一种检测前列腺特异性抗原的荧光适配体传感器和方法技术

本申请公开了一种检测前列腺特异性抗原的荧光适配体传感器和方法，所述荧光适配体传感器包括溶剂，以及分散于所述溶剂的5

【技术实现步骤摘要】
一种检测前列腺特异性抗原的荧光适配体传感器和方法


[0001]本申请涉涉及传感器
，特别是涉及一种检测前列腺特异性抗原的荧光适配体传感器和方法。

技术介绍

[0002]前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤,也是男性癌症死亡的主要原因。前列腺特异性抗原(PSA)位于前列腺内，能够特异反映前列腺的状况。一般，当人血清中PAS的浓度高于10ng/mL时，提示人体患前列腺癌的风险显著增加。因此，开发高灵敏度的PAS检测方法对前列腺癌的早期诊断至关重要，然而在实际样品中，前列腺特异性抗原的浓度很低，难以实现高灵敏度、高选择性的检测。
[0003]目前，常用的前列腺特异性抗原检测方法主要有：电化学发光法、液相色谱法、光电化学法、表面增加拉曼光谱(SERS)以及电化学适配体传感器等，但这些方法存在选择性差、灵敏度低、操作繁琐等问题，影响前列腺特异性抗原的检测结果。

技术实现思路

[0004]基于上述技术问题，本申请提供了一种检测前列腺特异性抗原的荧光适配体传感器和方法，能够高灵敏度、高选择性检测出待测样品中前列腺特异性抗原的含量。
[0005]本申请中荧光适配体传感器，包括溶剂，以及分散于所述溶剂的5
‑
羧基四甲基罗丹明标记的适配体和猝灭剂PCN
‑
223。
[0006]其中，PCN
‑
223是一种Zr
‑
MOF材料，由Zr6金属簇和四(4
‑
羧基苯基)卟啉有机配体组成，有12个连接节点。PCN
>‑
223具有羧基、苯基和卟啉基，比表面积大，生物相容性好等特点。
[0007]如图1所示的以PCN
‑
223为猝灭剂的荧光适配体传感器检测前列腺特异性抗原(PSA)的原理图：TAMRA标记的适配体通过π
‑
π堆积和氢键作用吸附在PCN
‑
223上，由于TAMRA和PCN
‑
223之间的的光诱导电子转移过程，导致荧光猝灭；而加入PSA时，其与TAMRA标记的适配体结合形成复合物，导致适配体远离PCN
‑
223表面，从而使荧光恢复。
[0008]可选的，所述适配体的核酸序列为：
[0009]5‑
AATTAAAGCTCGCCATCAAATAGC
‑3’
。
[0010]可选的，5
‑
羧基四甲基罗丹明标记的适配体序列和猝灭剂PCN
‑
223的摩尔比为1：164～1974。
[0011]可选的，所述5
‑
羧基四甲基罗丹明标记的适配体序列的浓度为50nM。
[0012]可选的，所述猝灭剂PCN
‑
223溶液的浓度为0.025～0.2mg/mL。
[0013]可选的，所述溶剂为磷酸缓冲盐溶液，例如10mM磷酸缓冲盐溶液，pH 7.4。
[0014]本申请还提供了一种检测前列腺特异性抗原的方法，采用所述的荧光适配体传感器。
[0015]可选的，所述方法包括以下步骤：
[0016]分别配制5
‑
羧基四甲基罗丹明标记的适配体序列溶液和前列腺特异性抗原溶液，并将两溶液混合进行第一次孵育；
[0017]加入猝灭剂溶液进行第二次孵育；
[0018]孵育结束后，测量体系的荧光强度。
[0019]可选的，所述第一次孵育的温度为30～60℃，时间为5～50min；第一次孵育的目的是使PSA与TAMRA适配体结合；
[0020]所述第二次孵育的温度为30～60℃，时间为5～20min；第二次孵育的目的PCN
‑
223猝灭TAMRA适配体的荧光。
[0021]可选的，所述方法包括：
[0022]建立前列腺特异性抗原浓度C
PSA
与荧光恢复响应值ΔF的标准曲线，所述荧光恢复响应值ΔF＝F
‑
