用环保洗涤剂灭活病毒的方法技术

本发明专利技术提供了在重组蛋白质制造领域中使用环保洗涤剂在蛋白质制造过程中灭活产品进料流中的病毒的方法，所述蛋白质旨在用于对患者施用，例如治疗性或诊断性蛋白质。本发明专利技术进一步提供方法，其中用于本发明专利技术的环保洗涤剂保持治疗性或诊断性蛋白质的产品质量，同时有效灭活病毒。灭活病毒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用环保洗涤剂灭活病毒的方法
[0001]本专利技术涉及重组蛋白制造领域。更具体地，本专利技术提供了一种用于在蛋白质制造过程中灭活进料流(feedstream)中的病毒的方法，所述蛋白质旨在用于对患者施用，例如治疗性或诊断性蛋白质。本专利技术进一步提供了一种方法，其中本专利技术的环保(environmentally compatible)洗涤剂有效地提供抗病毒活性并保持治疗性或诊断性蛋白质的产品质量。例如，与使用Triton X
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100的方法和/或不使用洗涤剂的方法相比，这些方法提供了重要的现实世界的生物产品制造优势。
[0002]洗涤剂是治疗性或诊断性蛋白质制造过程中的关键试剂，以确保最终生物产品的安全性。最终生物产品中的病毒污染可产生严重的临床后果，例如，由于源细胞系本身的污染或在各种制造步骤中病毒的偶然引入。因此，洗涤剂用于除去在治疗性或诊断性蛋白质的制造过程中存在于进料流中的病毒污染物的目的。纯化所需蛋白质后，用于产物制造和纯化过程中的生长培养基和缓冲液被灭活并排放到废水中。然而，这种含有在制造和纯化过程中使用的洗涤剂的排放物可引起环境问题，正如洗涤剂的环境风险评估(ERA)所估计的那样。
[0003]目前在生物产品(例如治疗性或诊断性蛋白质)的制造过程中灭活病毒的方法在很大程度上依赖于使用洗涤剂Triton X
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100。Triton X
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100是一种聚氧乙烯醚，通常在不同的实验条件设置下实现稳健的包膜病毒灭活，大于4log。然而，Triton X
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100的降解产物4
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(1,1,3,3
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四甲基丁基)苯酚(又名4
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叔辛基苯酚)已被确定为野生动物的潜在环境毒素，包括可能的雌激素作用。因此，需要从废物流中除去4
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叔辛基苯酚，但这需要复杂、冗长和昂贵的措施。因此，出于对毒性的担忧，EU
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REACH委员会投票将Triton X
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100加入欧盟禁用物质清单XIV中，禁止在2021年之后在重组蛋白制造中使用Triton X
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100。尚未确立在生物制剂制造中替代Triton X
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100的替代试剂。因此，在时间上迫切需要在生物制剂(例如治疗性或诊断性蛋白质)的制造过程中有效灭活病毒的方法，这些方法对环境的毒性低于并入有Triton X
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100的方法。
[0004]已经探索了在蛋白质制造过程中用于灭活病毒、特别是包膜病毒的Triton X
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100的环保替代品，例如在WO2019/121846和WO 2015/073633中。然而，使用不同洗涤剂进行病毒灭活的效果是不同的。由于不溶性或难以从进料流中除去，一些洗涤剂不适合在制造过程中使用。此外，一些洗涤剂增加进料流的浊度和/或起泡，因此需要增加措施来降低进料流的浊度和/或起泡。其他洗涤剂在宽的温度和pH范围内效果不佳，并且需要较高浓度来灭活病毒。这些变化的组合可导致蛋白质制造过程的成本和时间增加。此外，在不同类型和大小的蛋白质的制造进料流中，许多洗涤剂的有效性不足。
