一种抑制猪卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡的lncRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抑制猪卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡的lncRNA及其应用，属于lncRNA的功能探究技术研发领域，公开了所述lncRNA NORFA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述lncRNA NORFA在猪健康卵泡中的表达水平显著高于闭锁卵泡；在体外培养的猪卵巢颗粒细胞中过表达lncRNA NORFA可显著抑制细胞凋亡水平，而敲减内源性lncRNA NORFA则出现相反结果；所述lncRNA NORFA的靶基因为TGFBR2基因，两者均具有抑制猪卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡的能力，本发明专利技术提供的lncRNA NORFA为抑制卵泡闭锁、提高母猪繁殖力提供技术支持，同时对养猪业的实际生产具有重要经济价值。产具有重要经济价值。产具有重要经济价值。

【技术实现步骤摘要】
一种抑制猪卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡的lncRNA及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学中lncRNA功能探究技术研发领域，涉及一种抑制猪卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡的lncRNA及其应用。

技术介绍

[0002]众所周知，卵泡的正常发育和排卵对于维持雌性哺乳动物繁殖过程至关重要，而卵泡闭锁作为雌性哺乳动物卵巢组织中一种普遍的生理现象，不仅降低了原始卵泡库的利用率，造成生物资源的浪费，同时严重制约了雌性哺乳动物繁殖力的发挥。因此，探究卵泡闭锁的分子机制对于减少卵泡闭锁、提高排卵率以及维持雌性动物正常的繁殖过程具有重大意义。目前，研究发现颗粒细胞凋亡或程序性死亡是雌性哺乳动物卵泡闭锁的主要诱因，而前者主要受到一个由体内、外多因素组成的复杂网络调控。近期，相关研究表明长链非编码RNAs(Long non
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coding RNAs,lncRNAs)作为一类重要的表观遗传因子在上述过程中发挥重要作用。
[0003]LncRNAs是一类长度大于200nt、缺乏开放阅读框或编码蛋白能力的内源性RNA分子。特征分析发现lncRNAs的表达丰度较低、进化保守性与稳定性较差、且具有严格的组织表达模式，上述特点也成为了lncRNAs研究过程中的难点。根据目前已发表的高通量测序研究表明lncRNAs在卵巢组织中广泛表达，然而仅有极少数的lncRNAs经过系统的研究并具有完备的功能注释。近年来，相关研究鉴定了若干与雌性哺乳动物繁殖过程相关的lncRNAs，例如lncRNA Neat1和lncRNA H19与雌性小鼠黄体形成息息相关，敲除上述两个lncRNAs均可导致黄体缺失、孕酮合成异常、卵巢缺陷，最终导致雌性小鼠不孕不育；另外，linc
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01572:28与lncRNA MALAT1被证实可分别通过KIP1与ERK/MAPK轴调控人和小鼠卵巢颗粒细胞增殖水平。上述研究表明lncRNAs在雌性卵巢组织中发挥重要作用，但目前lncRNAs对雌性哺乳动物卵巢功能和繁殖过程的影响程度尚不清楚，尤其是对猪等大型家畜卵泡发育、卵巢颗粒细胞状态与功能的调控及机制有待进一步研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种抑制猪卵泡闭锁与卵巢颗粒细胞凋亡的lncRNA及其应用；本专利技术提供的lncRNA NORFA的表达水平在猪卵泡闭锁过程中显著下调，lncRNA NORFA具有抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞凋亡，促进卵母细胞体外培养成熟的功能。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0006]本专利技术提供了一种抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞凋亡的lncRNA NORFA核苷酸全序列，序列长度为739nt，如SEQ ID No.1所示。
[0007]本专利技术提供了扩增所述抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞凋亡的lncRNA NORFA的引物对，包括核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的反向引物。
[0008]本专利技术提供了所述的lncRNA NORFA在抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞凋亡中的
应用，通过在猪卵巢颗粒细胞中敲入或过表达所述lncRNA NORFA，提高抗卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡的能力。
