中药多糖的单糖糖苷键连接方式的定性或定量分析方法技术

本发明专利技术公开了中药多糖的单糖糖苷键连接方式的定性或定量分析方法。本发明专利技术采用GC

【技术实现步骤摘要】
中药多糖的单糖糖苷键连接方式的定性或定量分析方法


[0001]本专利技术涉及一种多糖糖苷键连接方式的分析方法，尤其涉及中药多糖糖的单糖苷键连接方式的定性或定量分析方法，属于中药多糖苷连接分析领域。

技术介绍

[0002]气相色谱
‑
质谱法(GC
‑
MS)是气相色谱领域应用最广泛的方法，是将GC的高分离能力与EI
‑
MS的高鉴别能力应用于复杂体系未知化合物的鉴定，在中药糖苷类化合物糖残基连接位置和顺序的分析中具有重要的作用。目前，对于中药糖苷类化合物糖苷键连接位点的研究主要依赖于GC
‑ꢀ
MS的全扫描模式，该模式选择性和灵敏度差，色谱峰中的干扰峰不能被排除，增大苷连接分析的难度，对中药多糖准确地进行糖苷键连接方式解析形成阻碍，亟待改进。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的主要目的是提供一种中药多糖的单糖糖苷键连接方式的定性或定量分析方法；
[0004]为实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案包括：
[0005]一种中药多糖的单糖糖苷键连接方式的定性或定量分析方法：
[0006](1)将不同种类的单糖制备得到部分甲基化糖腈乙酸酯；
[0007](2)采用GC
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MS/MS方法对不同的部分甲基化糖腈乙酸酯进行分离获得EI
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MS/MS图谱；
[0008](3)根据EI
‑
MS/MS图谱确定部分甲基化糖腈乙酸酯定性离子对以及部分甲基化糖腈乙酸酯定量离子对并结合该部分甲基化糖腈乙酸酯定性离子对以及部分甲基化糖腈乙酸酯定量离子对所对应的碰撞能量构建得到靶向定性定量的MRM数据阵；
[0009](4)计算部分甲基化糖腈乙酸酯离子对的OCE数值构建得到OCE 数据阵；
[0010](5)根据MRM数据阵或OCE数据阵对中药多糖糖苷键连接方式进行定性或定量分析。
[0011]作为本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤(1)中所述的不同种类的单糖包括但不限于Glc(葡萄糖)、Man(甘露糖)、Gal(半乳糖)、Ara(阿拉伯糖)、Xyl(D
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木糖)、Rib(核糖)、Rha(鼠李糖) 或Fuc(岩藻糖)中的任何一种或一种以上；其中，由Glc得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有24种Glc糖苷键连接方式，由Gal得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有24种Gal糖苷键连接方式，由Man得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有23种Man糖苷键连接方式，由Ara得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有12种Ara糖苷键连接方式，由Xyl得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有 12种Xyl糖苷键连接方式，由Rib得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有12种 Rib糖苷键连接方式，由Rha得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有8种Rha糖苷键连接方式，由Fuc得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有8种Fuc糖苷键连接方式。
[0012]作为本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤(2)中所述GC
‑ꢀ
MS/MS方法的气相条
件和质谱条件的参数分别包括：
[0013]气相条件包括：进样温度为250℃；进样体积为1μL；分流比为 20:1，毛细管色谱柱为TG
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1MS(30m
×
0.25mm
×
0.25μm)，升温程序如下：110℃维持2min，以5℃/min的速度逐渐升温至210℃，并且维持 2min，随后以20℃/min速度升温至280℃，并且维持2min；
[0014]质谱条件包括：EI源，离子源温度为280℃，扫描率为0.2scan/s，自动全扫描模式扫描范围为m/z 50
‑
550。
[0015]作为本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤(3)中根据EI
‑ꢀ
MS/MS图谱，挑选响应强度大的离子对为部分甲基化糖腈乙酸酯定量离子对，选择具有结构特异性的离子对为部分甲基化糖腈乙酸酯定量离子对。
[0016]作为本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤(3)中在碰撞能量范围为5
‑
45eV(变化间隔为2eV)的背景下，获得离子对的响应强度，对比不同碰撞能量下的响应强度的大小确定部分甲基化糖腈乙酸酯定性离子对以及部分甲基化糖腈乙酸酯定量离子对所对应的碰撞能量。
