一种分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法技术

本发明专利技术涉及重组蛋白生物制品理化对照品校正技术领域，具体地说，涉及分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法。包括：对分子量进行校正计算：对胶片进行拍照或扫描；求得标准曲线回归方程；求得供试品和对照品的分子量；计算分子量校正系数k1；将软件测得的样品分子量乘以k1；对等电点进行校正计算：对胶片进行拍照或扫描；做线性回归；求出供试品和对照品的等电点；计算等电点校正系数k2；将软件测得的供试品等电点乘以k2。本发明专利技术通过将产品的实测值乘以k值，可以校正产品并用于实际检验控制；可以使得产品计算结果更加科学、准确，并可较大程度避免因系统检验误差导致的产品分子量、等电点的波动，缩小方法误差的范围。缩小方法误差的范围。缩小方法误差的范围。

【技术实现步骤摘要】
一种分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法


[0001]本专利技术涉及理化对照品校正
，具体地说，涉及分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法。

技术介绍

[0002]电泳是指混悬于溶液中的样品电荷颗粒,在电场影响下向着与自身带相反电荷的电极移动的现象，核酸可降解成片段，还可进一步降解成核苷酸；蛋白质多肽和氨基酸等都具有可电离的基团，基团在溶液中能吸收或者给出氢离子，从而成为电荷粒子；又由于电荷粒子的多少不等以及具有相同电荷的分子又有大有小，于是在不同的介质中，在电场影响下，它们移动的速度也不相同了。人们利用这种特性，用电泳的方法对上述物质进行定性及定量分析，或者将一定的混合物分离成各个组份以及作少量电泳制备。因为电泳技术的这种独特功能，所以就成了分子生物学研究工作中不可缺少的重要分析手段，被广泛应用于基础理论研究、农业科学、医药卫生、工业生产、国防科研、法医学和商检等许多领域；在对重组蛋白生物制品进行研制、生产及实验、检验过程中，可能需要对重组蛋白生物制品原液及理化对照品进行分子量、等电点的检验，检验设备主要为稳压稳流电泳仪、凝胶成像系统。在检验过程中，电泳的时间长短、染色效果、染色的颜色深浅等多种因素都会导致检验的误差增大。
[0003]目前凝胶成像系统灵敏度较高，如图1所示，为重组蛋白在凝胶成像系统中的成像图像，同一图像中仍然存在清晰程度不一的重组蛋白结构。因此，为防止检验误差导致检验结果偏离分子量、等电点的理论值，导致检验结果不合理，故需要采用理化对照品校正的方式进行计算，然而，目前却没有较为完善的可以准确控制实际检验数据准确程度的校正值k允许范围的校正方法。鉴于此，基于近1年的数据积累，及其分别总结出校正值k的允许范围，我们提出了分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述技术问题的解决，本专利技术的目的之一在于，提供了分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法，其特征在于：包括如下步骤：
[0006]S1、对分子量进行校正计算：
[0007]S1.1、在SDS
‑
PAGE凝胶电泳完毕，胶片染色脱色完成后，通过电脑凝胶成像分析仪器软件对胶片进行拍照或扫描；
[0008]S1.2、以分子量Maker工作溶液标准蛋白各条带相对分子量的对数为纵坐标，以其相对迁移率为横坐标，进行线性回归拟合，求得标准曲线回归方程；
[0009]S1.3、将理化对照品和供试品蛋白相对迁移率代入标准曲线回归方程计算，求得供试品和对照品的分子量；
[0010]S1.4、通过理化对照品理论分子量与实测分子量的比值计算分子量校正系数k1；
[0011]S1.5、将软件测得的供试品分子量乘以分子量校正系数k1，即得供试品分子量，完成分子量的校正计算；
[0012]S2、对等电点进行校正计算：
[0013]S2.1、等电聚焦电泳结束，胶片固定染色脱色完成后，通过电脑凝胶成像分析仪器软件对胶片进行拍照或扫描；
[0014]S2.2、以每条带距凝胶正极端的距离作为迁移距离，以各标准的等电点对其相应的迁移距离作线性回归；
[0015]S2.3、将理化对照品和供试品的迁移距离代入线性回归方程，求出供试品和对照品的等电点；
[0016]S2.4、通过理化对照品理论等电点与实测等电点的比值计算等电点校正系数k2；
[0017]S2.5、将软件测得的供试品等电点乘以等电点校正系数k2，即得供试品等电点，完成等电点的校正计算。
[0018]2.根据权利要求1所述的分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法，其特征在于：所述S1.2中，以分子量Maker工作溶液标准蛋白各条带相对分子量的对数为纵坐标，以其相对迁移率为横坐标，进行线性回归拟合，求得标准曲线回归方程，此过程依据的检验原理为：
[0019]大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂SDS按重量成比例结合成复合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的净电荷，消除了不同蛋白质分子的电荷效应，使蛋白质分按分子大小分离；在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小；
[0020]当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和相对分子量的常用对数呈线性关系，符合下式：
