新型互变异构酶PPTA变体及使用其生产L-色氨酸的方法技术

本公开涉及一种新型互变异构酶pptA变体、包含所述变体的大肠杆菌(Escherichia coli)菌株以及使用所述菌株生产L

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型互变异构酶PPTA变体及使用其生产L
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色氨酸的方法


[0001]本公开涉及一种新型互变异构酶pptA变体、包含所述变体的大肠杆菌(Escherichia coli)菌株以及使用所述菌株生产L
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色氨酸的方法。

技术介绍

[0002]正在进行多种研究以开发出用于生产L
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氨基酸和其他有用物质的高效微生物和发酵工艺技术。例如，主要使用目标物质特异性方法，在所述方法中编码参与L
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色氨酸生物合成的酶的基因的表达增加，或在所述方法中除去了生物合成不需要的基因(US 8945907 B2)。
[0003]但是，随着对L
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色氨酸的需求增加，仍然需要进行研究以有效增加L
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色氨酸生产能力。

技术实现思路

[0004]技术问题
[0005]本专利技术人开发了一种用于增加L
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色氨酸产量新型互变异构酶pptA变体、包含所述变体的大肠杆菌菌株以及使用所述菌株生产L
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色氨酸的方法，从而完成本公开。
[0006]技术方案
[0007]本公开的一个目的为提供一种互变异构酶pptA变体，其由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成，其中作为对应于氨基酸序列SEQ ID NO:3的位置31的氨基酸的精氨酸被组氨酸取代。
[0008]本公开的另一个目的为提供一种编码本公开的变体的多核苷酸。
[0009]本公开的另一个目的为提供一种大肠杆菌菌株，其包含本公开的变体或编码所述变体的多核苷酸并且具有L
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色氨酸生产能力。
[0010]本公开的另一个目的为提供一种用于生产L
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色氨酸的方法，其包括在培养基中培养包含本公开的变体或编码所述变体的多核苷酸并且具有L
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色氨酸生产能力的大肠杆菌菌株。
[0011]有益效果
[0012]在培养包含本公开的互变异构酶pptA变体的大肠杆菌菌株的情况下，与具有未修饰多肽的现有微生物的情况相比，有可能以较高产率生产L
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色氨酸。
具体实施方式
[0013]将如下详细地描述本公开。同时，本公开中所公开的每个描述和实施方案均可应用于其他描述和实施方案。换句话讲，本公开中所公开的各种要素的所有组合均属于本公开的范围。此外，不可以认为本公开的范围受到以下所述的具体描述的限制。此外，在本说明书通篇，引用了许多论文和专利文件并指出了其引用文。所引用的论文和专利文件中所公开的全部内容以引用的方式并入本说明书中，以更清楚地描述本专利技术所属的
的
水平和本专利技术的内容。
[0014]本公开的一个方面提供一种互变异构酶pptA变体，其由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成，其中作为对应于氨基酸序列SEQ ID NO:3的位置31的氨基酸的精氨酸被组氨酸取代。
[0015]本公开的变体可具有由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列，包含所述氨基酸序列或基本上由所述氨基酸序列组成。
[0016]在本公开的变体中，在由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列中对应于基于氨基酸序列SEQ ID NO:3的位置31的氨基酸为组氨酸，并且可包含与由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.7％或99.9％同源性或同一性的氨基酸序列。明显的是，具有缺失、修饰、取代、保守取代或添加了一些序列的氨基酸序列的变体也包括在本公开的范围内，只要氨基酸序列具有此类同源性或同一性并表现出对应于本公开的变体功效的功效。
[0017]其实例包括具有在氨基酸序列的N末端、C末端和/或氨基酸序列内部的不改变本公开变体功能的序列添加或缺失、天然存在的突变、沉默突变或保守取代的变体。
[0018]“保守取代”意指一种氨基酸被具有类似结构和/或化学性质的另一种氨基酸取代。这种氨基酸取代可通常基于残基的极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性和/或两亲性性质的类似性而发生。通常，保守取代可能几乎不影响或不影响蛋白或多肽的活性。
[0019]在本公开中，术语“变体”是指氨基酸序列与通过一个或多个氨基酸的保守取代和/或修饰而变异之前的变体的氨基酸序列不同但维持功能或性质的多肽。这种变体通常可以通过修饰多肽氨基酸序列的一个或多个氨基酸并评估修饰多肽的性质来鉴别。换句话讲，与变异之前多肽的能力相比，变体的能力可能增加、不变或降低。一些变体可包括除去了一个或多个部分诸如N末端前导序列或跨膜结构域的变体。其他变体可包括将N末端和/或C末端的一部分从成熟蛋白除去的变体。术语“变体”可与术语诸如修饰、修饰多肽、修饰蛋白、突变体、突变蛋白和趋异(divergent)互换使用，并且不限于此，只要其为以变化含义使用的术语即可。出于本公开的目的，变体可为包含由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列的多肽，其中精氨酸为对应于氨基酸序列SEQ ID NO:3的位置31的氨基酸，被组氨酸取代。
[0020]变体可包括对多肽的性质和二级结构具有最小影响的胺基酸的缺失或添加。例如，共翻译或翻译后参与蛋白易位的信号(或前导)序列可与变体的N末端缀合。变体可与其他序列或接头缀合，以便被鉴别、纯化或合成。
[0021]在本公开中，术语“同源性”或“同一性”意指两个给定氨基酸序列或碱基序列之间的类似性程度且可以百分比的形式表示。术语同源性和同一性常常可互换使用。
[0022]保守多核苷酸或多肽的序列同源性或同一性由标准比对算法确定，并且可以一起使用由所用程序建立的默认空位罚分。基本上，同源或相同序列通常能够在中等或高度严格的条件下与序列整体或一部分杂交。明显的是，杂交还包括多核苷酸与包含通用密码子或考虑到密码子简并性的密码子的多核苷酸的杂交。
[0023]任何两个多核苷酸或多肽序列是否具有同源性、类似性或同一性可以使用已知的计算机算法诸如“FASTA”程序，例如使用如Pearson等人,(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:2444中的默认参数来确定。替代地，同源性、类似性或同一性可使用如EMBOSS包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice等人,2000,
Trends Genet.16:276
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277)(版本5.0.0或之后版本)(包括GCG程序包(Devereux,J.等人,Nucleic Acids Research 12:387(1984))的Needleman程序中所执行的Needleman
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Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443
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453)、BLASTP、BLASTN、FASTA(Atschul,S.F.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种互变异构酶pptA变体，其由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成，其中作为对应于SEQ ID NO:3的位置31的氨基酸的精氨酸被组氨酸取代。2.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1所述的变体。3.一种大肠杆菌(Escherichia coli)菌株，其包含根据权利要求1所述的变体或编码所述变体的多核苷酸。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：朴暠夽，张真淑，郑武泳，金贤雅，裴智妍，金孝珍，徐昌一，
申请(专利权)人：CJ第一制糖株式会社，
类型：发明
国别省市：