提供了新型培养基配方，其经彻底优化以支持在低接种密度条件下的高生长速率，要求最少的培养基更换，并且成本低廉，而同时保持分化重现性。该配方能够支持人诱导型多能干细胞(hiPSC)生成和>100次传代的培养两者。适合于制备100升的培养基的B8补充物等份试样的生成对于任何具有基本设备的研究实验室来说是简单的，其中整瓶培养基花费～$12USD/升。用该制剂，周末自由式hiPSC细胞培养方法是可能的。周末自由式hiPSC细胞培养方法是可能的。周末自由式hiPSC细胞培养方法是可能的。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于人诱导型多能干细胞的具成本效益的培养基和操作方案
[0001]交叉引用
[0002]本申请要求2019年9月19日提交的美国临时申请号62/902,561(其通过提及而以其整体合并入本文)的权益。
[0003]政府权利
[0004]本专利技术是按照由美国国立卫生研究院所授予的合同HL 121177在政府支持下完成的。政府在本专利技术中具有一定的权利。
[0005]对序列表的参考
[0006]本申请包含序列表，其已经以ASCII形式通过电子方式提交并且通过提及而以其整体特此合并。创建于2020年9月1日的所述ASCII副本被命名为47460
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108_ST25.txt，并且大小为16,452个字节。
[0007]提供了在对于维持多能细胞状态和细胞增殖(特别是人诱导型多能干细胞(hiPSC)的多能细胞状态和细胞增殖)来说必需的成分和浓度方面经优化的细胞培养基。
技术背景
[0008]人诱导型多能干细胞(hiPSC)是功能上永生的，并且可以无限制地增殖，而同时保持分化为(假设地)人体内所有～220个细胞谱系的潜力。hiPSC生成已成为是常规的，这归因于CD71
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血液前成红细胞(Chou等人,2015；Chou等人,2011；Tan等人,2014)或髓样细胞(Eminli等人,2009；Staerk等人,2010)的扩增以及商业的基于仙台病毒的重编程因子表达(Fujie等人,2014；Fusaki等人,2009)的简单性。该简易性已导致增加的对于hiPSC衍生细胞横跨许多领域(包括再生医学、疾病建模、药物发现和药物基因组学)的潜在应用的热情。
[0009]但是，这些应用需要大量hiPSC或源自大量患者的hiPSC系的培养，并且三个主要的限制变得明显：1.大规模多能细胞培养的成本，这对于高患者数目计划来说是难以承受的；2.关于每日培养基更换的耗时的要求，这对于工业实验室来说是特别成问题的；3.分化效能的细胞系间可变性，这高度依赖于多能培养一致性和方法学。
[0010]专利技术概述
[0011]人诱导型多能干细胞(hiPSC)培养已成为是常规的，然而多能细胞培养基成本、频繁的培养基更换和分化的重现性仍然是限制性的，从而限制了用于大规模计划的潜力。在此，我们描述了新型hiPSC培养基(B8)的配制，其是培养基成分和浓度的竭尽优化的结果，其中建立了每种组分对于多能状态和细胞增殖的必要性和相对贡献。B8消除了商业培养基的成本的97％。B8配方特别地对于在低接种密度下的快速生长和稳固性进行了优化。
[0012]我们证实了在B8中29个hiPSC系的衍生以及长期多能性维持，而同时保持了核型稳定性。该配方也允许周末自由式给料日程规划，而无需牺牲生长速率或分化能力。因此，该简单的、具成本效益的B8培养基将会使得大的hiPSC疾病建模计划成为可能，例如在药物基因组学和对于再生医学所需要的大规模细胞生产中进行的那些。人诱导型多能干细胞
(hiPSC)培养已成为是常规的，然而多能细胞培养基成本、频繁的培养基更换和分化的重现性仍然是限制性的，从而限制了用于大规模计划的潜力。在此，我们描述了新型hiPSC培养基(B8)的配制，其是培养基成分和浓度的竭尽优化的结果，其中建立了每个组分对于多能状态和细胞增殖的必要性和相对贡献。
[0013]其他方法、特点和/或优点在检查下面的附图和详细描述后是或将会变得是显而易见的。所意欲的是，所有这样的另外的方法、特点和优点都包括在本说明书之内，并且通过所附的权利要求书来进行保护。
[0014]序列简述
[0015]SEQ ID NO:1是人FGF1的氨基酸序列：MFNLPPGNYK KPKLLYCSNG GHFLRILPDG TVDGTRDRSD QHIQLQLSAE SVGEVYIKST ETGQYLAMDT DGLLYGSQTP NEECLFLERL EENHYNTYIS KKHAEKNWFV GLKKNGSCKR GPRTHYGQKA ILFLPLPVSS D。
[0016]SEQ ID NO:2是人FGF1
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4X的氨基酸序列：MFNLPPGNYK KPKLLYCSNG GHFLRILPDG TVDGTRDRSD PHIQLQLIAE SVGEVYIKST ETGQYLAMDT DGLLYGSQTP NEECLFLERL EENGYNTYIS KKHAEKNWFV GLNKNGSCKR GPRTHYGQKA ILFLPLPVSS D。