[0009]本专利技术提供了所述lncRNA NORFA的靶基因在抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞凋亡中的应用，通过在猪卵巢颗粒细胞中敲入或过表达所述lncRNA NORFA的靶基因，提高抗卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡的能力。
[0010]所述的靶基因为TGFBR2基因，该TGFBR2基因的序列号为ENSSSCG00025024102。
[0011]扩增所述TGFBR2基因的引物对包括核苷酸序列如SEQ ID No.4所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID No.5所示的反向引物。
[0012]本专利技术提供了所述的lncRNA NORFA在促进体外培养猪卵母细胞成熟能力中的应用，过表达所述的lncRNA NORFA能够提高猪卵丘
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卵母细胞复合体在体外培养过程中卵母细胞的成熟率。
[0013]本专利技术提供了所述lncRNA NORFA的靶基因在促进体外培养猪卵母细胞成熟能力中的应用，过表达所述lncRNA NORFA的靶基因能够提高猪卵丘
‑
卵母细胞复合体在体外培养过程中卵母细胞的成熟率。
[0014]优选的，所述应用通过提高猪卵巢颗粒细胞中所述TGFBR2基因的表达水平实现。
[0015]本专利技术的有益效果：
[0016]本专利技术提供了一种能够抑制猪卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡的lncRNA及其应用；本专利技术提供的lncRNA NORFA的表达水平在猪卵泡闭锁过程中显著下调，lncRNA NORFA及其靶基因TGFBR2具有抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞凋亡，促进卵母细胞体外培养成熟能力的功能，为促进卵泡发育和提高母猪繁殖力提供技术支持。
附图说明
[0017]图1为利用RACE技术扩增获取猪lncRNA NORFA末端序列；
[0018]其中，A为猪lncRNA NORFA 5
’
末端扩增产物电泳鉴定结果；B为猪lncRNA NORFA 3
’
末端扩增产物电泳鉴定结果。
[0019]图2为lncRNA NORFA在母猪健康与闭锁卵泡中的表达水平比较。
[0020]图3为lncRNA NORFA和靶基因在猪卵泡中表达水平的相关性。
[0021]图4为lncRNA NORFA对猪卵巢颗粒细胞中靶基因表达水平的影响；
[0022]其中，A为过表达lncRNA NORFA对靶基因TGFBR2表达水平的影响；B为敲低内源性lncRNA NORFA对靶基因TGFBR2表达水平的影响。
[0023]图5为过表达lncRNA NORFA对猪卵巢颗粒细胞凋亡水平的影响；
[0024]其中，A为过表达lncRNA NORFA对猪卵巢颗粒细胞凋亡水平的影响；B为敲低内源性lncRNA NORFA对猪卵巢颗粒细胞凋亡水平的影响。
[0025]图6为lncRNA NORFA靶基因TGFBR2对猪卵巢颗粒细胞凋亡水平的影响；
[0026]其中，A为过表达靶基因TGFBR2对猪卵巢颗粒细胞凋亡水平的影响；B为敲低内源性靶基因TGFBR2对猪卵巢颗粒细胞凋亡水平的影响。
[0027]图7为过表达lncRNA NORFA后猪体外培养卵母细胞的成熟率。
[0028]图8为过表达靶基因TGFBR2后猪体外培养卵母细胞的成熟率。
[0029]图9为干扰靶基因TGFBR2对lncRNA NORFA抗颗粒细胞凋亡和促卵母细胞成熟功能
的影响；
[0030]其中，A为敲低靶基因TGFBR2对lncRNA NORFA抗颗粒细胞凋亡能力的影响；B为敲低靶基因TGFBR2对lncRNA NORFA促卵母细胞体外成熟能力的影响。
具体实施方式
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞凋亡的lncRNA NORFA，该lncRNA NORFA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。2.扩增权利要求1所述抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞凋亡的lncRNA NORFA的引物对，其特征在于，该引物对包括核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的反向引物。3.权利要求1所述的lncRNA NORFA在抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞凋亡中的应用，其特征在于，通过在卵巢颗粒细胞中敲入或过表达所述的lncRNA NORFA，提高抗卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡的能力。4.权利要求1所述lncRNA NORFA的靶基因在抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞中的应用，其特征在于，通过在卵巢颗粒细胞中敲入或过表达所述lncRNA NORFA的靶基因，提高抗卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡的能力；所述的靶基因为TGFBR2基因，该TGFBR2基因的序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜星，李齐发，李琦琦，潘增祥，杨柳，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：