确定水产品中兽药用药时间的方法和试剂盒及其应用技术

本发明专利技术公开了确定水产品中兽药用药时间的方法和试剂盒及其应用，其中，确定水产品中兽药用药时间的方法，先对对照样本的至少一种组织中待测兽药的含量进行检测，得到兽药差异化的组织分布信息，从而获得鱼类组织中兽药含量的信息，设定适宜的组织为选定组织，并通过构建兽药含量随时间变化模型，比较待测水产品选定组织的兽药浓度与兽药含量随时间变化模型的关系，推测用药时间，从而确定待测水产品停止用药的时间。该方法检测速度快、准确率高。准确率高。

【技术实现步骤摘要】
确定水产品中兽药用药时间的方法和试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及分析化学领域，具体地，涉及确定水产品中兽药用药时间的方法和试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]我国水产品质量安全水平呈稳定提升，但硝基呋喃类药物、孔雀石绿和磺胺类药物残留超标事件仍时有发生。因此，需研究药物在水产养殖动物中的分布与代谢规律，从而保证鲜活水产品的质量安全。孔雀石绿(malachite green，MG)是水产养殖中禁用的一种三苯基甲烷类工业染料，能有效地防治鱼类外部真菌、原虫感染等疾病。孔雀石绿多用于水产动物的繁殖、消毒和运输等环节。另一方面，孔雀石绿和其主要代谢产物隐色孔雀石绿(leucomalachite green，LMG)对人体具有致畸、致癌、致突变的“三致”作用，因此，MG禁止用于所有动物食品中。但是，由于孔雀石绿抗菌效果好、价格低廉，在水产养殖中仍有违规使用的情况。人类食用兽药残留超标的食物，可能会造成体内菌群失衡，耐药菌株产生，中枢神经系统毒性，更有甚者引发变态反应。因此实现食品中痕量药物残留的快速检测，挖掘残留药物在生物体内的分布规律，对保障食品安全、协助食品安全监管具有重要意义。
[0003]由此，确定水产品中兽药用药时间判断休药期的方法有待研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种确定水产品中兽药用药时间的方法，通过构建兽药含量随时间变化模型，快速准确地判断水产品停止用药的时间，有效为食品安全监管提供有效指导。
[0005]需要说明的是，本专利技术是基于专利技术人的下列工作而完成的：
[0006]敞开式质谱(Ambient mass spectrometry,AMS)可在大气压环境中直接进行质谱分析。一系列敞开式质谱技术如直接实时分析(Direct Analysis in Real Time,DART)质谱、萃取电喷雾(extractive electrospray ionization，EESI)质谱和解吸电晕束离子化(desorption corona beam ionization,DCBI)质谱等相继被报道出来。由于AMS技术具有操作简单、分析时间短、无须或简单的样品预处理过程、试剂用量少等优点，目前已在药物分析，生物分析，食品，环境及法医鉴定等许多领域得到广泛应用。其中AP
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MALDI具有高空间分辨率和高精度质量测量的优点，可应用于质谱成像分析。MALDI
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MSI作为一种强大的分子成像技术，可以同时检测和表征多种化合物的空间分布和相对丰度，并能够提供同一组织切片中各种化合物的空间信息，无需额外标记、抗体反应、染色或其他复杂的样品前处理步骤。该技术可以直接分析样品，无需均质化和萃取，从而减少了分析物的损失。由于这些独特的优势，MALDI
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MSI被广泛应用于各个研究领域，特别是在生物组织切片的医学和药学研究中，但其在食品安全研究中的应用仍然较少，专利技术人应用此技术实现了样品不同组织中药物残留建模并用于判定休药期规定，方法前处理简单，分析速度快，特异性高，降低了样品均质过程对判别带来的误差，具有广阔的应用前景。
[0007]因而，根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种确定水产品中兽药用药时间的方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括：选取与待测水产品同品种的水产品进行饲养，并给予设定量的待测兽药，得到对照样本；在停止给予所述待测兽药后多个设定采样时间，分别对所述对照样本的至少一种组织中所述待测兽药的含量进行第一检测，以便得到各所述设定用药时间的所述待测兽药的含量；基于各所述设定用药时间的所述待测兽药的含量，构建所述至少一个组织中兽药含量随时间变化模型；基于所述多个组织中所述兽药含量随时间变化模型和所述待测兽药的药物代谢规律，从所述多个组织选取至少一个所述组织为选定组织；对待测水产品的选定组织中的待测兽药的浓度进行第二检测，其中，所述选定组织的种类为所述对照样品用于所述检测的至少一种组织中的至少一种；以及基于所述待测水产品的所述待测兽药的浓度和相同组织的所述兽药含量随时间变化模型，确定所述待测水产品的用药时间。
