一种血小板外泌体的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种高浓度血小板外泌体的提取方法，包括步骤：将高倍浓缩血小板装入冻存管后直接放入液氮中冷冻20~40分钟；从液氮中取出冻存管，并使用35~42℃水浴溶解高倍浓缩血小板；待高倍浓缩血小板完全溶解后，冰浴下对高倍浓缩血小板进行超声破碎；破碎结束后，得高倍浓缩血小板外泌体。血小板浓缩倍数高，高倍浓缩的血小板比普通PRP血小板浓度高，制得外泌体浓度更高，且血小板外泌体的提取方法简单，时间短。时间短。时间短。

【技术实现步骤摘要】
一种血小板外泌体的提取方法


[0001]本专利技术涉及血液分离提取技术，尤其涉及一种高倍浓缩血小板外泌体的提取方法。

技术介绍

[0002]外泌体（Exosome）是由活细胞分泌的直径约为30
‑
150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；外泌体携带有多种蛋白质、脂类、RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。
[0003]外泌体（exosome）因来源细胞差异大小不一，变异范围从30～100nm到40～200nm不等，是生物活性蛋白、脂质、信使核糖核酸（mRNA）和微小核糖核酸（miRNA）的载体，在细胞间通讯及介导生物功能方面起至关重要的作用。外泌体起源于胞内早期内小体（earlyendosome），内小体膜内陷并发育成熟形成多囊体（MVBs），与质膜融合后通过胞吐作用释放。生理条件下，几乎所有代谢活跃的细胞均能释放外泌体，并通过血液、淋巴液、脑脊液等体液系统转运至机体各处，可广泛本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高浓度血小板外泌体的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：将高倍浓缩血小板装入冻存管后直接放入液氮中冷冻20~40分钟；从液氮中取出冻存管，并使用35~42℃水浴溶解高倍浓缩血小板；待高倍浓缩血小板完全溶解后，冰浴下对高倍浓缩血小板进行超声破碎；破碎结束后，得高倍浓缩血小板外泌体。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述高倍浓缩血小板采用如下步骤制得：采集静脉血注入50ml离心管中，随后将所述50ml离心管离心200g、10分钟，停止离心，取上层血浆注入15ml离心管中；往所述15ml离心管中加入血小板浓缩液，上下颠倒混匀；将所述15ml离心管离心1000g、10分钟，停止离心；吸弃所述15ml离心管中上层血浆，保留底部悬液，并不断吹打悬液，获得高倍浓缩的血小板外泌体。3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述血小板浓缩液的加入量为血浆体积的15~25%。4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述血小板浓缩液的加入量为血浆体积的20%。5.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，按照每1000ml浓缩分离液总体积计算，所述血小板浓缩液组分包括: ...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢海涛，谢天仲，薛卫巍，
申请(专利权)人：广东先康达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：