一种谷糠乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种谷糠乳杆菌及其应用，谷糠乳杆菌Lf

【技术实现步骤摘要】
一种谷糠乳杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种谷糠乳杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]目前，根癌病是植物上的“癌症”，世界植保领域的四大难题之一，根癌病主要危害根部，主根、侧根染病部位出现小的突起，逐渐扩展为瘤状物，也有多个小瘤聚集成大瘤，受害植株地上部生长势弱，植株矮小，严重时全株死亡。根癌病作为一种严重的细菌性病害，病原菌为根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)，其寄主范围广，可侵染93科331属643种双子叶植物和少数裸子植物。
[0003]由于根癌土壤杆菌特殊的致病机制导致防治极其困难。在蓝莓生产实践中通常采用农业栽培管理，选育抗病品种和化学药剂防治的方法来控制蓝莓根癌病的发生，其中化学防治以其见效快、使用简便、方便快捷的优点而被广泛使用。近年来，根癌病生物防治研究发展较快，如放射性土壤杆菌K84和MI
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15，以及无致病性的葡萄土壤杆菌E26等对作物根癌病具有良好的防效，生物防治以其生态环境友好、成本低、无污染的特点成为植物病害防治的热门研究领域。
[0004]蔬菜细菌性软腐病危害寄主广泛，病菌多潜伏在植株组织内部，储藏期间，易从外叶茎根部伤处开始，逐渐向内腐烂。因此，防治蔬菜软腐病亟不可待。
[0005]目前，对蔬菜软腐病的防治主要采用选育抗病品种和化学药剂防治相结合的方法。魔芋种植过程中通常与玉米等作物间作，结合生物菌肥，进行控制魔芋软腐病，但控病效果不十分理想，极需寻求一种高效的生防菌剂。
[0006]经文献检索，尚未见利用谷糠乳杆菌制备生物制剂，并应用于大田防治蓝莓根癌病和白菜软腐病的公开报道。
[0007]通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：
[0008](1)目前根癌病在云南多个蓝莓种植基地内不同程度的发生，引起较大经济损失，蓝莓根癌病问题急需解决。对蔬菜软腐病防治所采用的选育抗病品种和化学药剂防治相结合的方法，控病效果不十分理想。
[0009](2)现有技术中尚未见利用谷糠乳杆菌制备生物制剂，并应用于大田防治蓝莓根癌病和白菜软腐病的公开报道。