[0008]根据本专利技术实施例的确定水产品中兽药用药时间的方法，先对对照样本的至少一种组织中待测兽药的含量进行检测，得到兽药差异化的组织分布信息，从而获得鱼类组织中兽药含量的信息，设定适宜的组织为选定组织，并通过构建兽药含量随时间变化模型，比较待测水产品选定组织的兽药浓度与兽药含量随时间变化模型的关系，推测用药时间，从而确定待测水产品停止用药的时间。该方法易于在实际中应用，检测速度快，样品用量少，可以选择特定组织进行分析，并且分别对可食用部分与非可食用部分进行评价；无需组织匀浆过程，方法准确率高，避免了不同组织混合引入的误差。由此该方法能用于口岸通关监测水产品兽药含量分布等现场分析应用场景，并能为水产养殖业的合理用药和生产中药物残留的精确检测提供参考，从而，能有效为食品安全监管提供指导。
[0009]另外，根据本专利技术上述实施例的确定水产品中兽药用药时间的方法，还可以具有如下附加的技术特征：
[0010]根据本专利技术的实施例，所述第一检测为常压敞开式质谱成像检测。
[0011]根据本专利技术的实施例，所述常压敞开式质谱成像检测包括：将所述水产品进行冷冻切片处理，以便得到待测切片；将所述待测切片进行多次基质喷涂处理，以便得到喷涂后切片；以及利用成像显微镜对所述喷涂后切片进行质谱成像检测，以便得到所述质谱检测信息。
[0012]根据本专利技术的实施例，所述常压敞开式质谱成像检测为基质辅助激光解析飞行时间质谱成像(MALDI
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TOF MSI)质谱检测。
[0013]根据本专利技术的实施例，所述常压敞开式质谱成像检测的质谱条件：离子极性：正离子；质量范围：m/z 100
‑
2000Da；样品电压：3.0
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5.0kV；检测器电压：1.90kV。
[0014]根据本专利技术的实施例，所述成像显微镜的工作参数为：离子源：300
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400nm脉冲激光光源；所述聚焦激光的工作参数为：频率0
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1000Hz，激光强度0
‑
25.0，激光步距10
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100μm；最小激光斑点直径：不大于5μm。
[0015]根据本专利技术的实施例，所述兽药含量随时间变化模型如下所示：
[0016]I＝a*t
b*t
‑
c
[0017]其中，a，b，c是拟合参数，a为药物残留平衡值,bt
‑
c
为所述待测兽药的代谢速率参考项；t是用药时间；I是体内所述待测兽药随时间而变化的含量；且所述兽药含量随时间变化模型的极值点为(e
1/c
，a*e
b/(c*e)
)，其中，e
1/c
为达最大含量时所需时间,a*e
b/(c*e)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种确定水产品中兽药用药时间的方法，其特征在于，包括：选取与待测水产品同品种的水产品进行饲养，并给予设定量的待测兽药，得到对照样本；在停止给予所述待测兽药后多个设定采样时间，分别对所述对照样本的至少一种组织中所述待测兽药的含量进行第一检测，以便得到各所述设定用药时间的所述待测兽药的含量；基于各所述设定用药时间的所述待测兽药的含量，构建所述至少一个组织中兽药含量随时间变化模型；基于所述多个组织中所述兽药含量随时间变化模型和所述待测兽药的药物代谢规律，从所述多个组织选取至少一个所述组织为选定组织；对待测水产品的选定组织中的待测兽药的浓度进行第二检测，其中，所述选定组织的种类为所述对照样品用于所述检测的至少一种组织中的至少一种；以及基于所述待测水产品的所述待测兽药的浓度和相同组织的所述兽药含量随时间变化模型，确定所述待测水产品的用药时间。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一检测为常压敞开式质谱成像检测。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述常压敞开式质谱成像检测包括：将所述水产品进行冷冻切片处理，以便得到待测切片；将所述待测切片进行多次基质喷涂处理，以便得到喷涂后切片；以及利用成像显微镜对所述喷涂后切片进行质谱成像检测，以便得到所述质谱检测信息；所述常压敞开式质谱成像检测为基质辅助激光解析飞行时间质谱成像MALDI
‑
TOF MSI质谱检测。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述常压敞开式质谱成像检测的质谱条件：离子极性：正离子；质量范围：m/z 100
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2000Da；样品电压：3.0
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5.0kV；检测器电压：1.90kV。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述成像显微镜的工作参...

【专利技术属性】
技术研发人员：张峰，贺木易，杨敏莉，边煜，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：