一种转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性纳米颗粒的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种口服转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素(Triptolide,Tri)磁性纳米颗粒的制备方法及其应用。该纳米颗粒是以氨基功能化磁性纳米(MNP

【技术实现步骤摘要】
一种转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性纳米颗粒的制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及制药
，特别涉及一种转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性纳米颗粒的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]癌症是世界上主要的死亡原因之一，严重危害人类的生存。如今，肺癌已成为全球癌症相关死亡的主要原因。肺癌是一种病因复杂的恶性疾病，可能涉及多种因素，如遗传、慢性感染、环境污染、生活方式等。目前，主要的治疗手段包括手术、放疗、靶向治疗和生物免疫治疗。化疗被认为是肺癌的主要治疗策略。一般情况下，由于化疗耐药和放疗疗效有限，癌症患者的预后较差。除了上述治疗方案的挑战外，紫杉醇、阿霉素和5
‑
氟尿嘧啶还存在严重的全身副作用，即心脏毒性、神经毒性和肝毒性。目前，这些治疗方法受限于对肿瘤组织的非选择性和对正常组织的高毒性。因此，识别靶向肺癌组织的新型药物传递系统尤为重要。
[0003]PEG
‑
PLGA是一种具有PEG亲水端和PLGA疏水端的两亲性嵌段聚合物，常用来制备纳米颗粒。PEG和PLGA都是FDA批准的药物载体。发现将PEG链引入到聚合物载体能逃脱间隙内皮网络系统,增加药物的亲水性，延长药物在体内的循环时间，提高载体的稳定性，以及实现被动靶向的目的。与其他聚合物相比，PLGA具有良好的组织相容性和生物降解性。因此，PEG
‑
PLGA是制备MNP的理想载体材料。
[0004]肿瘤的主动靶向可通过转铁蛋白(Tf)来实现。转铁蛋白受体(TfR)是一种跨膜糖蛋白，与转铁蛋白相互作用，介导铁的吸收。通过Tf和TfR介导与肿瘤细胞特异性结合，可用于肿瘤靶向治疗。因此，通过Tf对MNP表面进行修饰，药物可靶向到肿瘤细胞，从而提高肿瘤对MNP的摄取，增强药物的抗肿瘤活性。
[0005]Tri是一种广谱、高抗肿瘤活性的环氧化二萜内酯，对肺癌、神经母细胞瘤和胆管癌等具有很好的抑制效果。现有研究进一步阐述了Tri的抗肿瘤作用及机制，证实了Tri在干预细胞周期、诱导肿瘤细胞凋亡中的确切作用。然而，由于其水溶性差、体内生物利用度低，阻碍了Tri在癌症治疗中的临床应用。为了解决这些挑战，Tri已经被整合到几种纳米载体中，包括但不限于纳米脂质载体、胶束、脂质体、纳米粒子和自微乳化给药系统。Tri的这些纳米配方极大地改善了药物的溶解度和生物利用度。然而，这些纳米载体在靶向肿瘤和一些低载药载体的纳米颗粒聚集方面表现出不足，尚未满足开发最小毒性载药纳米制剂(如三载纳米颗粒)的需求。此外，开发上述纳米颗粒的作者没有加入配体，而配体有能力增强纳米载体的靶向性。基于上述缺点，本研究试图探索改进Tri包封到纳米颗粒的可能性，以克服其在临床上抗肿瘤活性的限制。