技术实现思路

[0010]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种谷糠乳杆菌(Lactobacillusfarraginis)Lf
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8及其应用。
[0011]本专利技术是这样实现的，一种谷糠乳杆菌Lf
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8，所述谷糠乳杆菌Lf
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8于2021 年12月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNO.24043。
[0012]本专利技术的另一目的在于提供一种所述的谷糠乳杆菌Lf
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8在制备防治蓝莓根癌病、
蔬菜软腐病制剂中的应用。
[0013]进一步，所述谷糠乳杆菌Lf
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8生防菌剂的制备方法包括：
[0014]将谷糠乳杆菌Lf
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8菌株通过常规的固体或液体培养，摇床扩大培养，通过发酵培养制备为生物制剂。
[0015]进一步，所述谷糠乳杆菌Lf
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8生防菌剂的制备方法包括以下步骤：
[0016]步骤一，将谷糠乳杆菌Lf
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8转到固体平板培养基上，在37℃恒温培养48h，继续传代培养2代，获得菌种；
[0017]步骤二，将获得的菌种接种到100mL三角瓶液体培养基中，每瓶装50mL，于37℃恒温静止培养18h，获得种子液；
[0018]步骤三，将种子液按2％的接种量接种到1000mL三角瓶MRS液体培养基中，每瓶装500mL，于37℃恒温静止培养36h，所得培养液为生物制剂；
[0019]步骤四，将生物制剂培养液按2％的接种量转接至发酵罐中进行发酵生产，获得液体制剂。
[0020]进一步，所述步骤一中的固体平板培养基按重量百分比的配方为：胰蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母粉0.5％，葡萄糖2％，吐温80 0.1％，磷酸氢二钾0.2％，乙酸钠0.5％，柠檬酸氢二铵0.2％，七水合硫酸镁0.02％，一水硫酸锰0.005％，琼脂1.7％，含水量为90.58％，pH 6.2～6.5。
[0021]进一步，所述步骤二中的液体培养基按重量百分比的配方为：胰蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母粉0.5％，葡萄糖2％，吐温80 0.1％，磷酸氢二钾0.2％，乙酸钠0.5％，柠檬酸氢二铵0.2％，七水合硫酸镁0.02％，一水硫酸锰0.005％，含水量为92.28％，pH 6.2～6.5。
[0022]进一步，所述步骤三中的液体发酵培养基按重量百分比的配方为：大豆蛋白胨1.5％，牛肉膏1％，酵母粉0.5％，葡萄糖2.5％，吐温80 0.1％，磷酸二氢钾0.2％，乙酸钠0.5％，柠檬酸氢二铵0.2％，七水合硫酸镁0.02％，一水硫酸锰 0.005％，消泡剂0.01％，含水量为92.27％，pH 5.0。
[0023]进一步，所述步骤四中的液体发酵条件包括：
[0024]罐温：发酵罐的罐温均控制在30℃以上，通过插入培养基中的温度计进行测量，以夹层内通入冷水或热水的方法来调节温度。
[0025]罐压：发酵罐的罐压控制在0.5/cm2。
[0026]搅拌：采用静止发酵方式，无需搅拌。
[0027]抽样检查：每2小时自取样管取样1次，取样前以180rpm转速搅拌5min，测定pH，并涂片以结晶紫染色镜检菌体形态、有无杂菌污染、计数，其他培养条件不变。
[0028]培养周期：发酵罐的培养周期为48h，停止培养和放罐，放罐前以180rpm 转速搅拌5min，并取样用稀释平板法进行活菌计数。
[0029]进一步，经稀释平板计数测定含菌量，液体发酵制剂含菌量为30亿CFU/mL。
[0030]进一步，所述谷糠乳杆菌Lf
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8生防菌剂通过灌根、喷雾的方式施用。
[0031]结合上述的技术方案和解决的技术问题，请从以下几方面分析本专利技术所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：
[0032]第一，针对上述现有技术存在的技术问题以及解决该问题的难度，紧密结合本专利技术的所要保护的技术方案以及研发过程中结果和数据等，详细、深刻地分析本专利技术技术方
案如何解决的技术问题，解决问题之后带来的一些具备创造性的技术效果。具体描述如下：
[0033]本专利技术涉及一株谷糠乳杆菌及其应用，属生物
，其生产菌株为谷糠乳杆菌(Lactobacillus farraginis)，命名为Lf
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8，已于2021年12月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 24043。该菌株抑菌谱广、抑菌能力强。对不同寄主根癌病菌如蓝莓、玫瑰和菊花等病原菌、其他蔬菜软腐病菌、烟草青枯病菌等病原细菌都表现广谱抑菌作用，抑制率均在70％本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种谷糠乳杆菌Lf
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8，其特征在于，所述谷糠乳杆菌Lf
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8于2021年12月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO.24043。2.一种如权利要求1所述的谷糠乳杆菌Lf
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8在制备防治蓝莓根癌病、蔬菜软腐病制剂中的应用。3.如权利要求2所述的谷糠乳杆菌Lf
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8在制备防治蓝莓根癌病、蔬菜软腐病制剂中的应用，其特征在于，所述谷糠乳杆菌Lf
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8生防菌剂的制备方法包括：将谷糠乳杆菌Lf
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8菌株通过常规的固体或液体培养，摇床扩大培养，通过发酵培养制备为生物制剂。4.如权利要求2所述的谷糠乳杆菌Lf
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8在制备防治蓝莓根癌病、蔬菜软腐病制剂中的应用，其特征在于，所述谷糠乳杆菌Lf
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8生防菌剂的制备方法包括以下步骤：步骤一，将谷糠乳杆菌Lf
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8转到固体平板培养基上，在37℃恒温培养48h，继续传代培养2代，获得菌种；步骤二，将获得的菌种接种到100mL三角瓶液体培养基中，每瓶装50mL，于37℃恒温静止培养18h，获得种子液；步骤三，将种子液按2％的接种量接种到1000mL三角瓶MRS液体培养基中，每瓶装500mL，于37℃恒温静止培养36h，所得培养液为生物制剂；步骤四，将生物制剂培养液按2％的接种量转接至发酵罐中进行发酵生产，获得液体制剂。5.如权利要求4所述的谷糠乳杆菌Lf
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8在制备防治蓝莓根癌病、蔬菜软腐病制剂中的应用，其特征在于，所述步骤一中的固体平板培养基按重量百分比的配方为：胰蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母粉0.5％，葡萄糖2％，吐温80 0.1％，磷酸氢二钾0.2％，乙酸钠0.5％，柠檬酸氢二铵0.2％，七水合硫酸镁0.02％，一水硫酸锰0.005％，琼脂1.7％，含水量为90.58％，pH 6.2～6.5。6.如权利要求4所述的谷糠...

【专利技术属性】
技术研发人员：姬广海，魏兰芳，何依璐，姚博，赵项武，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：