胰岛素的检测方法以及检测试剂盒技术

本发明专利技术提供能够检测试样所包含的微量胰岛素的手段。本发明专利技术涉及胰岛素的检测方法，具有：将样本添加到表面固定有特异性识别胰岛素的部位的胰岛素结合蛋白质而成的电极来检测伴随胰岛素与上述胰岛素结合蛋白质的复合体形成的电化学变化，上述胰岛素结合蛋白质包含第一区域以及第二区域，上述第一区域包含胰岛素受体的α－CT区段且不包含胰岛素受体的β亚基，上述第二区域包含胰岛素受体的L1结构域并且不包含胰岛素受体的β亚基，上述第一区域以及上述第二区域的任意一方固定于上述电极的表面。的表面。的表面。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】胰岛素的检测方法以及检测试剂盒


[0001]本公开涉及胰岛素的检测方法以及检测试剂盒。

技术介绍

[0002]糖尿病是由于胰岛素的作用降低或分泌不足而导致血液中的葡萄糖浓度(血糖值)较高的状态持续的疾病。若高血糖状态长期间持续，则不仅产生肾病、视网膜病、神经障碍这样的微血管障碍，而且成为心肌梗塞、脑梗塞之类的大血管障碍的危险因素。因此，为了优化糖尿病的诊断、预防以及治疗，有效的是不仅把握血糖值，而且把握与糖尿病有关的因素的血中成分浓度。例如，日本特开2016－109666号公报中报告了一种胰岛素的检测方法，包括：使用包含胰岛素受体的α－CT区段以及发光物质或者荧光物质的第一复合体和包含胰岛素受体的L1结构域以及荧光物质或者发光物质的第二复合体来检测由在发光物质与荧光物质之间产生的发光共振能量转移而产生的荧光。

