一种FZD7鼠源单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种FZD7鼠源单克隆抗体及其制备方法和应用。该FZD7鼠源单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQID NO:1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1所示序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2所示序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。本发明专利技术所获得的FZD7鼠源单克隆抗体在体内外均能与FZD7蛋白结合，具有临床开发价值。具有临床开发价值。

【技术实现步骤摘要】
一种FZD7鼠源单克隆抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种FZD7鼠源单克隆抗体及其制备方法和应用；特别是高效价的FZD7鼠源单克隆抗体，其制备方法和用途；本专利技术同时提供了该抗体的编码核酸分子、表达载体、宿主细胞、以及用于表达该抗体的方法。

技术介绍

[0002]卷曲蛋白Frizzleds(FZDs)受体家族为G蛋白偶联受体(GPCR)F家族成员，有10个亚型，广泛表达于心血管系统等。已有报道证实FZDs在肿瘤中的靶向作用。
[0003]Frizzled7(FZD7)基因定位于染色体2q33，由574个氨基酸组成。其在黑色素瘤、肺癌、食管癌、胃癌、结肠癌、肝癌以及淋巴细胞白血病等均有高表达(Khan NI等，Br J Haematol,2007,138:338
‑
348)。研究证实，FZD7是多种癌症发生过程中必不可少的生物标记物(Yang L等，Oncogene,2011,30(43):4437
‑
4446)，是体内潜在的癌症治疗靶点之一。
[0004]市面上暂无FZDs相关药物上市，全球在研的FZDs最高临床阶段为临床一期，为靶向wnt、FZDs、β
‑
catenin信号的多靶点药物vantictumab，并无特异性靶向FZD7的药物临床在研。因此，针对FZD靶点FZD7亚型开发单抗是十分必要的，具有重要医疗价值。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是为克服现有技术中缺乏有效的FZD7抗体药物的缺陷，提供一种FZD7鼠源单克隆抗体及其制备方法和应用。
[0006]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下。
[0007]本专利技术的技术方案之一为：一种FZD7鼠源单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1所示序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2所示序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
[0008]本专利技术所述的抗体还包含重链恒定区和轻链恒定区；较佳地，所述重链恒定区的亚类为IgG1，且所述轻链恒定区为kappa链。
[0009]在本专利技术一优选实施方案中，所述FZD7鼠源单克隆抗体靶向的目的蛋白含有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
[0010]本专利技术中的所述FZD7鼠源单克隆抗体可存在于全长抗体、Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、Fv、双特异性抗体或多特异性抗体中，即：其可为全长抗体、Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、Fv、双特异性抗体或多特异性抗体的形式。
[0011]本专利技术中，术语“全长抗体”可互换地用来指包含由二硫键相互连接的至少两条重链(HC)和两条轻链(LC)的糖蛋白。每条重链由重链可变区(本专利技术中缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由3个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(本专利技术中缩写为VL)和轻链恒定区(本专利技术中缩写为CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。哺乳动物重链分类为α、δ、ε、γ和μ。哺乳动物轻链分类为λ或κ。包含α、δ、ε、γ和μ重链的免疫球蛋
白分类为免疫球蛋白(Ig)A、IgD、IgE、IgG和IgM。完全抗体形成“Y”形状。Y的茎由两条重链的第二和第三恒定区(并且对于IgE和IgM，第四恒定区)结合在一起组成，并且二硫键(链间)在铰链中形成。重链γ、α和δ具有由三个串联(成一行)Ig结构域构成的恒定区，和用于增加柔性的铰链区；重链μ和ε具有由四个免疫球蛋白结构域构成的恒定区。第二和第三恒定区分别称为“CH2结构域”和“CH3结构域”。Y的每个臂包括结合到单个轻链的可变和恒定区的单个重链的可变区和第一恒定区。轻链和重链的可变区负责抗原结合。