[0017]作为本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤(4)中所述计算部分甲基化糖腈乙酸酯离子对的OCE数值构建得到OCE数据阵的构建方法包括：在碰撞能量范围为5
‑
45eV(变化间隔为2eV)的背景下，获得离子对的响应强度，将所得数据通过Guass函数进行正态回归曲线拟合，计算出部分甲基化糖腈乙酸酯离子对(Q1/Q3)的OCE数值。
[0018]作为本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤(5)中先分析待检测的中药多糖的单糖的主要组成种类，再根据MRM数据阵或OCE数据阵对中药多糖的单糖糖苷键连接方式进行定性或定量分析
[0019]作为本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤(5)中根据MRM数据阵对同种单糖的同分异构体进行定性或定量分析，或根据OCE数据阵对部分同种单糖和异种单糖的同分异构体进行定性分析；更优选的，通过 MRM数据阵和OCE数值对中药多糖中的同分异构苷连接进行鉴别。
[0020]作为本专利技术一种优选的具体实施方案，所述的中药多糖包括但不限于木耳、黄芪和西洋参多糖中的任意一种。
[0021]本专利技术采用GC
‑
MS/MS的分离技术对不同苷键连接类型部分甲基化糖腈乙酸酯衍生物进行分离，并获得部分甲基化糖腈乙酸酯定性定量离子对和对应的OCE值，构建了多种单糖的部分甲基化糖腈乙酸酯的定性定量靶向MRM数据阵和OCE数据阵，可对同种单糖不同糖苷键连接方式进行定性分析，相比现有的中药多糖的糖苷连接分析方法，解决了现有的 GC
‑
MS方法中仅通过全扫描方式获得色谱图中干扰峰较多，导致苷连接分析糖残基连接归属存在诸多错误等问题，有效排除了副产物干扰，提高分析的灵敏度和准确性，在同种单糖不同糖苷键连接方式异构体间定性定量分析的方面具有显著的优势，在中药多糖的苷连接分析中具有广阔的应用前景。
[0022]本专利技术涉及的缩略术语
[0023]GC
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MS/MS：气相色谱串联质谱法。
[0024]EI
‑
MS/MS图谱：电子轰击源
‑
质谱/质谱图谱。
[0025]MRM数据阵：多反应监测数据阵。
[0026]OCE数据阵：最优碰撞能数据阵。
附图说明
[0027]图1 为Gal部分甲基化糖腈乙酸酯的全扫描色谱图和MRM色谱图的对比结果。
[0028]图2 为4,6
‑
di
‑
O
‑
methyl
‑
2,3,5
‑
tri
‑
O
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种中药多糖的单糖糖苷键连接方式的定性或定量分析方法，其特征在于，包括：(1)将不同种类的单糖制备得到部分甲基化糖腈乙酸酯；(2)采用GC
‑
MS/MS方法对不同的部分甲基化糖腈乙酸酯进行分离获得EI
‑
MS/MS图谱；(3)根据EI
‑
MS/MS图谱确定部分甲基化糖腈乙酸酯定性离子对以及部分甲基化糖腈乙酸酯定量离子对并结合该部分甲基化糖腈乙酸酯定性离子对以及部分甲基化糖腈乙酸酯定量离子对所对应的碰撞能量构建得到靶向定性定量的多反应监测数据阵；(4)计算部分甲基化糖腈乙酸酯离子对的最优碰撞能数值构建得到OCE数据阵；(5)根据多反应监测数据阵或最优碰撞能数据阵对中药多糖糖苷键连接方式进行定性或定量分析。2.根据权利要求1所述的定性或定量分析方法，其特征在于，步骤(1)中所述的不同种类的单糖包括但不限于葡萄糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、D
‑
木糖、核糖、鼠李糖或岩藻糖中的任何一种或一种以上。3.根据权利要求1所述的定性或定量分析方法，其特征在于，由葡萄糖得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有24种糖苷键连接方式，由甘露糖得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有甘露糖种糖苷键连接方式，由半乳糖得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有23种糖苷键连接方式，由阿拉伯糖得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有12种糖苷键连接方式，由D
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木糖得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有12种糖苷键连接方式，由核糖得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有12种糖苷键连接方式，由鼠李糖得到的部分甲基化糖腈乙酸酯有8种糖苷键连接方式，由岩藻糖得到的部分甲基化糖乙酸酯有8种苷键连接方式。4.根据权利要求1所述的定性或定量分析方法，其特征在于，步骤(2)中所述GC
‑
MS/MS方法的气相条件和质谱条件的参数分别包括：气相条件包括：进样温度为250℃；进样体积为1μL；分流比为20:1，毛细管色谱柱为TG
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1MS，升温程序如下：110℃维持2min，以5℃/min的速度逐渐升...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏永刚，梁军，李野，高佳宁，
申请(专利权)人：梁军，
类型：发明
国别省市：