一种利用抽真空处理促进杨树外植体大量、快速分化成芽的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用抽真空处理促进杨树外植体大量、快速分化成芽的方法，属于植物组织培养技术领域。本发明专利技术包括：选取杨树幼苗叶片，去除叶片的边缘部分，切成若干叶盘或叶柄；将叶盘或叶柄放入处理液，置于真空泵中抽真空一段时间；取出叶盘或叶柄后立即用吸水纸吸去表面液体，将叶盘背面朝下放入装有培养基的培养皿中；培养叶盘或叶柄分化为丛生芽。实验表明，利用本发明专利技术，可以大幅度提高杨树叶盘和叶柄的分化率，杨树叶片及叶柄分化丛生芽数量较对照组均增加1.5倍以上，叶片及叶柄分化丛生芽鲜重较对照组分别增加3倍和5倍以上，表明本发明专利技术能有效促进杨树外植体分化，最终可以显著提高杨树外植体分化成幼苗的数量。显著提高杨树外植体分化成幼苗的数量。显著提高杨树外植体分化成幼苗的数量。

【技术实现步骤摘要】
一种利用抽真空处理促进杨树外植体大量、快速分化成芽的方法


[0001]本专利技术属于植物组织培养
，涉及一种利用抽真空处理促进杨树外植体大量、快速分化成芽的方法。

技术介绍

[0002]杨树(Populus spp.)因其成材早、产量高、易繁殖、适应性强等特性，是我国最为重要的国土绿化和工业用材树种之一。第九次全国森林资源清查数据显示，我国杨树林总面积居世界首位。中国也是世界杨树集中分布区之一，占世界杨树种类的50％以上，乡土杨树资源丰富。杨树良种组培快繁技术是可以提供大量优质种苗的繁殖技术之一，但完善、高效的组培再生体系仅限于少数杨树树种或基因型，大部分乡土树种或生产上大量推广应用的优良品种仍不具备组培再生体系。此外，由于杨树基因组较小、雌雄异株、易于遗传操作等特点，被视为木本植物遗传研究的模式树种。建立高效快速的组织培养技术是良种扩繁的基础，同时也可以为植物的遗传转化提供大量的基础材料，为建立植物遗传转化体系提供有力支撑。
[0003]现有杨树组培体系大多以叶盘离体再生为基础，但存在叶盘分化率低、耗时长、丛生芽数量少等缺点，不足以满足市场对良种的需求，需要提供更有效地杨树离体快繁方法。