[0017]SEQ ID NO:3是人FGF2的氨基酸序列：MAAGSITTLP ALPEDGGSGA FPPGHFKDPK RLYCKNGGFF LRIHPDGRVD GVREKSDPHI KLQLQAEERG VVSIKGVCAN RYLAMKEDGR LLASKCVTDE CFFFERLESN NYNTYRSRKY TSWYVALKRT GQYKLGSKTG PGQKAILFLP MSAKS。
[0018]SEQ ID NO:4的人FGF2 K128N的氨基酸序列：MAAGSITTLP ALPEDGGSGA FPPGHFKDPK RLYCKNGGFF LRIHPDGRVD GVREKSDPHI KLQLQAEERG VVSIKGVCAN RYLAMKEDGR LLASKCVTDE CFFFERLESN NYNTYRSRKY TSWYVALNRT GQYKLGSKTG PGQKAILFLP MSAKS。
[0019]SEQ ID NO:5是人FGF2
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G3 R31L,V52T,E54D,H69F,L92Y,S94I,C96N,S109E,T121P的氨基酸序列：MAAGSITTLP ALPEDGGSGA FPPGHFKDPK LLYCKNGGFF LRIHPDGRVD GTRDKSDPFI KLQLQAEERG VVSIKGVCAN RYLAMKEDGR LYAIKNVTDE CFFFERLEEN NYNTYRSRKY PSWYVALKRT GQYKLGSKTG PGQKAILFLP MSAKS。
[0020]SEQ ID NO:6是用于生成关于FGF1
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4X的生长因子质粒的核苷酸序列：
[0021]GGATCCATGTTCAACTTACCCCCCGGCAACTACAAGAAGCCGAAGCTGCTGTATTGCAGCAATGGCGGCCACTTTCTGCGCATTTTACCGGATGGTACCGTTGATGGTACCCGTGATCGTTCAGATCCGCACATCCAGTTACAGCTGATCGCAGAAAGCGTGGGTGAAGTGTACATCAAGAGCACCGAAACCGGCCAGTATCTGGCAATGGATACCGATGGCCTGCTGTATGGTTCACAAACCCCGAACGAAGAATGCCTGTTCCTGGAACGCCTGGAAGAAAAC本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于人诱导型多能干细胞的生长的细胞培养基，其包含：细胞培养基础培养基；成纤维细胞生长因子2；胰岛素或IGF1；硒源。2.权利要求1的细胞培养基，其实质上不包含转化生长因子β1(TGFβ1)、激活蛋白A或白蛋白。3.权利要求1的细胞培养基，其进一步包含TGFβ3、NRG1、转铁蛋白、抗坏血酸或其组合。4.权利要求1的细胞培养基，其进一步包含thiazovivin。5.权利要求1的细胞培养基，其进一步以7.1的pH为特征。6.权利要求1的细胞培养基，其进一步以310mOsm/l的摩尔渗透压浓度为特征。7.权利要求1的细胞培养基，其进一步以处于2438μg/ml的量的碳酸氢钠为特征。8.权利要求1的细胞培养基，其中所述细胞培养基础培养基为DMEM/F12。9.权利要求1的细胞培养基，其中所述FGF2为从由SEQ ID NO:4、5或15组成的组中选择的重组蛋白质。10.权利要求1的细胞培养基，其中所述亚硒酸盐为亚硒酸钠。11.权利要求3的细胞培养基，其中所述TGFβ3为SEQ ID NO:16的重组蛋白质，或者所述NRG1为SEQ ID NO:17的重组蛋白质。12.权利要求1的细胞培养基，其中所述培养基包含：在DMEM/F12培养基中配制的40ng/ml FGF2
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G3、20μg/ml胰岛素、20ng/ml亚硒酸钠。13.权利要求12的细胞培养基，其包含在DMEM/F12培养基中配制的40ng/ml FGF2
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G3(SEQ ID NO:15)、20μg/ml胰岛素、20ng/ml亚硒酸钠、20μg/ml转铁蛋白、0.1ng/ml TGFβ3(SEQ ID NO:16)、0.1ng/mlNRG1(SEQ ID NO:17)、200...
【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：
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