一种丹参花药的内参基因及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种丹参花药的内参基因，所述内参基因为Sm073914基因和/或Sm083165基因。本发明专利技术以Sm073914和/或Sm083165基因作为丹参花药qRT

【技术实现步骤摘要】
一种丹参花药的内参基因及其用途


[0001]本专利技术具体涉及一种丹参花药的内参基因及其用途。

技术介绍

[0002]丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)隶属于唇形科(Lamiaceae)鼠尾草属(Salvia)多年生草本植物。主要分布在四川、山东、河南、陕西等地，是常见大宗中药材。《中华人民共和国药典》2020年版中规定，药材丹参为唇形科鼠尾草属丹参的干燥根及根茎，其主要成分为脂溶性的丹参酮类以及水溶性的酚酸类化合物。丹参具有改善血液循环、保护心血管、保护神经和抗癌等药理作用，不仅在中药开发和利用方面具有重要的价值，而且也可用于食品、饲料及天然产物提取，以获得其独特的功效。因此，对丹参花药发育调控机制的研究，需要进一步挖掘参与发育的功能基因，并研究基因的表达模式和生物学功能。
[0003]实时荧光定量PCR(qRT
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PCR)是对目标基因表达定量应用最广泛的分子生物学方法，具有精确度高、灵敏性强、特异性强和重复性好等特点，也常用于植物学、医学、微生物学等众多领域的研究。但是qRT
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PCR对目标基因表达量准确分析的前提是筛选出稳定表达的内参基因。理想的内参基因应该不受生长阶段、组织器官及实验处理条件的影响。然而，内参基因在不同植物以及不同实验条件下并不是恒定的，而且内参基因在不同植物、不同的组织中并不具有通用性。此外，关于丹参花药内参基因的研究还较为匮乏，虽然用于丹参的内参基因已有报道，然而经过实验验证并不适用于花药。因此，现有的内参基因并不能作为丹参花药qRT
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PCR的内参基因。
[0004]目前，针对适宜用于丹参花药qRT
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PCR研究的内参基因还未见报道，为研究丹参花药功能基因表达特性，得到表达稳定可靠的丹参花药的内参基因是目前迫切需要的。

技术实现思路

[0005]为解决上述问题，本专利技术提供了一种丹参花药的内参基因，所述内参基因为Sm073914基因和/或Sm083165基因。
[0006]进一步地，所述Sm073914基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Sm083165基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0007]本专利技术还提供了一种扩增前述内参基因的引物，所述Sm073914基因的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的反向引物；
[0008]所述Sm083165基因的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的反向引物。
[0009]本专利技术最后提供了一种Sm073914基因和/或Sm083165基因作为内参基因在丹参花药基因检测中的用途。
[0010]进一步地，所述Sm073914基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Sm083165基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0011]进一步地，所述基因检测是检测丹参花药基因转录表达水平。
[0012]更进一步地，所述基因检测是实时荧光定量检测丹参花药基因转录表达水平。
[0013]更进一步地，所述基因检测使用的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的反向引物。
[0014]更进一步地，所述基因检测使用的引物还包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的反向引物。
[0015]本专利技术所述的丹参花药为四川丹参和/或山东丹参。
[0016]本专利技术丹参花药的内参基因，通过对丹参花药的转录组数据分析，并结合GeNorm，NormFinder和BestKeeper软件得到了丹参花药最适的内参基因Sm073914基因和Sm083165基因。本专利技术首次提出以Sm073914和/或Sm083165基因作为丹参花药qRT
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PCR的内参基因对目标基因的表达水平进行归一化，解决了丹参花药qRT
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PCR没有内参基因的现状。并且，本专利技术提供的适用于丹参花药qRT
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PCR的两个内参基因序列均来自丹参花药转录组序列，与其他物种上的通用内参基因相比具有特异性好，稳定性高的优点。
[0017]其次，本专利技术Sm073914基因和/或Sm083165基因作为内参基因在qRT
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PCR检测丹参花药基因转录表达水平中的应用，能够用于丹参花药发育过程中关键基因的表达分析，能显著提高所得数据的精准性，应用广泛、灵敏度高、稳定性好。并且，本专利技术还提供了上述内参基因的特异性引物，引物的PCR扩增片段只有一个，没有非特异扩增，表明Sm073914和Sm083165荧光定量PCR引物特异性强，保证了目的片段的扩增效率。
[0018]最后，本专利技术还通过转录组筛选了4个果胶酶相关基因作为验证基因，并以Sm073914、Sm083165、Sm073914+Sm083165及表达稳定性相对较低的Sm082070分别作为内参基因，进行qRT
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PCR分析，其分析结果与转录组对应基因的FPKM值进行相关性分析，从而验证内参基因的稳定性，进一步确定内参基因的适用性与可靠性。
[0019]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0020]以下通过实施例的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0021]图1丹参花药9个候选内参基因引物PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图。
[0022]图2丹参花药中9个候选内参基因qRT
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PCR熔解曲线。
[0023]图3 9个候选内参基因平均Cq值分布。
[0024]图4GeNorm软件比较9个候选内参基因的表达稳定性M值折线图。
[0025]图5GeNorm分析得到的V
n
/V
n+1
，用于确定准确定量分析最优的内参基因数目。
[0026]图6以Sm073914、Sm083165、Sm073914+Sm083165及Sm082070分别作为内参基因对验证基因进行qRT
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PCR分析的结果图及验证基因的FPKM值。(注：A、B、C、D、E：Sm022309作为验证基因；F、G、H、I、J：Sm013701作为验证基因；K、L、M、N、O：Sm021008作为验证基因；P、Q、R、S、T:Sm054957作为验证基因。A、F、K、P：FPKM值；B、G、L、Q：Sm073914作为参考基因；C、H、M、R：Sm083165作为参考基因；D、I、N、S：Sm0739本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种丹参花药的内参基因，其特征在于：所述内参基因为Sm073914基因和/或Sm083165基因。2.根据权利要求1所述丹参花药的内参基因，其特征在于：所述Sm073914基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Sm083165基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.一种扩增权利要求1所述内参基因的引物，其特征在于：所述Sm073914基因的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的反向引物；所述Sm083165基因的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的反向引物。4.Sm073914基因和/或Sm083165基因作为内参基因在丹参花药基因检测中的用途。5.根据权利要求4所述用途，其特征在于：所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张利，尚玉坤，廖进秋，杨瑞武，姜媛媛，邓雪雪，王龙，柴松岳，张云松，林丽，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：