技术实现思路

[0004]针对现有技术存在的上述问题，本专利技术提供一种利用抽真空处理促进杨树外植体大量、快速分化成芽的方法，解决目前杨树组培过程中分化成芽的效率低的问题。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案如下：
[0006]一种利用抽真空处理促进杨树外植体大量、快速分化成芽的方法，包括：将杨树外植体放入处理液中进行抽真空处理，然后在分化培养基上形成丛生芽。
[0007]优选地，具体步骤包括：
[0008](1)选取杨树组培苗叶片，去除叶片的边缘部分，切成若干叶盘或叶柄；
[0009](2)将叶盘或叶柄放入处理液，置于真空泵中进行抽真空处理；
[0010](3)取出叶盘或叶柄后立即用吸水纸吸去表面液体，将叶片背面朝下置于装有分化培养基的培养皿中，在一定条件下培养叶盘和叶柄，使其分化成芽；
[0011](4)所有外植体材料在分化培养基培养30天后，更换一次新配制的分化培养基继续培养30天；然后将所有材料转移至芽伸长培养基上培养。
[0012]优选地，所述的利用抽真空处理促进杨树外植体大量、快速分化成芽的方法中，所述抽真空的压力值为0.08Mpa。
[0013]优选地，步骤(2)所述抽真空具体时间为3
‑
15min。
[0014]优选地，步骤(2)所述抽真空具体时间为12min。
[0015]优选地，步骤(2)中所述处理液为1/2MS。
[0016]优选地，步骤(3)中所述分化培养基为：MS+蔗糖30g/L+Phytagel 2.5g/L(或琼脂8g/L)+6
‑
BA 0.4mg/L+TDZ 0.01mg/L+NAA 0.1mg/L。
[0017]优选地，步骤(4)中所述芽伸长培养基为：MS+蔗糖30g/L+Phytagel 2.5g/L(或琼脂8g/L)+6
‑
BA 0.4mg/L+NAA 0.1mg/L。
[0018]相比于现有技术，本专利技术的有益效果为：
[0019]本专利技术提供了以山新杨组培苗叶片与叶柄为材料，进行抽真空处理的组织培养技术，可以明显提高杨树叶盘和叶柄的分化率，杨树叶片分化丛生芽数量较对照组增加1.5倍以上，叶片分化丛生芽鲜重较对照组增加3倍以上；叶柄分化丛生芽数量较对照组增加1.5倍以上，叶柄分化苗鲜重较对照组增加5倍以上；表明本专利技术能有效促进杨树外植体分化，最终可以显著提高杨树外植体分化成幼苗的数量，可以在杨树的组培快繁中进行大力推广使用，促进杨树组培快繁技术的发展。
附图说明
[0020]图1为抽真空组(1
‑
5组)和与空白对照(0组)培养60天时山新杨叶盘分化情况照片图；
[0021]图2为抽真空组(1
‑
5组)和与空白对照(0组)培养60天时山新杨叶盘分化率统计分析结果图；
[0022]图3为抽真空组(1
‑
5组)和与空白对照(0组)培养60天时山新杨叶盘丛生芽鲜重统计分析结果图；
[0023]图4为抽真空12min组与空白对照组在不同培养时期山新杨叶盘分化芽数目统计分析结果图，注：H代表丛生芽高度；
[0024]图5为抽真空组(1
‑
5组)和与空白对照(0组)培养60天时山新杨叶柄分化情况照片图；
[0025]图6为抽真空组(1
‑
5组)和与空白对照(0组)培养60天时山新杨叶柄分化率统计分析结果图；
[0026]图7为抽真空组(1
‑
5组)和与空白对照(0组)培养60天时山新杨叶柄丛生芽鲜重统计分析结果图；
[0027]图8为抽真空12min组与空白对照组在不同培养时期山新杨叶柄分化芽数目统计分析结果图，注：H代表丛生芽高度。
具体实施方式
[0028]下面结合具体实施例对本专利技术进一步进行描述。下述实施例中所用的材料、试剂，如无特殊说明，均可通过商业途径购买。
[0029]实施例1：
[0030]1、培养基配制
[0031]分化培养基为：MS+蔗糖30g/L+Phytagel 2.5g/L(或琼脂8g/L)+6
‑
BA 0.4mg/L+TDZ 0.01mg/L+NAA 0.1mg/L，调整pH值为5.80
‑
5.85。
[0032]抽真空处理液：1/2MS处理液，调整pH值为5.80
‑
5.85。
[0033]将以上培养基121℃灭菌20min，待培养基冷却至60℃时倒入直径9cm、高2cm的圆
形玻璃培养皿中，每皿25mL，待培养基完全凝固后备用。
[0034]2、采用生长良好、苗龄为1.5个月左右的山新杨(Populus davidiana
×
P.bolleana)组培幼苗为实验材料，选取顶芽以下第3
‑
4片完全展开叶，在超净工作台上用手术剪剪断叶柄远轴端(即叶柄与叶片交界部位)；将选取的叶片置于无菌大玻璃皿上，利用手术刀将叶片边缘去除，再将其切成2.25cm2左右的叶盘。
[0035]3、用镊子将一部分切好的叶盘直接放入分化培养基，每皿5个叶盘，10个叶盘为一组，标记为0组，3次重复；另外一部分叶盘放入盛有150mL 1/2MS处理液的三角瓶中，设置5个组别，标记为1、2、3、4、5组，每组10个叶盘，3次重复。0组为空白对照，不进行抽真空处理；1
‑
4组依次置于真空泵(美国GEST真空泵ROA
‑
P201)中抽真空处理3min、6min、9min、12min、15min，压力值为0.08Mpa。
[0036]4、每一组抽真空本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用抽真空处理促进杨树外植体大量、快速分化成芽的方法，其特征在于，将杨树外植体放入处理液中进行抽真空处理，然后在分化培养基上形成丛生芽。2.根据权利要求1所述的利用抽真空处理促进杨树外植体大量、快速分化成芽的方法，其特征在于，具体步骤包括：(1)选取杨树组培苗叶片，去除叶片的边缘部分，切成若干叶盘或叶柄；(2)将叶盘或叶柄放入处理液，置于真空泵中进行抽真空处理；(3)取出叶盘或叶柄后立即用吸水纸吸去表面液体，将叶片背面朝下置于装有分化培养基的培养皿中培养，使其分化成芽。3.根据权利要求2所述的利用抽真空处理促进杨树外植体大量、快速分化成芽的方法，其特征在于，所述抽真空的压力值为0.08Mpa。4.根据权利要求2所述的利用抽真空处理促进杨树外植体大量、快速分化成芽的方法，其特征在于，步骤(2)中所述抽真空处理具体时间为3
‑
15min。5.根据权利要求4...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱超，陈赢男，尹佟明，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：