[0005]因此，仍然需要在不同类型和大小的治疗性或诊断性蛋白质的制造过程中使用环保洗涤剂有效灭活病毒的方法，所述环保洗涤剂在低温和高温以及pH值范围内、在合理的时间和在合理的此类洗涤剂的浓度下，有效灭活不同的包膜病毒，和/或其是水性的、可溶的和/或易于溶解的，和/或不影响进料流的浊度，因此适合大规模制造。此外，优选在纯化步骤中从产物进料流中充分除去洗涤剂(以满足监管要求)，而无需增加复杂、冗长和/或昂贵的措施，并且保持治疗性或诊断性蛋白质的产品质量。
[0006]因此，本专利技术通过提供在治疗性或诊断性蛋白质的制造过程中灭活病毒的方法，解决了上述一个或多个问题。令人惊讶的是，本专利技术的方法提供了环保洗涤剂，其在宽的温度和/或pH范围内、在不同类型蛋白质的制造中、在合理的时间和合理的浓度范围内高度有效地灭活病毒，没有有毒的环境影响。令人惊讶的是，本专利技术的方法进一步提供了环保洗涤剂的用途，所述环保洗涤剂易于实现完全病毒灭活、至少与Triton
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X 100相当，并且在所使用的浓度下所述环保洗涤剂不具有已知的环境毒性。此外，本专利技术的方法实现了在制造不同类型和大小的治疗性或诊断性蛋白质中、在合理的时间以及合理的浓度范围内、完全病毒灭活，其中在约4℃至至少约30℃的温度范围和宽的pH范围内，病毒对数减少系数(“LRF”)大于约3至大于约6，而对环境没有影响。令人惊讶的是，本专利技术的方法还在制造不同类型和大小的治疗性或诊断性蛋白质中，以合理的浓度范围和在较宽的pH范围内、在约4℃至至少约30℃的温度范围内、在大于1至约180分钟内，在测试的所有包膜病毒中实现了病毒灭活。
[0007]因此，本专利技术提供了一种灭活进料流中的病毒的方法，所述方法包括向进料流中添加环保洗涤剂。在本专利技术的方法中使用的示例性洗涤剂是水溶液，其不显著影响进料流的浊度，因此适合大规模制造治疗性或诊断性蛋白质。此外，在本专利技术中使用的洗涤剂在有或没有之前过滤步骤的情况下，在纯化步骤中被充分并且有效地除去(以满足监管要求)。此外，不需要复杂、冗长和/或昂贵的措施来从进料流中除去洗涤剂。此外，本专利技术方法中使用的示例性洗涤剂不负面影响治疗性或诊断性蛋白质的最终质量。在本专利技术方法中使用的洗涤剂在宽的温度和pH范围内有效地灭活包膜病毒，而没有有毒的环境影响。
[0008]根据本专利技术的一个方面，提供了一种在治疗性或诊断性蛋白质的制造过程中，在进料流中使用烷基糖苷洗涤剂灭活病毒的方法。根据本专利技术的另一方面，在本专利技术的方法中使用的洗涤剂包含大于约40％的十一烷基糖苷。在本专利技术的另一方面，在本专利技术中使用的洗涤剂包含大于约40％的十一烷基糖苷和少于约20％的其他烷基糖苷。在本专利技术的另一方面，在本专利技术中使用的洗涤剂包含大于约40％的十一烷基糖苷和少于约10％的癸烷基糖苷。在又一个实施方案中，在本专利技术的方法中使用的洗涤剂包含约40％至约60％的十一烷基糖苷。在又一个实施方案中，在本专利技术的方法中使用的洗涤剂包含约53％至约57％的十一烷基糖苷。在本专利技术的另一方面，在本专利技术中使用的洗涤剂包含大于约50％的十一烷基糖苷。在又一个实施方案中，在本专利技术的方法中使用的洗涤剂包含约40％至约60％的十一烷基糖苷和少于约20％的其他烷基糖苷。在又一个实施方案中，在本专利技术的方法中使用的洗涤剂包含约40％至约60％的十一烷基糖苷和少于约10％的癸烷基糖苷。在又一个实施方案中，在本专利技术的方法中使用的洗涤剂包含约53％至约57％的十一烷基糖苷和少于约20％的其他烷基糖苷。在又一个实施方案中，在本专利技术的方法中使用的洗涤剂包含约53％至约57％的十一烷基糖苷和少于约10％的癸烷基糖苷。在更进一步的实施方案中，在本专利技术的方法中使用的洗涤剂包含零或小于约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种灭活进料流中的病毒的方法，所述方法包括向进料流中添加最终浓度为约0.05％w/w至约1％w/w的环保洗涤剂，其中所述环保洗涤剂包含大于约40％的十一烷基糖苷。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述洗涤剂包含约40％至约60％的十一烷基糖苷。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述洗涤剂包含约53％至约57％的十一烷基糖苷。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述洗涤剂包含大于约50％的十一烷基糖苷。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述洗涤剂包含小于约10％的癸烷基糖苷。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述洗涤剂是SIMULSOL