技术实现思路

[0003]根据上述日本特开2016－109666号公报所记载的方法，能够精度良好地对胰岛素进行定量，但胰岛素检测限浓度为50nM或800nM(第[0148]段)。另一方面，生物试样中的胰岛素浓度明显低于上述浓度，要求能够检测更低浓度的胰岛素的方法。
[0004]因此，本公开是鉴于上述事情而完成的，其目的在于提供能够检测试样所包含的微量胰岛素的手段。
[0005]本专利技术人等为了解决上述的问题进行了深入研究。其结果发现，通过使用固定有具备胰岛素受体的α－CT区段以及L1结构域的胰岛素结合蛋白质的电极对胰岛素进行电化学检测，能够解决上述课题，从而完成了本专利技术。<br/>[0006]即，上述目的能够通过如下的胰岛素的检测方法而实现，即，该胰岛素的检测方法具有：将样本添加到电极来检测伴随胰岛素与上述胰岛素结合蛋白质的复合体形成的电化学变化，上述电极通过表面固定有特异性识别胰岛素的胰岛素结合蛋白质而成，上述胰岛素结合蛋白质包含第一区域和第二区域，上述第一区域包含胰岛素受体的α－CT区段且不包含胰岛素受体的β亚基，上述第二区域包含胰岛素受体的L1结构域且不包含胰岛素受体的β亚基，上述第一区域以及上述第二区域的任意一方固定于上述电极的表面。
附图说明
[0007]图1是表示实施例1的电极的概略图。
[0008]图2是表示实施例2的电极的概略图。
[0009]图3是使用实施例1的电极的胰岛素浓度的测定结果。
[0010]图4是使用实施例2的电极的胰岛素浓度的测定结果。
具体实施方式
[0011]以下，对本公开的实施方式进行说明。此外，本公开并不仅限定于以下的实施方式。
[0012]本公开的第一方式是一种胰岛素的检测方法，具有：将样本添加到电极来检测伴随胰岛素与上述胰岛素结合蛋白质的复合体形成的电化学变化，上述电极通过表面固定有特异性识别胰岛素的胰岛素结合蛋白质而成，上述胰岛素结合蛋白质包含第一区域和第二区域，上述第一区域包含胰岛素受体的α－CT区段且不包含胰岛素受体的β亚基，上述第二区域包含胰岛素受体的L1结构域且不包含胰岛素受体的β亚基，上述第一区域以及上述第二区域的任意一方固定于上述电极的表面。
[0013]根据本公开的方法，能够检测试样所包含的微量胰岛素。
[0014]本公开的第二方式是一种胰岛素的检测试剂盒，具有电极，该电极通过表面固定有特异性识别胰岛素的部位的胰岛素结合蛋白质而成，上述胰岛素结合蛋白质包含第一区域和第二区域，上述第一区域包含胰岛素受体的α－CT区段且不包含胰岛素受体的β亚基，上述第二区域包含胰岛素受体的L1结构域且不包含胰岛素受体的β亚基，上述第一区域以及上述第二区域的任意一方固定于上述电极的表面。
[0015]根据本公开的检测试剂盒，能够检测试样所包含的微量胰岛素。
[0016]在本说明书中，也将“胰岛素受体的α－CT区段”简称为“α－CT区段”或者“α－CT”或者“αCT”。另外，也将“胰岛素受体的β亚基”简称为“β亚基”。进而，也将“包含胰岛素受体的α－CT区段且不包含胰岛素受体的β亚基的第一区域”简称为“第一区域”。同样地，在本说明书中，也将“胰岛素受体的L1结构域”简称为“L1结构域”或者“L1”。另外，也将“包含胰岛素受体的L1结构域且不包含胰岛素受体的β亚基的第二区域”简称为“第二区域”。进而，也将表面固定有特异性识别胰岛素的部位的胰岛素结合蛋白质前的电极简称为“电极”。也将特异性识别胰岛素的部位的胰岛素结合蛋白质固定于表面而成的电极简称为“胰岛素结合蛋白质固定化电极”。
[0017]在本说明书中，表示范围的“X～Y”包含X以及Y，是指“X以上且Y以下”。“nM”是指nmol/L。另外，只要没有特别说明，操作以及物性等的测定在室温(20～25℃)的条件下进行。
[0018]＜胰岛素的检测方法(本公开的第一方式)＞
[0019]本公开的第一方式是一种胰岛素的检测方法，具有：将样本添加到电极来检测伴随胰岛素与上述胰岛素结合蛋白质的复合体形成而产生的电化学变化，上述电极通过表面固定有特异性识别胰岛素的胰岛素结合蛋白质而成，上述胰岛素结合蛋白质包含第一区域以及第二区域，上述第一区域以及上述第二区域的任意一方固定于上述电极的表面。
[0020]根据本公开的方法，通过固定于电极表面的胰岛素结合蛋白质与胰岛素特异性结合，形成胰岛素与胰岛素结合蛋白质的复合体(以下，也称为“胰岛素－胰岛素结合蛋白质复合体”)。即，本公开的方法通过在一次结构中将具有第一区域以及第二区域的胰岛素结合蛋白质固定化到电极表面，从而能够高效地捕捉伴随胰岛素与胰岛素结合蛋白质的复合体形成的电极表面的变化。对于基于该胰岛素结合蛋白质的胰岛素的识别机制，首先，α－CT区段识别并结合胰岛素。接下来，L1结构域识别胰岛素和与胰岛素结合的α－CT区段，由此形成胰岛素－胰岛素结合蛋白质复合体。因此，在本公开的方法中，胰岛素与胰岛素结合
蛋白质至少在胰岛素－α－CT区段间、胰岛素－α－CT区段－L1结构域间结合，由此形成复合体。在该复合体形成的过程中，胰岛素结合蛋白质发生结构变化。若对胰岛素结合蛋白质固定化电极施加电压，则能够检测伴随胰岛素的识别
·
结合的胰岛素结合蛋白质的结构变化引起的电极表面状态的变化。更详细而言，若形成复合体，则与胰岛素结合蛋白质未与胰岛素结合的情况相比，不易流过电流(例如，电阻值上升)。通过电化学方法(例如，使用[Fe(CN)6]－4
/[Fe(CN)6]－3
的电化学阻抗谱)将该状态变化作为电变化(例如，阻抗的变化)来测定，从而即使是微量(例如，小于50nM)也能够检测胰岛素(参照图3、图4)。另外，根据上述电变化，根据需要进行适当的校正，由此能够算出胰岛素浓度。因此，根据本公开的方法，能够对样本中的胰岛素浓度进行定量。另外，基于电化学方法的检测除了能够在非常短的时间(例如，1～30分种左右)执行之外，与光学方法相比，还能够使检测设备成为紧凑设计。因此，本公开的方法适于诊所、家庭、医院的诊室、床边、并且手术室、ICU等诊疗现场进行的即时检验本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种胰岛素的检测方法，其中，具有：将样本添加到电极来检测伴随胰岛素与胰岛素结合蛋白质的复合体形成的电化学变化，上述电极通过表面固定有特异性识别胰岛素的上述胰岛素结合蛋白质而成，上述胰岛素结合蛋白质包含第一区域和第二区域，上述第一区域包含胰岛素受体的α－CT区段且不包含胰岛素受体的β亚基，上述第二区域包含胰岛素受体的L1结构域且不包含胰岛素受体的β亚基，上述第一区域以及上述第二区域的任意一方固定于上述电极的表面。2.根据权利要求1所述的方法，其中，上述第一区域以及上述第二区域经由连接体连结，且上述第二区域固定于上述电极的表面。3.根据权利要求1所述的方法，其中，上述第一区域以及上述第二区域经由连接体连结，且上述...

【专利技术属性】
技术研发人员：舟桥久景，黑田章夫，佐藤嘉哉，
申请(专利权)人：泰尔茂株式会社，
类型：发明
国别省市：