[0012]本专利技术中，“Fab片段”由一条轻链和一条重链的CH1及可变区组成。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。“Fc”区含有包含抗体的CH2和CH3结构域的两个重链片段。两个重链片段由两个或多个二硫键并通过CH3结构域的疏水作用保持在一起。“Fab
’
片段”含有一条轻链和包含VH结构域和CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间区域的一条重链的部分，由此可在两个Fab
’
片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成F(ab
’
)2分子。“F(ab
’
)2片段”含有两条轻链和两条包含CH1和CH2结构域之间的恒定区的部分的重链，由此在两条重链间形成链间二硫键。因此F(ab
’
)2片段由通过两条重链间的二硫键保持在一起的两个Fab
’
片段组成。术语“Fv”意指向抗体的单臂的VL和VH结构域组成的抗体片段，但缺少恒定区。
[0013]本专利技术中，所述的scFv(single chain antibody fragment，单链抗体)可为本领域常规的单链抗体，其包括重链可变区、轻链可变区和15～20个氨基酸的短肽。其中VL和VH结构域通过使其能够产生为单个多肽链的连接体配对形成单价分子[参见，例如，Bird等人，Science 242:423
‑
426(1988)和Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879
‑
5883(1988)]。此类scFv分子可具有一般结构：NH2
‑
VL
‑
接头
‑
VH
‑
COOH或NH2
‑
VH
‑
接头
‑
VL
‑
COOH。合适的现有技术接头由重复的G4S氨基酸序列或其变体组成。例如，可使用具有氨基酸序列(G4S)4或(G4S)3接头，但也可使用其变体。
[0014]术语“多特异性抗体”按其最广义使用，涵盖具有多表位特异性的抗体。这些多特异性抗体包括但不限于：包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的抗体，其中该VH
‑
VL单元具有多表位特异性；具有两个或多个VL和VH区的抗体，每个VH
‑
VL单元与不同的靶点或同一个靶点的不同表位结合；具有两个或更多个单可变区的抗体，每个单可变区与不同的靶点或同一个靶点的不同的表位结合；全长抗体、抗体片段、双特异性抗体(diabodies)、和三抗体(triabodies)、共价或非共价连接在一起的抗体片段等。
[0015]在本专利技术一优选实施方案中，所述FZD7鼠源单克隆抗体的制备方法包括如下步骤：
[0016](1)构建表达载体以表达如SEQ ID NO:4所示FZD7基因的部分DNA序列，得FZD7 linker蛋白；
[0017](2)使用步骤(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种FZD7鼠源单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1所示序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2所示序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的FZD7鼠源单克隆抗体，其特征在于，所述的FZD7鼠源单克隆抗体还包含重链恒定区和轻链恒定区；所述重链恒定区的亚类为IgG1，所述轻链恒定区为kappa链。3.如权利要求1或2所述的FZD7鼠源单克隆抗体，其特征在于，所述FZD7鼠源单克隆抗体靶向的目的蛋白含有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。4.如权利要求1或2所述的FZD7鼠源单克隆抗体，其特征在于，其存在于全长抗体、Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、Fv、双特异性抗体或多特异性抗体内。5.如权利要求1～4任一项所述的FZD7鼠源单克隆抗体，其特征在于，其制备方法包括如下步骤：(1)构建表达载体以表达如SEQ ID NO:4所示的DNA序列，得FZD7linker蛋白；(2)使用步骤(1)所得FZD7 linker蛋白免疫小鼠；(3)取免疫合格的小鼠，制备脾脏细胞悬液与SP2/0骨髓瘤细胞融合制成杂交瘤细胞；(4)腹水制备抗体。6.一种分离的核酸，其编码如权利要求1～5任一项所述的FZD7鼠源单克隆抗体。7.一种重组表达载体，其包含如权利要求6所述分离的核酸；优选地，所述重组表达载体为质粒、粘粒、噬菌体或...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐菲，徐鹭，吴亭亭，
申请(专利权)人：上海科技大学，
类型：发明
国别省市：