检测32个位点基因突变的试剂在制备体能检测产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了检测32个位点基因突变的试剂在制备体能检测产品中的应用，所述试剂包括体能基因32个常见突变位点区域进行扩增的引物，利用该试剂可实现一次性检测体能相关基因32个突变位点，灵敏度高、特异性强、准确性高，并且操作简便、低成本、高通量，检测快速，结果自动判读，易于推广应用。利用本发明专利技术的方案可根据中国人群GWAS研究及数据库开发了一套软件报告系统，根据PRS模型计算，通过检测结果得到运动相关的风险，进而可以辅助更加科学合理的制定个人运动计划和训练强度。的制定个人运动计划和训练强度。

【技术实现步骤摘要】
检测32个位点基因突变的试剂在制备体能检测产品中的应用


[0001]本专利技术涉及分子诊断
，具体涉及检测32个位点基因突变的试剂在制备体能检测产品中的应用。

技术介绍

[0002]体能相关基因检测是一项基于飞行时间核酸质谱平台的创新型基因检测技术，通过采集受检者的口腔粘膜样本，对样本中的DNA进行核酸质谱分析，得出受检者是否存在运动相关基因突变，了解个人运动天赋，为制定运动计划和训练强度提供检测依据。
[0003]运动实践表明：一个人运动遗传素质的优劣决定其运动能力的上限及可训练性的程度。其中最根本的原因就在于不同的个体遗传背景不同，即存在运动天赋的差异。
[0004]一、先天遗传决定性状特征之差异。人类的生物学性状一方面受遗传控制，另一方面又受环境制约。运动员对训练刺激有多大的反应，在很大的程度上取决于遗传度的高低。对一些遗传度较高的性状，如耐力、最大摄氧量、红白肌纤维比例等，很难通过训练来提高。
[0005]二、性状差异决定运动能力之高低。研究显示，良好的身体性状特征是杰出运动能力获得的必要条件，决定着运动能力发展的空间。近年来分子遗传学研究多次证实与人类运动能力相关的诸如肌肉力量、耐力、平衡力、协调性、柔韧性、有氧运动能力、无氧运动能力、训练应答以及疲劳的发生发展等都有重要的生物学背景。在环境条件和训练方式大致相同的情况下，不同个体在运动能力、体能、领悟力以及训练应答等方面都存在着明显的差异。因此，要想在某些运动项目上获得优异的运动成绩，良好的身体性状特征是最基本的条件。体能相关基因检测可以为运动员在制定运动计划和训练强度上提供了必要的依据，在对身体条件安全的情况下，更大限度的提高训练效率，使运动员能够有更加科学合理的训练计划，取得更好的成绩。当然，体能相关基因检测同样也适用于学生，以及想要培养某一项专业运动项目的人，可以全面的了解个人的运动能力，在选择运动项目时提供科学的建议。
[0006]基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix Assisted Laser Desorption IonizationTime
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of
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flight Mass Spectrometry，MALDI
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TOF MS)的基本原理是将分析物分散在基质分子中并形成晶体，当用激光照射晶体时，由于基质分子经辐射所吸收的能量，导致能量蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，致使基质和分析物膨胀并进入气相。MALDI所产生的质谱图多为单电荷离子，因而质谱图中的离子与多肽和蛋白质的质量有对应关系，并以质/荷比计算分子量。MALDI产生的离子常用飞行时间(Time
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Flight,TOF)检测器来检测，最后根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即通过离子的质量电荷之比(M/Z)与离子的飞行时间成正比来分析离子，并测得样品分子的分子量。MALDI
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TOF质谱很适合用于对蛋白质、多肽和多糖、核酸等生物大分子的研究。因其具有测定质量范围宽、灵敏度高、速度快、精确度高及对盐的耐受性较好等优点，已广泛应用于蛋白质及多肽的分子量和序列测定。
[0007]本专利技术的体能相关基因位点进行MALDI
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TOF质谱检测存在的难点：各检测位点的
扩增引物(即多重PCR引物)设计，以及延伸引物设计，复合扩增时各引物比例，体系中各成分最适浓度等，都需要进行优化，最终实现符合实际应用要求的位点内、组内及组间均衡性与稳定性，有些位点序列结构特殊，或GC含量较高，较难设计多重PCR的引物。

