【技术实现步骤摘要】
一种检测前列腺小体外泄蛋白的荧光层析试纸条、试剂盒及其制备方法和应用
[0001]本专利技术属于前列腺炎诊断试剂领域,具体公开了一种检测前列腺小体外泄蛋白的荧光层析试纸条。
技术介绍
[0002]慢性前列腺炎(ChronicProstatitis,CP)是泌尿外科中青年男性最常见的疾病之一,据报道其占泌尿外科男性门诊就诊患者的25%左右。据流行病学调查,我国成人男性人群中,10%以上有前列腺炎样症状,50%男性不同时期均患过前列腺炎。说明潜在的慢性前列腺炎或慢性骨盆疼痛(CPPS)患者众多,同时,由化学品、物理因素或生物制剂引起的炎症过程还是人类癌症的发病机制中重要因子。在前列腺癌中,炎症的存在及细胞上皮组织损伤后再生被认为是恶性转化的关键因素。前列腺组织受到炎性细胞的浸润,从而释放出各种活性物质,这些物质的释放还与细菌及病毒感染、尿酸增高及食用前列腺致癌物有关。在过去10年中,炎症和癌症之间的联系,以及前列腺炎作为前列腺癌高危因素的假说已经在流行病学、临床、形态学、病原学、细胞和分子水平上进行充分的研究并得到证实。事实上,文献中指出,大约12%以上前列腺炎症,如不及时治疗可转化为前列腺癌。所以前列腺炎严重影响男性健康。
[0003]前列腺炎临床表现因患者个体差异而缺乏特异性,因此在临床上治疗效果一直不满意。根据1997年美国国立卫生研究院(NIH)对前列腺炎的分类,即NIH分类法,包括Ⅰ型:急性细菌性前列腺炎(ABP);Ⅱ型:慢性细菌性前列腺炎(CBP);Ⅲ型:又分为ⅢA,慢性非细菌性前列腺炎(CAP)和Ⅲ
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测前列腺小体外泄蛋白的荧光层析试纸条,其特征在于,所述试纸包括依序搭接在PVC底板上的样品垫、标记垫、层析条和吸水垫;所述层析条上设置有划线的检测区T和质控区C;所述检测区T包被有抗PSEP抗体二号,质控区C包被有羊抗兔IgG抗体;标记垫包被有荧光标记抗PSEP抗体一号;检测时,尿液样本通过样品垫上样,尿液中的PSEP与标记垫中的荧光标记抗PSEP抗体一号结合形成免疫结合物,该结合物随着膜的毛细管作用向上迁移到达检测区T,与膜上的抗PSEP抗体二号起反应,经特定波长激发光源激发后产生荧光信号,信号的强弱与样本中PSEP的含量成正比。2.根据权利要求1所述的一种检测前列腺小体外泄蛋白的荧光层析试纸条,其特征在于,样品垫为玻璃纤维素膜,试纸条的宽度为2
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4mm;T线和C线的间隔为3
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7mm;样品垫与标记垫之间重叠2
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4mm;标记垫与层析条之间重叠1
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3mm;层析条与吸水垫之间重叠2
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4mm。3.根据权利要求1所述的一种检测前列腺小体外泄蛋白的荧光层析试纸条,其特征在于:所述荧光标记抗PSEP抗体一号中,使用荧光微球偶联PSEP抗体一号,荧光微球的平均粒径为100~200nm,荧光微球的激发波长为280~450nm,发射波长 为380~640nm。4.根据权利要求3所述的一种检测前列腺小体外泄蛋白的荧光层析试纸条,其特征在于:所述荧光标记抗PSEP抗体一号由以下步骤制备:S1.荧光微球初洗:(1)取固含量1%的荧光微球100μL,装到圆底离心管中;(2)加入500μL初洗缓冲液,8000g离心30min;(3)使用移液器缓慢吸取上清;(4)加入250μL初洗缓冲液,用超声波清洗机超声5min以重悬沉淀;(5)重复2
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3操作,最后一次离心去上清后加入200μL初洗缓冲液超声5min以重悬沉淀;S2.荧光微球活化:(1)使用初洗缓冲液配制100mg/mL EDC,100mg/mL NHS,备用;(2)取200μL EDC溶液加入到离心管中,混匀反应5min,超声3min;(3)取100μL NHS溶液加入到离心管中,混匀反应15min,超声3min;S3.偶联抗体:(1)8000g离心5min,以使荧光微球全部沉淀至离心管底部;(2)使用移液器缓慢吸取上清;(3)向圆底离心管中加入500μL偶联缓冲液,用超声波清洗机超声3min以重悬沉淀;(4)重复上述操作共计3次;S4.封闭:(1)偶联反应完成后,将离心管置于超声波清洗机中,超声3min;(2)加入250μL封闭缓冲液,混匀封闭反应1小时,反应期间每30min将溶液置于超声波清洗机中,超声3min;(3)封闭反应完成后,将溶液至于超声波清洗机中,超声3min;S5.终洗:(1)8000g离心30min,以使荧光微球全部沉淀至离心管底部;(2)使用移液器缓慢吸取上清;(3)向圆底离心管中加入500μL终洗缓冲液,用超声波清洗机超声3min以重悬沉淀;
(4)重复上述操作共计3次;(5)加入终洗液100μL,恢复至荧光微球原体积,超声5min,置于冰箱冷藏,待用。5.如权利要求1
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4任一项所述的检测前列腺小体外泄蛋白的荧光层析试纸条的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:1)样品垫的制备:将样品垫用封闭液浸泡后,置于湿度<20%、温度为55~...
【专利技术属性】
技术研发人员:钱泽,孟洁,
申请(专利权)人:昂科生物医学技术苏州有限公司,
类型:发明
国别省市:
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