一种简单快速提取核酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种简单快速提取核酸的方法，具体涉及生物技术领域。所述方法包括向离心管中加入样品，离心，去上清；向离心管中加入细胞裂解液，作用；离心作用后的溶液，弃去红色上清，用PBS缓冲液反复洗脱；继续向离心管中加入含蛋白酶K的裂解液，温浴作用；取温浴后的离心管离心，取上清，加入95％乙醇，轻轻摇匀，观察至有白色絮状物，离心，弃去上清；加入75％乙醇洗脱，离心，去上清，反复洗脱；收集弃去上清部分，自然晾干，静置，加入蒸馏水溶解复溶，即得核酸溶液。本发明专利技术提取核酸的方法简单，对设备要求低，快速，能够满足设备不足时候对核酸的快速提取。的快速提取。的快速提取。

【技术实现步骤摘要】
一种简单快速提取核酸的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种简单快速提取核酸的方法。

技术介绍

[0002]核酸提取是分子生物学研究的重要基础。一般来说，成功的核酸提取需要四个重要的步骤：有效地破坏细胞或组织、核蛋白复合物的变性、核酸酶的失活和远离污染。提取出的核酸的质量、完整性和数量将直接影响所有后续科研的结果。
[0003]目前，国内外采供血机构在用的核酸检测(Nucleic Acid Test,NAT)方法及系统都是从几百微升到1ml中提取病毒核酸进行检测，但对于很多病毒载量低的标本，并不能有效提取出足够量的核酸，直接影响检测结果，影响临床用血安全。已有报道的针对低病毒载量标本的核酸提取方法有PEG富集法和超高速离心法。其中PEG富集法需要4℃过夜，而超高速离心法需要在4℃、250 000g条件下离心3h，这两种方法耗时长、对设备要求高，难以普及应用。