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SL 11W。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述洗涤剂是十一烷基糖苷。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中将所述洗涤剂以约0.1％w/w至约1％w/w的浓度添加到所述进料流中。9.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中将所述洗涤剂以约0.3％w/w至约1％w/w的最终浓度添加到所述进料流中。10.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中将所述洗涤剂以约0.1％w/w至约0.3％w/w的最终浓度添加到所述进料流中。11.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中将所述洗涤剂以约0.3％w/w的最终浓度添加到所述进料流中。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中在所述添加洗涤剂的步骤期间，所述进料流在约4℃至约30℃的温度。13.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中在所述添加洗涤剂的步骤期间，所述进料流在约15℃至约30℃的温度。14.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中在所述添加洗涤剂的步骤期间，所述进料流在约15℃至约20℃的温度。15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中在所述添加洗涤剂的步骤期间，所述进料流在约5.5至约8.0的pH。16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，所述方法还包括将所述洗涤剂在所述进料流中孵育约1分钟至约180分钟的步骤。17.根据权利要求16所述的方法，其中在所述孵育步骤之后，所述洗涤剂在进料流中具有大于约1或大于约2的病毒对数减少系数(LRF)。18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述病毒是包膜病毒。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述包膜病毒是逆转录病毒、疱疹病毒、黄病毒、痘病毒、嗜肝DNA病毒、肝炎病毒、正粘病毒、副粘病毒、弹状病毒或披膜病毒。20.根据权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括在约4℃至约30℃的温度、在约5.5至约8.0的pH，将进料流和洗涤剂孵育约15分钟至约180分钟的步骤，其中所述洗涤剂以约0.1％w/w至约1.0％w/w的最终浓度添加到所述进料流中，并且其中进料流中的洗涤剂具有大于约2的病毒对数减少系数(LRF)。21.根据权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括在约4℃至约30℃的温度、在约
5.5至约8.0的pH，将进料流和洗涤剂孵育约6分钟至约180分钟的步骤，其中所述洗涤剂以约0.3％w/w至约1.0％w/w的最终浓度添加到所述进料流中，并且其中进料流中的洗涤剂具有大于约4的病毒对数减少系数(LRF)。22.根据权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括在约4℃至约30℃的温度、在约5.5至约8.0的pH，将进料流和洗涤剂孵育约180分钟的步骤，其中所述洗涤剂以约0.1％w/w至约1.0％w/w的最终浓度添加到所述进料流中，并且其中进料流中的洗涤剂具有大于约5的病毒对数减少系数(LRF)。23.根据权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括在约4℃至约30℃的温度、在约5.5至约8.0的pH，将进料流和洗涤剂孵育约60分钟至约180分钟的步骤，其中所述洗涤剂以约0.3％w/w的最终浓度添加到所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：W，
申请(专利权)人：伊莱利利公司，
类型：发明
国别省市：