[0021]logMW＝K
‑
bX
[0022]式中，MW为分子量，X为迁移率，K、b均为常数；
[0023]若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，即所需的标准曲线及其回归方程；
[0024]反之，未知蛋白质在相同条件下进行电泳时，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
[0025]3.根据权利要求1所述的分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法，其特征在于：所述S1.3中，将供试品蛋白相对迁移率代入计算，求得供试品和对照品的分子量的操作过程，可以使用经确认的凝胶成像分析系统，通过系统自动计算得到所需的分子量。
[0026]4.根据权利要求1所述的分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法，其特征在于：所述S1.4中，通过理化对照品实测分子量计算分子量校正系数k1的计算表达式为：
[0027][0028]5.根据权利要求1所述的分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法，其特征在于：所述S2.2中，以每条带距凝胶正极端的距离作为迁移距离，根据标准品的等电点对其相应的迁移距离做线性回归，此过程依据的检验原理为：
[0029]两性电解质在电泳场中形成一个pH梯度；蛋白质为两性化合物，其所带电荷与介
质的pH值有关，带电的蛋白质在电泳中向极性相反的方向迁移，当到达其等电点时，电流达到最小，不再移动，从而达到检测蛋白质和多肽类供试品等电点的方法；
[0030]其中，相应的蛋白质不再带电荷的pH值处即为等电点。
[0031]6.根据权利要求1所述的分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法，其特征在于：所述S2.3中，将供试品和理化对照品的迁移距离代入线性回归方程，求出供试品和对照品的等电点的操作过程，可以使用经确认的凝胶成像系统，通过系统自动计算得到所需的等电点结果。
[0032]7.根据权利要求1所述的分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法，其特征在于：所述S2.4中，通过理化对照品实测等电点计算等电点校正系数k2的计算表达式为：
[0033][0034]本专利技术的目的之二在于，提供了一种分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法的系统搭载平台装置，用于装载相应的电脑仪器软件及经确认的凝胶成像分析系统，该装置包括处理器、存储器以及存储在存储器中并在处理器上运行的计算机程序，处理器用于执行计算机程序时实现上述的分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法的步骤。
[0035]本专利技术的目的之三在于，提供了一种计本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、对分子量进行校正计算：S1.1、在SDS
‑
PAGE凝胶电泳完毕，胶片染色脱色完成后，通过电脑凝胶成像分析仪器软件对胶片进行拍照或扫描；S1.2、以分子量Maker工作溶液标准蛋白各条带相对分子量的对数为纵坐标，以其相对迁移率为横坐标，进行线性回归拟合，求得标准曲线回归方程；S1.3、将理化对照品和供试品蛋白相对迁移率代入标准曲线回归方程计算，求得供试品和对照品的分子量；S1.4、通过理化对照品理论分子量与实测分子量的比值计算分子量校正系数k1；S1.5、将软件测得的供试品分子量乘以分子量校正系数k1，即得供试品分子量，完成分子量的校正计算；S2、对等电点进行校正计算：S2.1、等电聚焦电泳结束，胶片固定染色脱色完成后，通过电脑凝胶成像分析仪器软件对胶片进行拍照或扫描；S2.2、以每条带距凝胶正极端的距离作为迁移距离，以各标准的等电点对其相应的迁移距离作线性回归；S2.3、将理化对照品和供试品的迁移距离代入线性回归方程，求出供试品和对照品的等电点；S2.4、通过理化对照品理论等电点与实测等电点的比值计算等电点校正系数k2；S2.5、将软件测得的供试品等电点乘以等电点校正系数k2，即得供试品等电点，完成等电点的校正计算。2.根据权利要求1所述的分子量等电点使用理化对照品进行校正的方法，其特征在于：所述S1.2中，以分子量Maker工作溶液标准蛋白各条带相对分子量的对数为纵坐标，以其相对迁移率为横坐标，进行线性回归拟合，求得标准曲线回归方程，此过程依据的检验原理为：大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂SDS按重量成比例结合成复合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的净电荷，消除了不同蛋白质分子的电荷效应，使蛋白质分按分子大小分离；在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小；当分子量在15KD到200KD...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜桂香，王翠娟，宋雯婷，陈虹，
申请(专利权)人：山东先声生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：