技术实现思路

[0004]为此，本专利技术提供一种简单快速提取核酸的方法，以解决现有核酸提取耗时长，对设备要求高等问题。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]根据本专利技术的一方面提供一种简单快速提取核酸的方法，包括：
[0007]S1，向离心管中加入样品，离心，去上清；
[0008]S2，向离心管中加入细胞裂解液，作用；
[0009]S3，离心作用后的溶液，弃去红色上清，用PBS缓冲液反复洗脱；
[0010]S4，继续向离心管中加入含蛋白酶K的裂解液，温浴作用；
[0011]S5，取温浴后的离心管离心，取上清，加入95％乙醇，轻轻摇匀，观察至有白色絮状物，离心，弃去上清；
[0012]S6，加入75％乙醇洗脱，离心，去上清，反复洗脱；
[0013]S7，收集弃去上清部分，自然晾干，静置，加入蒸馏水溶解复溶，即得核酸溶液。
[0014]进一步的，所述S1中，离心条件为2500rpm离心5min。
[0015]进一步的，所述S2中，细胞裂解液含有8.29g/L氯化铵、1.0g/L碳酸氢钠、0.0372g/L EDTA
‑
Na，pH为7.2的水溶液；
[0016]和/或，作用时间5min。
[0017]进一步的，所述S3中，离心条件为4000rpm离心5min；
[0018]和/或，所述反复洗脱的次数不少于2次。
[0019]进一步的，所述S4中，温浴条件为56℃温浴20min。
[0020]进一步的，所述S5中，离心条件均为14000rpm离心10min。
[0021]进一步的，所述S6中，洗脱后离心条件为14000rpm离心10min，
[0022]和/或，反复洗脱的次数不少于2次。
[0023]进一步的，所述S7中，静置时间为10min。
[0024]进一步的，所述方法还包括复溶后的核酸溶液于
‑
20℃保存。
[0025]根据本专利技术的另一方面提供的上述简单、快速提取核酸的方法用于核酸的快速提取。
[0026]本专利技术具有如下优点：
[0027]本专利技术提取核酸的方法简单，对设备要求低，快速，能够满足设备不足时候对核酸的快速提取。
[0028]本专利技术能够大量的提取核酸，增加了提取核酸标本的体积，大大提高了提取的核酸量，有利于提高核酸检测效率，避免漏检。
[0029]本专利技术提取核酸的方法在保证样品中的核酸完全提取的前提下，合理使用试剂，并对试剂用量进行了优化，节省了成本，省时省力。
附图说明
[0030]为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
[0031]本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本专利技术可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本专利技术所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本专利技术所揭示的
技术实现思路
得能涵盖的范围内。
[0032]图1为本专利技术提供的实施例1、对比例1和对比例2核酸溶液对比图；
[0033]图2为本专利技术提供的实施例1、对比例1和对比例2核酸琼脂糖凝胶沉降对比图。
具体实施方式
[0034]以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0035]溶液Ⅰ：8.29g/L氯化铵、1.0g/L碳酸氢钠、0.0372g/L EDTA
‑
Na，pH＝7.2；
[0036]溶液Ⅱ：7.47g/L氯化铵、2.6g/LTris(1M盐酸溶解)，pH＝7.2。
[0037]实施例1
[0038]本实施例提供一种简单、快速提取核酸的方法
[0039]1.取血细胞100μL于6支EP管中，2500rpm离心5min弃去上清；
[0040]2.去色素：加入1000μL的溶液Ⅰ，作用5min。
[0041]3.离心洗脱：4000rpm离心5min弃去红色上清，PBS洗脱2次；
[0042]4.裂解：加入裂解液(含蛋白酶K)200μL，56℃温浴20min；
[0043]5.离心转移：14000rpm离心10min，取上清200μL于新的EP管中；
[0044]6.粗提：加入300μL的95％乙醇，轻轻摇匀，观察至有白色絮状物，14000rpm离心10min，弃去上清；
[0045]7.洗脱：加入75％乙醇500μL轻轻洗脱，14000rpm离心10min，洗脱2次；
[0046]8.干燥：自然晾干，静置10min；
[0047]9.溶解：加入100μL的蒸馏水溶解，置于
‑
20℃保存。
[0048]实施例2
[0049]本实施例提供一种简单、快速提取核酸的方法
[0050]1.取血细胞100μL于6支EP管中，2500rpm离心5min弃去上清；
[0051]2.去色素：加入1000μL的溶液Ⅰ，作用5min。
[0052]3.离心洗脱：4000rpm离心5min弃去红色上清，PBS洗脱3次；
[0053]4.裂解：加入裂解液(含蛋白酶K)200μL，56℃温浴20min；
[0054]5.离心转移：14000rpm离心10min，取上清200μL于新的EP管中；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种简单快速提取核酸的方法，其特征在于，包括：S1，向离心管中加入样品，离心，去上清；S2，向离心管中加入细胞裂解液，作用；S3，离心作用后的溶液，弃去红色上清，用PBS缓冲液反复洗脱；S4，继续向离心管中加入含蛋白酶K的裂解液，温浴作用；S5，取温浴后的离心管离心，取上清，加入95％乙醇，轻轻摇匀，观察至有白色絮状物，离心，弃去上清；S6，加入75％乙醇洗脱，离心，去上清，反复洗脱；S7，收集弃去上清部分，自然晾干，静置，加入蒸馏水溶解复溶，即得核酸溶液。2.根据权利要求1所述一种简单快速提取核酸的方法，其特征在于，所述S1中，离心条件为2500rpm离心5min。3.根据权利要求1所述一种简单快速提取核酸的方法，其特征在于，所述S2中，细胞裂解液含有8.29g/L氯化铵、1.0g/L碳酸氢钠、0.0372g/L EDTA
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Na，pH为7.2的水溶液；和/或，作用时间5min。4.根据权利要求1所述一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄波，周芸，张国勇，
申请(专利权)人：黄波，
类型：发明
国别省市：