本发明专利技术提供一种调控月季花瓣颜色的基因RcTTG1及其应用。本发明专利技术第一方面提供一种调控月季花瓣颜色的基因RcTTG1，所述基因RcTTG1具有以下核苷酸序列中的一种：1)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；2)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列通过一个或几个核苷酸的取代、缺失、或添加衍生产生的核苷酸序列；3)与SEQ ID NO.1具有至少80％同源性的核苷酸序列。本发明专利技术从古老月季月月粉中克隆的转录因子RcTTG1，通过基因工程的手段将该基因沉默，获得了花瓣颜色变浅的月季，表明RcTTG1在调控月季的花色发育中具有重要的作用，为月季育种提供了重要的基础。为月季育种提供了重要的基础。为月季育种提供了重要的基础。
【技术实现步骤摘要】
一种调控月季花瓣颜色的基因RcTTG1及其应用
[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种调控月季花瓣颜色的基因RcTTG1及其应用。
技术介绍
[0002]月季(Rosa chinensis Jacq.)，属蔷薇科蔷薇属,多年生木本植物，其不仅香气浓烈而且色泽鲜艳，有“花中皇后”的美称，广泛用于切花、盆花以及园林绿化等。月季对环境的适应性强，花期长，花形千姿百态，花色五彩缤纷，在我国各地均有栽植。花色是月季重要的观赏性状之一，创造新花色成为了现代花卉育种的目标之一。因此，如何通过基因工程的手段改变月季花瓣的颜色，是本领域技术人员持续关注的热点之一。
技术实现思路
[0003]本专利技术提供一种调控月季花瓣颜色的基因RcTTG1及其应用，用于丰富月季花瓣的颜色，为月季育种提供基础。
[0004]本专利技术第一方面提供一种调控月季花瓣颜色的基因RcTTG1，所述基因具有以下核苷酸序列中的一种：
[0005]1)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；
[0006]2)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列通过一个或几个核苷酸的取代、缺失、或添加衍生产生的核苷酸序列；
[0007]3)与SEQ ID NO.1具有至少80％同源性的核苷酸序列。
[0008]本专利技术第二方面提供一种调控月季花瓣颜色的蛋白，所述蛋白由上述基因编码得到。
[0009]本专利技术第三方面提供一种重组载体，所述重组载体包含上述核苷酸序列。
[0010]进一步地，所述重组载体为pTRV2病毒载体。
[0011]本专利技术第四方面提供一种重组转化体，所述重组转化体包含上述任一所述的重组载体。
[0012]进一步地，所述重组转化体为农杆菌GV3101。
[0013]本专利技术第五方面提供上述基因在调控月季花瓣颜色中的应用。
[0014]本专利技术第六方面提供一种调控月季花瓣颜色的方法，对所述月季沉默上述核苷酸序列。
[0015]进一步地，将上述核苷酸序列连接到pTRV2病毒载体上面得到重组载体，然后将所述重组载体转入农杆菌GV3101，得到重组转化体，使用所述重组转化体侵染月季花苞。
[0016]进一步地，所述月季为仙境月季或甜蜜马车月季中的一种。
[0017]本专利技术从古老月季月月粉中克隆的转录因子RcTTG1，通过基因工程的手段将该基因沉默，获得了花瓣颜色变浅的月季，表明RcTTG1在调控月季的花色发育中具有重要的作用，为月季育种提供了重要的基础。
附图说明
[0018]图1为蓝色狂想曲月季不同花芽发育时期的花苞图片；
[0019]图2为RcTTG1基因在蓝色狂想曲月季不同发育时期的表达量；
[0020]图3为蓝色狂想曲月季不同器官的图片；
[0021]图4为RcTTG1基因在蓝色狂想曲月季不同器官中的表达量；
[0022]图5为仙境月季在侵染pTRV2
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RcTTG1，8天后对照和沉默突变株系的花瓣表型；
[0023]图6为甜蜜马车月季在侵染pTRV2
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RcTTG1，8天后对照和沉默突变株系的花瓣表型；
[0024]图7为仙境月季在侵染pTRV2
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RcTTG1，8天后对照和沉默突变株系花瓣中RcTTG1和其他花色素苷形成相关基因的表达量；
[0025]图8为甜蜜马车月季在侵染pTRV2
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RcTTG1，8天后对照和沉默突变株系花瓣中RcTTG1和其他花色素苷形成相关基因的表达量。
具体实施方式
[0026]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术的实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。所采用的试剂、载体，若无特殊说明，均为市售或公开渠道可以获得的。
[0028]实施例1月季RcTTG1基因的克隆
[0029]提取古老月季月月粉花瓣的总RNA，提取试剂盒为RNAplant(市售)，利用反转录试剂盒(市售)将总RNA反转录成cDNA。根据转录组测序结果设计引物，引物序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，采用普通PCR方法从月季cDNA中扩增出一条1032p的条带。PCR产物回收，获取核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的基因，命名为RcTTG1；该核苷酸序列编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，由343个氨基酸残基组成，分子量为38.45千道尔顿(kDa)。
[0030]实施例2 RcTTG1基因在月季不同花芽发育时期的表达谱验证
[0031]1、提取图1中所示，不同发育时期的蓝色狂想曲月季的RNA，分别命名为S1
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S4，提取试剂盒为RNAplant(市售)，利用反转录试剂盒(市售)将总RNA反转录成cDNA；
[0032]2、根据转录组测序数据设计引物，引物序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；
[0033]3、以不同发育时期的蓝色狂想曲月季反转录得到的cDNA为模板，对RcTTG1进行不同发育时期的表达谱验证。
[0034]验证结果如图2所示，RcTTG1的表达在不同发育时期受到了显著诱导，说明RcTTG1可能参与了月季的花瓣颜色形成。
[0035]实施例3 RcTTG1基因在月季不同器官部位的表达谱验证
[0036]1、提取图3中所示，不同器官部位的蓝色狂想曲月季的RNA，提取试剂盒为RNAplant(市售)，利用反转录试剂盒(市售)将总RNA反转录成cDNA。
[0037]2、根据转录组测序数据设计引物，引物序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。
[0038]3、以不同器官部位的蓝色狂想曲月季反转录得到的cDNA为模板，对RcTTG1进行不同器官部位的表达谱验证。
[0039]验证结果如图4所示，RcTTG1的表达在不同器官部位中的表达量不同，在花瓣和红色的叶片中表达较高，说明RcTTG1可能参与月季花瓣颜色的形成。
[0040]实施例4 pTRV2病毒诱导仙境月季与甜蜜马车月季的RcTTG1基因沉默
[0041]将RcTTG1基因的开放阅读框可操作地连接于pTRV2病毒载体，形成含有该基因片段的pTRV2
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RcTTG1重组载体，然后将该重组载体转入农杆菌GV3101，通过农杆菌介导的方法，进行抽真空月季花苞，通过7...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种调控月季花瓣颜色的基因RcTTG1，其特征在于，所述基因具有以下核苷酸序列中的一种：1)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；2)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列通过一个或几个核苷酸的取代、缺失、或添加衍生产生的核苷酸序列；3)与SEQ ID NO.1具有至少80％同源性的核苷酸序列。2.一种调控月季花瓣颜色的蛋白，其特征在于，所述蛋白由权利要求1所述的基因编码得到。3.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包含权利要求1所述的核苷酸序列。4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为pTRV2病毒载体。5.一种重组转化体，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：明凤，张忍，刘朋承，王换换，姜胜行，何国仁，
申请(专利权)人：上海师范大学，
类型：发明
国别省市：
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