技术实现思路

[0006]针对前述
技术介绍
，本专利技术制备了一种Tf修饰的PEG
‑
PLGA
‑
MNP
‑
Tri磁性纳米颗
粒，借以解决Tri溶解度及生物利用度较低的问题，并增加其靶向性，增强抗肿瘤活性。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种转铁蛋白修饰的双靶向Tri磁性纳米颗粒，由如下成分制得：Tri、MNP
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NH2溶液、PEG
‑
PLGA、Tf。
[0009]其中聚乙二醇
‑
聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PEG
‑
PLGA)和Tri的质量比为5：1
‑
10：1。
[0010]PEG
‑
PLGA中，PEG和PLGA的分子量可选用1k
‑
10k。
[0011]Tf和MNP
‑
PEG
‑
PLGA
‑
Tri的摩尔比为1
‑
4：4。
[0012]本专利技术所述的磁性纳米粒包括以下步骤：
[0013](1)MNP
‑
NH2的制备：
[0014]采用共沉淀法合成MNP
‑
NH2。将FeCl3和FeCl2溶解于蒸馏水中，置于三颈瓶中。将混合溶液在氮气保护下加热至90℃，10min后加入氨溶液沉淀Fe
3+
/Fe
2+
金属离子，进行磁分离后干燥可得磁性纳米颗粒(MNPs)。然后，将3
‑
氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)作为胺化试剂，通过硅化作用与Fe3O4纳米颗粒表面结合，形成MNP
‑
NH2。其具体步骤为：将MNPs和APTES溶于80mL乙醇水中，反应液在氮气保护下，40℃回流24h，用热去离子水和乙醇洗涤3次，真空干燥。
[0015](2)MNP
‑
PEG
‑
PLGA
‑
Tri纳米粒子的制备：
[0016]采用W/O/W复合乳液溶剂蒸发法制备载药纳米颗粒。将PEG
‑
PLGA和Tri溶于二氯甲烷作为油相，MNP
‑
NH2溶液作为水相。将水相滴加到油相中，冰浴超声，加入5％PVA溶液，得到W/O/W双乳溶液。将双乳溶液倒入0.5％PVA水溶液中，高速搅拌，使二氯甲烷蒸发。
[0017](3)Tf
‑
MNP
‑
PEG
‑
PLGA
‑
Tri纳米粒子的制备：
[0018]将MNP
‑
PEG
‑
PLGA
‑
Tri纳米颗粒在水浴中孵育1h后，加入1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N
‑
羟基琥珀酰亚胺(NHS)，搅拌混匀。加入Tf，37℃水浴3h，透析(10kDa)12h，除去游离Tri和Tf，冷冻干燥，即可得Tf
‑
MNP
‑
PEG
‑
PLGA
‑
Tri磁性复合纳米颗粒。
[0019]本专利技术还提出一种转铁蛋白修饰的双靶向Tri磁性纳米颗粒在抗肿瘤方面的应用及其靶向作用研究。
[0020]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0021]图1：(A)MNP
‑
PEG
‑
PLGA
‑
Tri的粒径分布。
[0022](B)Tf
‑
MNP
‑
PEG
‑
PLGA
‑
Tri的粒径分布。
[0023](C)MNP
‑
PEG
‑
PLGA
‑
Tri的TEM图像。
[0024](D)Tf
‑
MNP
‑
PEG...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种转铁蛋白修饰的配体双靶向磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于：由Tri、PEG
‑
PLGA、转铁蛋白和氨基化磁性纳米颗粒组成。2.根据权利要求1所述的转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于所述纳米颗粒的粒径范围为100
‑
150nm。3.根据权利要求1所述的转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)MNP
‑
NH2的制备：采用共沉淀法合成NP
‑
NH2。将FeCl3和FeCl2溶解于蒸馏水中，置于三颈瓶中；将混合溶液在氮气保护下加热至90℃，10min后加入氨溶液沉淀Fe
3+
/Fe
2+
金属离子，进行磁分离后干燥可得磁性纳米颗粒(MNPs)；然后，将3
‑
氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)作为胺化试剂，通过硅化作用与Fe3O4纳米颗粒表面结合，形成MNP
‑
NH2。其具体步骤为：将MNPs和APTES溶于80mL乙醇水中，反应液在氮气保护下，40℃回流24h，用热去离子水和乙醇洗涤3次，真空干燥；(2)MNP
‑
PEG
‑
PLGA
‑
Tri纳米粒子的制备：采用W/O/W复合乳液溶剂蒸发法制备载药纳米颗粒。将PEG
‑
PLGA和Tri溶液二氯甲烷作为油相，MNP
‑
NH2溶液作为水相；将水相滴加到油相中，冰浴超声，加入5％PVA溶液，得到W/O/W双乳溶液；将双乳溶液倒入0.5％PVA水溶液中，在室温下用高速分散器搅拌，使二氯甲烷蒸发；用0.22μm滤膜过滤，离心后，冷冻干燥保存；(3)Tf
‑
MNP
‑
PEG
‑
PLGA
‑
Tri纳米粒子的制备：将MNP
‑
PEG
‑
PLGA
‑
Tri纳米颗粒在水浴中孵育1h后，加入1
‑
(3
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王艳春，
申请(专利权)人：王艳春，
类型：发明
国别省市：