相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的肽段组合物及应用制造技术

本申请提供一种相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的肽段组合物、方法及试剂盒。相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的肽段组合物，包括第一肽段、第二肽段、第三肽段、第四肽段和第五肽段；第一肽段的氨基酸序列如SEQID NO:1所示；第二肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；第三肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；第四肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；第五肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。能够在蛋白水平上，快速高效的定量检测猪源FTH1，提高了猪源FTH1的检测通量和效率。相较于基于抗体的Western Blot法具有更强的特异性。Blot法具有更强的特异性。Blot法具有更强的特异性。

【技术实现步骤摘要】
相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的肽段组合物及应用


[0001]本申请涉及生化分析
，尤其涉及一种相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的肽段组合物及应用。

技术介绍

[0002]在养猪业中，当猪受到应激源刺激，体内氧化
‑
抗氧化平衡系统被破坏，氧化自由基及其活性衍生物(Reactive oxygen species，ROS)急剧增加，造成机体的氧化应激。氧化应激可通过引起猪肝脏损伤导致机体健康水平和产品品质下降，给养猪业带来经济损失。
[0003]铁蛋白重链(ferritin heavy chain，FTH1)具有铁氧化酶活性，在猪体内铁的储存和运输中发挥重要作用，可将Fe
2+
氧化成Fe
3+
，清除亚铁离子介导的自由基反应，保护细胞免受氧化性损伤，控制猪的细胞稳态。在猪体内，铁对正常细胞生长、增殖和能量代谢至关重要，而过量的铁是有害的，例如过量Fe
2+
可以通过Fenton反应产生过量的ROS，打破猪的细胞中的氧化平衡，导致氧化应激，引起DNA、蛋白质和脂质等损伤。因此，FTH1蛋白与猪的氧化应激息息相关。
[0004]因此，亟需深入研究猪的铁蛋白重链FTH1的相对定量分析方法。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本申请的目的在于提出一种相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的肽段组合物及应用。
[0006]基于上述目的，本申请提供了一种相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的肽段组合物，包括第一肽段、第二肽段、第三肽段、第四肽段和第五肽段；
[0007]其中，所述第一肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述第二肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述第三肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述第四肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述第五肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。
[0008]在其中一些实施例中，所述第一肽段的母离子为438.76m/z，子离子为763.43m/z，616.37m/z和503.28m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第二肽段的母离子为1187.04m/z，子离子为1374.69m/z，1261.61m/z和1132.56m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第三肽段的母离子为647.86m/z，子离子为839.50m/z，752.47m/z和284.17m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第四肽段的母离子为773.36m/z；子离子为1140.54m/z，1003.48m/z，875.42m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第五肽段的母离子为673.32m/z，子离子为1035.50m/z，922.41m/z和785.35m/z，子离子对应的碰撞能量为27V。
[0009]本申请实施例还提供一种相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的方法，应用如前任一项所述的肽段组合物，对猪铁蛋白重链FTH1进行相对定量分析。
[0010]在其中一些实施例中，所述对猪铁蛋白重链FTH1进行相对定量分析包括：
[0011]提供不同组别的待测猪组织样品，分别进行蛋白提取和蛋白酶解处理，得到不同组别的待测肽段；
[0012]通过液相色谱
‑
质谱联用的方法对所述不同组别的肽段组合物，分别进行检测；
[0013]比较不同组别的肽段组合物的检测结果，以对不同组别的待测猪组织样品中FTH1进行相对定量。
[0014]在其中一些实施例中，所述液相色谱
‑
质谱联用的测定条件如下：
[0015]色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相A：0.1％的甲酸水溶液，流动相B：0.1％的甲酸乙腈水溶液；梯度洗脱程序：0～2min，5％～10％B液；2～45min，10％～30％B液；45～55min，30％～100％B液；55～60min，100％B液；流速：250～450nl/min；
[0016]质谱条件：正离子模式采集数据；一级质谱扫描范围：300
‑
1800m/z，质谱分辨率：60000(m/z 200)，AGC target：3e6，Maximum IT：200ms；MS2scans：20；Isolation window：1.6Th，质谱分辨率：30000(m/z 200)，AGC target：3e6，Maximum IT：120ms，MS2 Activation Type：HCD，碰撞能量：27V。
[0017]在其中一些实施例中，还包括，在所述待测肽段中掺入同位素标记的内标肽段对所述待测肽段进行定量分析。
[0018]在其中一些实施例中，所述同位素标记的内标肽段为PRTC：SAAGAFGPELSR(
13
C
6 15
N4,+10Da)。
[0019]本申请实施例还提供一种用于相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的试剂盒，所述试剂盒中含有用于检测如前任一项所述的肽段组合物的试剂。
[0020]在其中一些实施例中，所述试剂包括第一肽段标准品、第二肽段标准品、第三肽段标准品、第四肽段标准品、第五肽段标准品、蛋白提取试剂和蛋白酶解试剂。
[0021]从上面所述可以看出，本申请提供的相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的肽段组合物、方法及试剂盒，通过包含第一肽段、第二肽段、第三肽段、第四肽段和第五肽段的肽段组合物，能够在蛋白水平上，使用液质联用仪特异检测并对FTH1定量分析，能够快速高效的定量检测猪源FTH1，提高了猪源FTH1的检测通量和效率。相较于基于抗体的Western Blot法具有更强的特异性，避免了制备FTH1单克隆抗体的繁琐步骤，冗长周期和高昂费用，还避免了制备FTH1多克隆抗体的交叉反应较为严重，成功率低等问题。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本申请或相关技术中的技术方案，下面将对实施例或相关技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为本申请实施例的相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的方法的流程图；
[0024]图2为实施例2中第一肽段IFLQDIK的二级质谱图；
[0025]图3为实施例2中的第二肽段NDPHLCDFIETHYLDEQVK的二级质谱图；
[0026]图4为实施例2中的第三肽段NVNQSLLELHK二级质谱图；
[0027]图5为实施例2中的第四肽段QNYHQDSEAAINR的二级质谱图；
[0028]图6为实施例2中的第五肽段YFLHQSHEER的二级质谱图；
[0029]图7为实施例2中的各处理组和对照组的FTH1蛋白相对定量结果箱线图；
[0030]图8为对比例2中的各处理组和对照组的FTH1蛋白相对定量结果箱线图。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的肽段组合物，其特征在于，包括第一肽段、第二肽段、第三肽段、第四肽段和第五肽段；其中，所述第一肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述第二肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述第三肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述第四肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述第五肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。2.根据权利要求1所述的相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的肽段组合物，其特征在于，所述第一肽段的母离子为438.76m/z，子离子为763.43m/z，616.37m/z和503.28m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第二肽段的母离子为1187.04m/z，子离子为1374.69m/z，1261.61m/z和1132.56m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第三肽段的母离子为647.86m/z，子离子为839.50m/z，752.47m/z和284.17m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第四肽段的母离子为773.36m/z；子离子为1140.54m/z，1003.48m/z，875.42m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第五肽段的母离子为673.32m/z，子离子为1035.50m/z，922.41m/z和785.35m/z，子离子对应的碰撞能量为27V。3.一种相对定量分析猪铁蛋白重链FTH1的方法，其特征在于，应用权利要求1～2任一项所述的肽段组合物，对猪铁蛋白重链FTH1进行相对定量分析。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述对猪铁蛋白重链FTH1进行相对定量分析包括：提供不同组别的待测猪组织样品，分别进行蛋白提取和蛋白酶解处理，得到不同组别的待测肽段；通过液相色谱
‑
质谱联用的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾先红，高杰，郝月，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：