包含反相微胶乳的疫苗佐剂制造技术

披露包含至少一个反相微胶乳的疫苗佐剂，该反相微胶乳包含至少一种油、至少一种表面活性剂、至少一种聚合物，例如像以碱金属盐或铵盐形式完全或部分被中和的聚丙烯酸酯，该疫苗佐剂可通过过滤或通过高压釜加热完全灭菌，并且可与仅包含疫苗抗原的水相一步乳化。且可与仅包含疫苗抗原的水相一步乳化。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含反相微胶乳的疫苗佐剂
[0001]本专利技术涉及特定的疫苗佐剂、其制备和包含该疫苗佐剂的疫苗。
[0002]疫苗组合物通常由抗原、免疫原性化合物和疫苗佐剂组成，该免疫原性化合物诱导对目的疾病的保护，并且该疫苗佐剂能够放大接种疫苗的动物对该抗原的免疫应答。特别地，在疫苗组合物中使用佐剂可以增加由一剂疫苗赋予的体液或细胞免疫应答的强度，从而可以确保更好的保护水平；延长由一剂疫苗赋予的保护期；以较低的抗原剂量获得与由不使用佐剂的全剂量赋予的功效相当的功效；减少确保疫苗保护所需的免疫次数。
[0003]过去已开发各种类型的免疫佐剂。在用于获得免疫佐剂的现有技术方案中，可以提及包含至少一种油相和至少一种水相的乳剂(例如像弗氏佐剂)、脂质体、合成免疫刺激聚合物、生物来源的佐剂(皂苷、壳聚糖、细胞因子、寡核苷酸等)或不溶于水的矿物盐(例如非常常用的氢氧化铝)。
[0004]油性疫苗佐剂由油和表面活性剂构成，并且可以配制呈乳剂形式的疫苗，这些乳剂的水相含有疫苗抗原。在使用的油中，可以提及植物来源的油、矿物油、合成油和动物来源的油。存在于油性佐剂中的表面活性剂是具有亲水特征的乳化表面活性剂，其特征在于亲水
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亲油平衡(HLB)值在8和19之间，更特别地在8和15之间。这种亲水表面活性剂可以由以下组成，例如，烷基多糖苷或烷基多糖苷的混合物；皂苷；卵磷脂；聚氧乙烯化烷醇；包含聚氧乙烯和聚氧丙烯嵌段的聚合物；通过脂肪酸(有利地是在20℃下为液体的脂肪酸)与糖多元醇(例如像山梨糖醇、甘露醇或甘油)缩合获得的酯；通过脂肪酸(有利地是在20℃下为液体的脂肪酸)与乙氧基化糖缩合获得的酯。
[0005]存在于油性佐剂中的表面活性剂也可以是“油包水”型的乳化表面活性剂，表示具有足够低的HLB值(优选大于或等于1且小于8.0)用于获得油包水乳剂的表面活性剂，其中水相分散在亲油脂肪相中。在油包水表面活性剂中，可以提及包含12至22个碳原子、任选地被一个或多个羟基基团取代的饱和或不饱和、直链或支链的脂肪族羧酸的脱水己糖醇酯，或这些酯的混合物。
[0006]获得的疫苗乳剂可以是油包水型、水包油型或水包油包水型，特别地取决于使用的表面活性剂体系的性质。特别地，与无佐剂疫苗或与用水性佐剂(例如氢氧化铝)作为佐剂的疫苗相比，油包水乳剂类型的佐剂在延长的时期内可以显著增加针对疫苗抗原的体液和细胞应答。这种长期应答可以减少疫苗注射次数。油包水乳剂类型的佐剂尤其用于制备疫苗组合物，这些疫苗组合物用于牛、绵羊、山羊、鱼和禽类物种针对病毒、细菌或寄生虫病原体的疫苗接种。
[0007]一些合成聚合物也具有免疫刺激特性并且已经用作疫苗佐剂。
[0008]在用作兽用疫苗佐剂的免疫刺激聚合物中，尤其可以提及聚氧乙烯和聚氧丙烯(POE
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POP)的嵌段共聚物、聚乙烯亚胺、其呈钠形式的丙烯酸均聚物、丙烯酸和丙烯酸酯的共聚物(也称为卡波姆)。由丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯获得的聚合物可以根据合适溶剂中的沉淀聚合方法或通过反相乳剂聚合来合成，如以编号FR 2922767 A1公开的专利申请中所述。在丙烯酸聚合物中，将提及例如由路博润(Lubrizol)公司以商标名CARBOPOL
TM
销售的聚合物，特别地在以编号US 5373044、US 2798053公开的美国专利和欧
洲专利申请EP 0301532 A2中描述。
[0009]卡波姆(或丙烯酸聚合物)以大约百分之一的重量含量用作疫苗佐剂，并且其稀释液呈易于注射的液体和半透明疫苗的形式。
[0010]这些聚合佐剂具有非常好的安全性并且诱导针对相关抗原的强烈短期应答，并且尤其用于猪的疫苗接种，例如在以编号WO 2007094893公开的专利申请中描述)。
[0011]有希望的研究途径在于将这些聚合物佐剂与乳剂型油性佐剂组合配制，目的是结合两种类型佐剂的免疫刺激特性以获得性能改善的佐剂，例如在以编号US 3919411公开的美国专利中描述。
[0012]然而，将这两种技术(即油性佐剂和聚丙烯酸酯凝胶)组合以获得含有聚丙烯酸酯、稳定且可由使用者直接乳化的即用型聚合物油性免疫佐剂是一项艰巨的挑战，尤其是在佐剂的稳定性和灭菌方面。