F0，其中F0为未加入前列腺特异性抗原的体系在582nm处的荧光强度，F为加入前列腺特异性抗原的体系在582nm处的荧光强度；
[0023]检测待测样品的荧光强度F，并计算ΔF，根据所述标准曲线的关系方程计算待测样品中前列腺特异性抗原的含量。
[0024]与现有技术相比，本申请基于PCN
‑
223构建的荧光适配体传感器对前列腺特异性抗原表现出优异的选择性和灵敏度，能够高效检出待测样品中前列腺特异性抗原的含量，具有良好的应用前景。
附图说明
[0025]图1为本申请的荧光适配体传感器检测PSA的原理图；
[0026]图2为(a)TAMRA适配体、(b)PCN
‑
223+TAMRA适配体+PSA、(c)PCN
‑
223+TAMRA适配体、(d)PCN
‑
223的荧光发射光谱图，其中PCN
‑
223的浓度为0.1mg/mL，TAMRA适配体的浓度为50nM，PAS的浓度为20ng/mL；
[0027]图3A为不同浓度PCN
‑
223制备的荧光适配体传感器检测PAS的荧光变化图、从上到下PCN
‑
223浓度依次为：a(0mg/mL)、b(0.025mg/mL)、c(0.05mg/mL)、d(0.075mg/mL)、e(0.1mg/mL)、f(0.2mg/mL)、g(0.3mg/mL)；
[0028]图3B为PCN
‑
223浓度与检测荧光强度的关系图，从上到下PCN
‑
223浓度依次为：a(0mg/mL)、b(0.025mg/mL)、c(0.05mg/mL)、d(0.075mg/mL)、e(0.1mg/mL)、f(0.2mg/mL)、g(0.3mg/mL)；
[0029]图3C为孵育时间对荧光变化的影响图；
[0030]图3D为(a)PCN
‑
223+TAMRA适配体、(b)PCN
‑
223、(c)TAMRA适配体的可见吸收光谱图；
[0031]图4为孵育时间与荧光恢复响应值ΔF关系图；
[0032]图5为PCN
‑
223的猝灭时间与荧光恢复响应值ΔF关系图；
[0033]图6为孵育温度与荧光恢复响应值ΔF关系图；
[0034]图7为pH与荧光恢复响应值ΔF关系图；
[0035]图8为不同种类猝灭剂与荧光恢复响应值ΔF关系图；
[0036]图9A为不同浓度PAS下荧光适配体传感器的荧光发射光谱，从上到下浓度依次为a(0ng/mL)、b(0.1ng/mL)、c(1ng/mL)、d(4ng/mL)、e(8ng/mL)、f(10ng/mL)、g(16ng/mL)、h
(20ng/mL)、i(24ng/mL)；
[0037]图9B为PAS浓度与荧光恢复响应值ΔF的标准本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测前列腺特异性抗原的荧光适配体传感器，其特征在于，包括溶剂，以及分散于所述溶剂的5
‑
羧基四甲基罗丹明标记的适配体和猝灭剂PCN
‑
223。2.根据权利要求1所述的荧光适配体传感器，其特征在于，所述适配体的核酸序列为：5
‑
AATTAAAGCTCGCCATCAAATAGC
‑3’
。3.根据权利要求1所述的荧光适配体传感器，其特征在于，5
‑
羧基四甲基罗丹明标记的适配体和猝灭剂PCN
‑
223的摩尔比为1：164～1974。4.根据权利要求1所述的荧光适配体传感器，其特征在于，所述5
‑
羧基四甲基罗丹明标记的适配体序列的浓度为50nM。5.根据权利要求1所述的荧光适配体传感器，其特征在于，所述猝灭剂PCN
‑
223溶液的浓度为0.025～0.3mg/mL。6.一种检测前列腺特异性抗原...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾延波，李蕾，陈世洁，杨义文，郭隆华，竺天翊，王海龙，
申请(专利权)人：嘉兴学院，
类型：发明
国别省市：