物、方法及试剂盒。用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物，包括第一肽段、第二肽段和第三肽段；第一肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；第二肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；第三肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。能够在蛋白水平上，快速高效的定量检测猪源CYP2E1，提高了猪源CYP2E1的检测通量和效率。相较于基于抗体的Western Blot法具有更强的特异性。特异性。特异性。

【技术实现步骤摘要】
用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物及应用


[0001]本申请涉及蛋白相对定量分析领域，尤其涉及一种用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物及应用。

技术介绍

[0002]CYP2E1是正常的猪肝组织中含量最高的一种细胞色素P450酶(Cytochrome P450，CYP)，由493个氨基酸组成，分子量为56.9Kda，主要分布在肝脏，并且富集于肝小叶中心区域。主要作用是参与前致癌物及环境毒物(苯、乙醇、四氯化碳和氯乙烯等)的生物转化。CYP2E1催化多种需要NADPH的氧化生化反应，在催化底物代谢过程中常产生羟乙基、醛类和过氧化物等中间产物，氧化不完全则导致氧化自由基及其活性衍生物(Reactive oxygen species，ROS)的生成，尤其在铁催化下，CYP2E1生成ROS(如超氧阴离子自由基和过氧化氢)能力增强，生成强氧化剂(如羟基自由基)，打破体内抗氧化系统平衡，导致脂质过氧化，从而引起细胞膜破坏、DNA损伤等，影响猪的健康水平，使养猪业遭受损失。
[0003]因此，亟需深入研究猪的细胞色素P450酶CYP2E1的相对定量分析方法。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本申请的目的在于提出一种用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物及应用。
[0005]基于上述目的，本申请提供了一种用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物，包括第一肽段、第二肽段和第三肽段；
[0006]其中，所述第一肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述第二肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述第三肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
[0007]在其中一些实施例中，所述第一肽段的母离子为861.96m/z，子离子为1234.65m/z，1121.57m/z和710.36m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第二肽段的母离子为599.83m/z，子离子为998.58m/z，861.52m/z和714.45m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第三肽段的母离子为578.31m/z，子离子为856.47m/z，658.37m/z和284.17m/z，子离子对应的碰撞能量为27V。
[0008]本申请实施例还提供一种相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的方法，应用如前任一项所述的肽段组合物，对猪细胞色素P450酶CYP2E1进行相对定量分析。
[0009]在其中一些实施例中，所述对猪细胞色素P450酶CYP2E1进行相对定量分析包括：
[0010]提供不同组别的待测猪组织样品，分别进行蛋白提取和蛋白酶解处理，得到不同组别的待测肽段；
[0011]通过液相色谱
‑
质谱联用的方法对所述不同组别的肽段组合物，分别进行检测；
[0012]比较不同组别的肽段组合物的检测结果，以对不同组别的待测猪组织样品中猪细胞色素P450酶CYP2E1进行相对定量。
[0013]在其中一些实施例中，所述待测猪组织样品为待测猪肝脏样品。
[0014]在其中一些实施例中，所述液相色谱
‑
质谱联用的方法采用高效液相色谱
‑
串联质谱联用仪。
[0015]在其中一些实施例中，所述液相色谱
‑
质谱联用的测定条件如下：
[0016]色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相A：0.1％的甲酸水溶液，流动相B：0.1％的甲酸乙腈水溶液；梯度洗脱程序：0～2min，5％～10％B液；2～45min，10％～30％B液；45～55min，30％～100％B液；55～60min，100％B液；流速：250～450nl/min；
[0017]质谱条件：正离子模式采集数据；一级质谱扫描范围：300
‑
1800m/z，质谱分辨率：60000(m/z 200)，AGC target：3e6，Maximum IT：200ms；MS2 scans：20；Isolation window：1.6Th，质谱分辨率：30000(m/z 200)，AGC target：3e6，Maximum IT：120ms，MS2 Activation Type：HCD，碰撞能量：27V。
[0018]在其中一些实施例中，所述检测结果包括具有同位素标记的肽段组合物的检测结果；所述同位素标记的内标肽段为PRTC：SAAGAFGPELSR(
13
C
6 15
N4,+10Da)。
[0019]本申请实施例还提供一种用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的试剂盒，所述试剂盒中含有用于检测如前任一项所述的肽段组合物的试剂。
[0020]在其中一些实施例中，所述试剂包括第一肽段标准品、第二肽段标准品、第三肽段标准品、二硫苏糖醇溶液、碘乙酰胺溶液和胰蛋白酶液。
[0021]从上面所述可以看出，本申请提供的用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物、方法及试剂盒，通过包含第一肽段、第二肽段和第三肽段的肽段组合物，能够在蛋白水平上，使用液质联用仪特异检测并对CYP2E1定量分析，能够快速高效的定量检测猪源CYP2E1，提高了猪源CYP2E1的检测通量和效率。相较于基于抗体的Western Blot法具有更强的特异性，避免了制备CYP2E1单克隆抗体的繁琐步骤，冗长周期和高昂费用，还避免了制备CYP2E1多克隆抗体的交叉反应较为严重，成功率低等问题。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本申请或相关技术中的技术方案，下面将对实施例或相关技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为本申请实施例的相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的方法的流程图；
[0024]图2为实施例2中的第一肽段FIDLIPSNLPHEATR的二级质谱图；
[0025]图3为实施例2中的第二肽段EAHFLLEALR的二级质谱图；
[0026]图4为实施例2中的第三肽段GEIPTFQVHK二级质谱图；
[0027]图5为实施例2中的各处理组和对照组的CYP2E1蛋白相对定量结果箱线图；
[0028]图6为对比例1中的各处理组和对照组的CYP2E1蛋白相对定量结果箱线图。
具体实施方式
[0029]为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本申请进一步详细说明。
[0030]需要说明的是，除非另外定义，本申请实施例使用的技术术语或者科学术语应当为本申请所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本申请实施例中使用的“第一”、“第二”以及类似的词语并不表示任何顺序、数量或者重要性，而本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物，其特征在于，包括第一肽段、第二肽段和第三肽段；其中，所述第一肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述第二肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述第三肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。2.根据权利要求1所述的用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物，其特征在于，所述第一肽段的母离子为861.96m/z，子离子为1234.65m/z，1121.57m/z和710.36m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第二肽段的母离子为599.83m/z，子离子为998.58m/z，861.52m/z和714.45m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第三肽段的母离子为578.31m/z，子离子为856.47m/z，658.37m/z和284.17m/z，子离子对应的碰撞能量为27V。3.一种用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的方法，其特征在于，应用权利要求1～2任一项所述的肽段组合物，对猪细胞色素P450酶CYP2E1进行相对定量分析。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述对猪细胞色素P450酶CYP2E1进行相对定量分析包括：提供...

【专利技术属性】
技术研发人员：高杰，朴香淑，郝月，顾先红，张名媛，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：