一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法及培养基技术

本发明专利技术涉及一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法及培养基，该方法将诱导出的不定根接种至已灭菌的含有SH培养基的三角瓶中，进行液体悬浮培养；其中，所述SH培养基包括3/4SH、3％蔗糖、3PPM IBA、0.5PPM萘乙酸、0.3PPM激动素；培养条件为：温度23

【技术实现步骤摘要】
一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法及培养基


[0001]本专利技术属于人参培养
，具体涉及一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法及培养基。

技术介绍

[0002]人参皂苷包括原型人参皂苷和稀有人参皂苷，稀有人参皂苷抗癌活性远远强于原型人参皂苷。原型人参皂苷包括Ra、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg1、 Rg2、Rf等，其中的PPD皂苷经过结构修饰可以转化为高附加值的稀有人参皂苷。
[0003]目前，人参不定根的诱导培养技术已日趋成熟，普遍应用的是，将多年生人参的鲜根洗净、消毒、切割后在含有2,4
‑
D、6
‑
BA和蔗糖的MS固体培养基中进行愈伤组织诱导。再将诱导出的愈伤组织移至IBA和蔗糖的MS中诱导、增殖不定根。然而，此种方式培育的人参不定根中皂苷含量偏低。
[0004]现有专利或文件公开了一些提高人参不定根中皂苷含量的方法(例如：中国专利CN 111937748 B公开了的一种提高人参不定根皂苷Rg1和Re含量的培养方法)，但现有方法并没有公开如何针对性的提高PPD皂苷的含量。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法，该培育方法通过循序降温的低温诱导方式，诱导人参不定根中PPD 皂苷的合成，同时通过对培养基的改进，保证低温环境培育时人参不定根能够正常生长，从而提高PPD皂苷中Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd皂苷的含量。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法，该方法将诱导出的不定根接种至已灭菌的含有SH培养基的三角瓶中，进行液体悬浮培养；其中，所述SH培养基包括3/4SH、3％蔗糖、3PPM IBA、0.5PPM萘乙酸、 0.3PPM激动素；
[0008]培养条件为：温度23
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25℃，湿度35
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50％，培养3天；温度20
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22℃，湿度35
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50％，培养3天；温度17
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19℃，湿度35
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50％，培养3天；温度14
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16℃，湿度30
‑
45％，培养4天；温度11
‑
13℃，湿度30
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45％，培养4天，温度8
‑ꢀ
10℃，湿度30
‑
45％，培养4天；全部为暗培。
[0009]作为本专利技术的优选，中期培育结束后，需要将培育的不定根接种到一个已灭菌的生物反应器中继续进行培育。
[0010]作为本专利技术的优选，生物反应器培育时采用SH培养基，所述SH培养基包括3/4SH、3％蔗糖、5PPM IBA、3.5N的NaOH 1mL；培养时，开启空气阀，控制通气量为0.5vvm，温度23
‑
25℃，湿度40％，培养4周，全部为暗培。
[0011]本专利技术的第二个目的在于提供一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培养基，该培养基为SH培养基，包括3/4SH、3％蔗糖、3PPM IBA、 0.5PPM萘乙酸、0.3PPM激动
素，培养时采用循序降温的低温液体悬浮培养。
[0012]本专利技术的优点和有益效果：
[0013](1)本专利技术提供的培育方法在不定根中期培育时通过缓慢降温的低温诱导方式使最终获得的不定根中的Rb1、Rb2、Rb3、Rd的含量显著提高，同时向 SH培养基中加入IBA、蔗糖、萘乙酸、激动素，IBA与萘乙酸、激动素依一定比例混用后，能够避免低温环境下对人参不定根的生长产生影响。
[0014](2)本专利技术提供的培养方法所获得的人参皂苷中PPD皂苷含量明显增加，而PPD皂苷经过结构修饰可以转化为高附加值的稀有人参皂苷；因此，将本专利技术培养的人参不定根作为原料，能够提高高附加值的稀有人参皂苷的产量。
[0015](3)本专利技术提供的培育方法简单，周期短，已经用于规模化生产人参不定根。
附图说明
[0016]附图作为本专利技术的一部分，用来提供对本专利技术的进一步的理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，但不构成对本专利技术的不当限定。显然，下面描述中的附图仅仅是一些实施例，对于本领域普通技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图。在附图中：
[0017]图1为实施例1愈伤组织诱导示意图；
[0018]图2为实施例1不定根诱导示意图；
[0019]图3为实施例1不定根中期培育示意图。
具体实施方式
[0020]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。
[0021]实施例1
[0022]本专利技术一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法，该方法需要将诱导出的不定根接种至已灭菌的含有SH培养基的三角瓶中，进行液体悬浮培养；因此，在进行中期培育时，需要获取诱导的不定根，具体获取方式如下：
[0023](1)外植体消毒：在自来水下冲洗人参30s，放在干净的白钢桶中，装入一定量的乙醇，乙醇浓度为70％，乙醇的量使人参完全浸没即可(此过程主要目的是为了洗去人参表面的灰尘及泥土，浸泡清洗1min左右即可)；然后利用事先灭菌的无菌水洗涤数次(主要目的为洗去人参表面残留的乙醇溶液)，之后转移至超净工作台中，把人参浸泡在浓度为2％的NaClO溶液中，浸泡时间为15
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20min，浸泡时间的长短依据人参的大小、粗细而定，此过程中人参的表皮的颜色逐渐变白，浸泡完成后，使用无菌水洗涤数次，洗去表面的NaClO溶液，然后放在无菌滤纸上除去人参表面多余的水分。
[0024](2)愈伤组织诱导：超净工作台中将除去表面水分的人参放在切割盘中，按照根茎(芦头)，主根(表皮)，细根分别进行切片；切片的大小大约控制在1cm左右的长度。采用易于诱导愈伤组织的MS培养基，所述MS培养基中添加一定量的生长素、细胞分裂素、蔗糖，所述生长素为2，4－二氯苯氧乙酸(2,4
‑
D)，细胞分裂素为6－苄基氨基嘌呤(6
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BA)，添加量分别为2,4
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D为 1PPM,6
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BA为0.5PPM，蔗糖的浓度为30g/L；将培养基放在灭菌锅中灭菌(灭菌条
件：121℃，15min)，使用温度在45℃为宜，将培养液缓缓倒入培养基盖上盖子，待培养基凝固后将人参切片(3
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8片)平放到灭菌后培养皿中，放入培养箱中培养。培养条件为：温度23
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25℃、湿度40％、光照时间Light:8h， Dark:16h，结果如图1所示。
[0025](3)不定根的诱导：超净工作台中将生长较好本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高人参不定根中PPD皂苷含量的不定根中期培育方法，其特征在于，该方法将诱导出的不定根接种至已灭菌的含有SH培养基的三角瓶中，进行液体悬浮培养；其中，所述SH培养基包括3/4SH、3％蔗糖、3PPMIBA、0.5PPM萘乙酸、0.3PPM激动素；培养条件为：温度23
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25℃，湿度35
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50％，培养3天；温度20
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22℃，湿度35
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50％，培养3天；温度17
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19℃，湿度35
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50％，培养3天；温度14
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16℃，湿度30
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45％，培养4天；温度11
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13℃，湿度30
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45％，培养4天，温度8
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【专利技术属性】
技术研发人员：姜雯雯，金立华，金鑫，李晓珍，
申请(专利权)人：珲春华瑞参业生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：