[0013]对于本专利技术的目的，“即用型聚合物油性免疫佐剂”被理解为意指由含有至少一种表面活性剂和一种聚合物的油相组成的混合物，该混合物已经灭菌并且可以通过在乳化步骤中与水性抗原介质混合而立即使用。当所述混合物与水相(含有抗原和/或活性成分)接触时，由于使用低剪切或高剪切搅拌体系而形成乳剂。这种类型的佐剂(下文称为“聚合物油性佐剂”)用于获得随时间稳定的预防性或治疗性疫苗乳剂。
[0014]为了制备聚合物油性佐剂，可以考虑并且确定几种策略，但是每种策略都存在一些技术问题：
[0015]1)第一种方法包括向油相中添加至少一种聚丙烯酸(其中羧基未成盐并且呈粉末形式的聚合物)。在这种情况下，粉末很难以混悬剂的形式在油中稳定，并且随时间可能会出现沉降问题。此外，以这种方式获得的佐剂导致产生酸性乳剂，因为聚合物没有被中和，并且更特别地是在乳化方法过程中不能被中和。所有这些参数意指这一技术方案不能令人满意。
[0016]2)第二种方法包括将水性凝胶(预先通过将至少一种聚丙烯酸添加到水中形成)添加到油性佐剂中。在这种情况下，水性凝胶在油相中的分散具有第一个限制，即不能保证在这一方法结束时获得的混合物的均一性。另外，这种方法具有导致分散相的相分离，然后导致所期望产物的不均一性的主要风险。
[0017]3)第三种方法是分散聚合物佐剂如聚丙烯酸酯，其在油性佐剂中呈反相胶乳的形式(或W/O乳剂，其分散的水相包含聚丙烯酸酯，其羧基官能团已预先以碱金属盐或铵盐的形式中和)。然而，随时间观察到相分离，导致油性佐剂的不均匀性。
[0018]配制即用型聚合物油性佐剂的困难还与掺入疫苗组合物中的每种化合物的灭菌步骤有关。特别地，专用于注射施用的疫苗组合物必须在无菌条件下与抗原在配制前进行灭菌。在可以使用的灭菌方法中，可以注意到在高压釜中对产物进行加热灭菌，随后是在孔径为0.2微米的过滤器上进行过滤灭菌的步骤，或进行γ射线辐照的步骤。
[0019]由于疫苗组合物呈不能灭菌的乳剂形式，因此在用抗原介质乳化的步骤前，有必要通过过滤或通过高压釜加热对油性佐剂进行灭菌。还应注意，油性佐剂中含有的表面活性剂通常与辐照灭菌不相容。
[0020]就目前市场上的聚合物疫苗佐剂而言，其交联结构和增稠特性使得对孔径为0.2微米的灭菌过滤器的过滤操作、和辐照灭菌操作都无法进行。因此，通过高压釜进行加热暴
露是适用于聚合物疫苗佐剂的唯一灭菌技术。由于这一技术需要制备聚合物佐剂在水中的稀释溶液，因此当所述聚合物佐剂与油性佐剂组合时，不能通过这一途径对所述聚合物佐剂进行灭菌。
[0021]从上面指出的要素可以看出，需要如下制备含有聚合物佐剂和油性佐剂组合的无菌疫苗：
[0022]‑
一方面，通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种疫苗佐剂，其至少包含作为反相微胶乳的反相微乳剂，该反相微乳剂包含至少一种聚电解质型聚合物。2.如权利要求1所述的疫苗佐剂，其特征在于该反相微胶乳包含油相、水相、至少一种油包水(W/O)表面活性剂、至少一种水包油(O/W)表面活性剂和阴离子交联聚电解质；其中所述阴离子交联聚电解质包含至少一种交联单体和至少一种亲水单体单元。3.如权利要求2所述的疫苗佐剂，其特征在于该单体单元来源于用碱金属盐或碱土金属盐或铵盐完全或部分盐化的丙烯酸。4.如权利要求3所述的疫苗佐剂，其特征在于用钠盐或铵盐，优选地用钠盐完全或部分盐化该丙烯酸。5.如权利要求2至4中的一项所述的疫苗佐剂，其特征在于该阴离子交联聚电解质包含具有式(1)的单体单元：其中：
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R1选自
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H、
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CH3、
‑
C2H5和一C3H7，优选地
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CH3‑
n在0和50之间，并且
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m在8和22之间。6.如权利要求1至5中的一项所述的疫苗佐剂，其特征在于所述佐剂进一步包含油(H1)、至少一种油包水表面活性剂(E1)和至少一种水包油表面活性剂(E2)。7.如权利要求6所述的疫苗佐剂，其特征在于该疫苗佐剂包含按重量计在1％和10％之间的油包水表面活性剂(E1)，优选地按重量计从3％至8％。8.如权利要求6和7中任一项所述的疫苗佐剂，其特征在于该疫苗佐剂包含按重量计在1％和10％之间的油包水表面活性剂(E2)，优选地从3％至8％。9.如权利要求6至8中的一项所述的疫苗佐剂，该疫苗佐剂每100％其重量包含：a)按重量计从50％至97.5％的所述油(H1)，优选地从60％至90％；b)按重量计从1％至10％的所述油包...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：化工产品开发公司SEPPIC，
类型：发明
国别省市：