一种细胞外RNA文库的构建方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种细胞外RNA文库的构建方法及其应用，涉及高通量测序以及文库构建技术领域。本发明专利技术的细胞外RNA文库的构建方法包括：(a)裂解体液样本；(b)加入含有标签序列的磁珠捕获样本中的RNA；(c)逆转录；(d)以第一链cDNA为模板，合成第二链cDNA；(e)获得的第二链cDNA经去核糖体RNA后PCR富集获得全转录组检测文库。该方法专门针对细胞外RNA的检测，不需要提取RNA，不需要通过特异性磁珠捕获mRNA的3

【技术实现步骤摘要】
一种细胞外RNA文库的构建方法及其应用


[0001]本专利技术涉及高通量测序以及文库构建
，尤其是涉及一种细胞外RNA文库的构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]细胞外RNA(extracellular RNA，exRNA)最早在血浆和血清中被发现，由于细胞外间隙以及体液中存在RNA酶，exRNA的发现并没有引起科学界的关注，当时人们普遍认为exRNA无法稳定存在。直到2006年和2007年，两项开创性的工作分别证明RNA存在于微囊泡(microvesicles)和外泌体(exosomes)中，这些RNA可以被分泌到细胞外，作为信号分子影响受体细胞的行为。这个过程既可以发生在邻近的细胞之间，又能进行长距离的调控。这两项工作揭开了exRNA研究的序幕，也为探索细胞间的信号转导开辟了新的视角。随后，exRNA被发现存在于几乎所有的生物体液(body fluids)中，包括血液、唾液、尿液、母乳、脑脊液、羊水、腹水、胆汁以及胸腔积液中。高通量测序的结果也表明，除了mRNA以外，exRNA还包含多种非编码的RNA类型，如miRNA、piRNA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞外RNA文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)裂解体液样本；(b)加入含有标签序列的磁珠捕获所述体液样本中的RNA；(c)逆转录；(d)以第一链cDNA为模板，合成第二链cDNA；(e)获得的第二链cDNA经去核糖体RNA后进行PCR富集获得全转录组检测文库。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，使用裂解液裂解体液样本，所述裂解液主要包含以下成分：80～120mM的Tris
‑
HCl；体积浓度0.8％～1.2％的LiDS；450～550mM的LiCl；以及7.5～15mM的DTT，质量体积分数4
‑
6％的Ficoll。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(b)中，含有标签序列的磁珠包括5
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通用接头序列
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barcode
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通用接头序列
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barcode
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NNNNNN/SpC6/、5
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通用接头序列
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨学敏，张燕菲，
申请(专利权)人：广州表观生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：