技术实现思路

[0008]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种检测32个位点基因突变的试剂在制备体能检测产品中的应用，通过采用核酸质谱技术对检测者运动天赋相关的基因进行检测，可一次性同时检测29个基因，共32个突变位点，从11个体能相关方面进行检测结果的说明，并且可以通过检测结果得到运动相关的风险，进而可以辅助更加科学合理的制定个人运动计划和训练强度。
[0009]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0010]检测32个位点基因突变的试剂在制备体能检测产品中的应用，其特征在于：所述32个位点为rs12722、rs10887741、rs1815739、rs2253206、rs11549465、rs1042713、rs3764352、 rs12612420、rs6265、rs2073711、rs1800795、rs363050、rs800562、rs699、rs1842129、rs12143842、 rs2016520、rs4665058、rs679620、rs1799945、rs363039、rs4783307、rs2267668、rs4994、rs591058、 rs1799722、rs8097348、rs1800012、rs8192678、rs4948418、rs1208和rs17602729。
[0011]本专利技术优选的实施方式，所述试剂为32个检测位点的扩增引物，所述扩增引物如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.64所示。
[0012]本专利技术优选的实施方式，所述试剂还包括所述检测位点的单碱基延伸引物。
[0013]本专利技术优选的实施方式，所述单碱基延伸引物如SEQ ID NO.65～SEQ ID NO.96所示。
[0014]本专利技术优选的实施方式，所述扩增引物各序列的浓度为0.3～3μM；所述延伸引物各序列的浓度为3～30μM。
[0015]本专利技术优选的实施方式，所述试剂盒还包括消化扩增体系中多余dNTPs和引物的反应试剂、除盐试剂和检测芯片。
[0016]本专利技术优选的实施方式，所述反应试剂为SAP酶和SAP反应混合液；所述除盐试剂为阳离子交换树脂粉末。
[0017]本专利技术优选的实施方式，所述检测芯片为包括含384个已预点基质的检测点硅基芯片。
[0018]本专利技术优选的实施方式，所述试剂还包括PCR扩增缓冲液，Mg
2+
、dATP、dCTP、dTTP、 dUTP、dGTP、Taq酶和UNG酶。
[0019]本专利技术优选的实施方式，所述检测产品采用飞行时间质谱检测系统进行质谱检测。
[0020]本专利技术的有益效果在于：
[0021](1)本专利技术提供了一种检测体能相关基因位点的引物组合和突变检测试剂盒，优化的体系和试剂灵敏度高，特异性强，可检测低至0.2ng的人gDNA核酸样本；配套一体化检测平台，操作简便快速，结果分析容易，通量高，成本低，准确性高，具有比现有基于QPCR或 NGS方法学的相关产品更优异的性能，实用性也非常突出。
[0022](2)本专利技术参考全球共享的SNP数据库NCBI dbSNP(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/)、 OMIM数据库(http://www.omim.org/)、国际千人基因组SNP数据库 (https://www.n本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测32个位点基因突变的试剂在制备体能检测产品中的应用，其特征在于：所述32个位点为rs12722、rs10887741、rs1815739、rs2253206、rs11549465、rs1042713、rs3764352、rs12612420、rs6265、rs2073711、rs1800795、rs363050、rs800562、rs699、rs1842129、rs12143842、rs2016520、rs4665058、rs679620、rs1799945、rs363039、rs4783307、rs2267668、rs4994、rs591058、rs1799722、rs8097348、rs1800012、rs8192678、rs4948418、rs1208和rs17602729。2.根据权利要求1所述检测32个位点基因突变的试剂在制备体能检测产品中的应用，其特征在于：所述试剂为32个检测位点的扩增引物，所述扩增引物如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.64所示。3.根据权利要求1所述检测32个位点基因突变的试剂在制备体能检测产品中的应用，其特征在于：所述试剂还包括所述检测位点的单碱基延伸引物。4.根据权利要求3所述检测32个位点基因突变的试剂在制备体能检测产品中的应用，其特征在于：所述单碱基...

【专利技术属性】
技术研发人员：张春燕，田亚平，何昆仑，李春宝，崔佳奕，李锦，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：