在限定条件下从人多能干细胞生成主动脉-性腺-中肾样造血细胞制造技术

本发明专利技术总体涉及通过操纵经典Wnt信号传导通路的两步过程产生用于治疗用途的造血干细胞和祖细胞的方法。从人多能干细胞开始，激活那些干细胞的经典Wnt信号传导通路，随后通过各种方法(包括TGF

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在限定条件下从人多能干细胞生成主动脉
‑
性腺
‑
中肾样造血细胞
[0001]相关申请的交叉引用本专利申请涉及并要求2020年2月28日提交的美国临时申请序号62/982,992的优先权利益，其内容以其整体通过引用并入本文。
[0002]序列表的声明序列表的计算机可读形式(CRF)与本申请一起提交。标题为68927
‑
02_Seq_Listing_ST25_txt的文件在2021年2月15日生成。申请人声明计算机可读形式的内容是相同的，并且以计算机可读形式记录的信息与书面序列表相同。


[0003]本专利技术总体涉及制造用于治疗和医学用途的干细胞的有效方法，特别是涉及在限定条件下从人多能干细胞产生造血干细胞和祖细胞的方法。本文还描述了药物组合物和方法，其通过施用治疗有效量的单独的如此制备的此类干细胞，或与其他治疗剂一起的此类干细胞，或在药物组合物中的此类干细胞来治疗患者。
[0004]背景本部分介绍了可有助于促进更好地理解本公开的方面。因此，这些陈述应从这个角度来阅读，并且不应被理解为承本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于从人多能干细胞(hPSC)生成造血干细胞(HSC)和祖细胞的方法，其包括以下步骤：a. 制备人多能干细胞(hPSC)；b. 制备包含血管内皮生长因子(VEGF)和糖原合酶激酶
‑
3(GSK3)抑制剂的培养基，其中所述GSK3抑制剂用于激活所述hPSC的经典Wnt信号传导通路；c. 将所述hPSC在所述培养基中培养一段时间；和d. 然后下调激活的经典Wnt信号传导通路或转化生长因子β (TGF
‑
β)信号传导通路一段时间，以诱导和生成所述造血干细胞(HSC)。2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在步骤d的培养基中添加干细胞因子(SCF)或Flt3
‑
配体用于改进批次间操作的恒定性。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述人多能细胞包括选自H9、H1和H13的人胚胎干细胞(hESC)系；和选自19
‑9‑
11、6
‑9‑
9和Kolf2的人诱导多能细胞系。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述下调激活的经典Wnt信号传导通路通过Wnt抑制剂、肝素、SB431542、β
‑
连环蛋白shRNA、β
‑
连环蛋白靶向的Cas13d或Cas9 gRNA实现。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述Wnt抑制剂包括Wnt
‑
C59和IWP2。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述Wnt抑制剂的功能浓度范围为约0.2
ꢀµ
M至约20
ꢀµ
M。7.根据权利要求5所述的方法，其中所述Wbt
‑
C59具有下式，或其药学上可接受的盐，。8.根据权利要求5所述的方法，其中所述IWP
‑
2具有下式，或其药学上可接受的盐，。9.根据权利要求4所述的方法，其中所述肝素的浓度范围为约0.2至20 μg/mL。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述下调转化生长因子β(TGF
‑
β)信号传导通路通过TGF
‑
β抑制剂、SB431542、A83
‑
01、ALK5抑制剂、血小板生成素(TPO)、肝素、聚乙烯醇(PVA)、TGF
‑
β shRNA、TGF
‑
β靶向的Cas13d或Cas9 gRNA实现。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述SB431542的功能浓度范围为约0.2
ꢀµ
M至约20
ꢀµ
M。12.根据权利要求10所述的方法，其中所述SB431542具有下式，或其药学上可接受的盐，
，其中x是任意数。13.根据权利要求10所述的方法，其中所述A83
‑
01具有下式，或其药学上可接受的盐，。14.根据权利要求10所述的方法，其中所述A83
‑
01的浓度范围为约0.2 μM至约20
ꢀµ
M。15.根据权利要求10所述的方法，其中所述肝素的浓度范围为约0.2 μg/mL至约20 μg/mL。16.根据权利要求1所述的方法，其中所述GSK3抑制剂包括CHIR99021、CHIR98014、BIO、MeBIO、LY2090314、氯化锂和靛玉红。17.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：X，
申请(专利权)人：普渡研究基金会，
类型：发明
国别省市：