一株腐植酸降解细菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供一株腐殖酸降解细菌，所述腐殖酸降解细菌为海滨芽孢杆菌Bacillus litoralis HA

【技术实现步骤摘要】
一株腐植酸降解细菌及其应用


[0001]本专利技术涉及一株腐植酸降解细菌及其应用。

技术介绍

[0002]腐植酸是一类广泛存在于土壤、江河、湖泊、沼泽和森林等自然环境中的高分子天然有机物，主要通过动植物残骸、淤泥以及微生物群经过一系列复杂的腐殖化反应而产生，可以占到天然水体中天然有机物总量的50％以上。腐植酸在水体中呈现出深褐色，影响水体的感官性能，其化合物的结构中含有大量的醌基、羰基、氨基、羧基和甲氧基等基团，这些基团中含有大量可被氧化剂攻击的位点，在加氯消毒过程中，容易被氯攻击而产生消毒副产物，这些消毒副产物通常具有致癌、致突变等作用，且由于这些活性基团的存在，提高了腐植酸亲水性以及吸附性能，是其与金属离子及其他有机物发生反应的基础，并生成毒性更大的污染物，从而对生态环境和人类的健康形成巨大的威胁。腐植酸类长链有机生色团复合物形成，常呈现为黑色、灰棕色或者棕黄色等。这些有色废水的排放不仅会造成人们视觉上的不适感，一旦进入天然水体或农田甚至会导致严重的污染，使水体的自净功能下降，对生态环境造成破坏。
[0003]目前处理腐植酸的方法有物理法，化学法和生物法，而微生物降解具有成本低、效率高、无二次污染等独特的优越性，同时微生物降解有机物还具有来源广泛、选用便利、操作简单等优点。因此在自然界中分离筛选出腐植酸高效降解菌，并对影响高效腐植酸降解菌降解性能的腐植酸初始浓度、pH、接菌量、等因素进行探讨有重要的现实意义，为后续处理提供了基础。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一株腐殖酸降解细菌及其应用。
[0005]本专利技术提供一株腐殖酸降解细菌，所述腐殖酸降解细菌为海滨芽孢杆菌Bacillus litoralisHA
‑
X1菌株，于2022年1月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC24268。
[0006]本专利技术还提供腐殖酸降解细菌菌液，是将海滨芽孢杆菌HA
‑
X1菌株扩大培养得到的。
[0007]作为优选，所述扩大培养具体为：将海滨芽孢杆菌HA
‑
X1菌株接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中30℃摇床培养18
‑
30h。
[0008]本专利技术还提供上述的腐殖酸降解细菌或腐殖酸降解细菌菌液在制备降解腐殖酸的产品中的应用。
[0009]作为优选，降解腐殖酸时，将所述腐殖酸降解细菌菌液加入到含腐殖酸物料中进行降解。
[0010]作为优选，所述降解温度为30℃。
[0011]作为优选，在降解腐殖酸时，所述腐殖酸降解细菌菌液的加入量为体积百分比3
‑
5％。
[0012]作为优选，在降解腐殖酸时，所述腐殖酸降解细菌菌液的加入量为体积百分比4％。
[0013]作为优选，在降解腐殖酸时，初始pH为7
‑
8。
[0014]本专利技术的海滨芽孢杆菌HA
‑
X1CGMCC24268菌株能够有效降解废水中的腐殖酸。当腐殖酸降解细菌菌液的加入量为体积百分比4％，pH为8时，降解腐殖酸的效果最佳。
附图说明
[0015]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：
[0016]图1为菌株HA
‑
X1在牛肉膏蛋白胨固体培养基上的菌落形态。
[0017]图2为菌株HA
‑
X1的扫描电镜图。
[0018]图3为菌株HA
‑
X1的系统发育进化树。
[0019]图4为菌株HA
‑
X1的生长及降解曲线。
[0020]图5为腐植酸初始浓度对腐植酸降解性能的影响。
[0021]图6为初始pH对腐植酸降解性能的影响。
[0022]图7为菌液投加量对腐植酸降解性能的影响。
具体实施方式
[0023]以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。
[0024]实施例1
[0025]1材料与方法
[0026]1.1取样
[0027]土样采自兰州理工大学彭家坪校区腐木下方5cm处土壤与人工湖底泥中。
[0028]1.2培养基
[0029](1)富集培养基：牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1L，琼脂20g，pH＝7.0
‑
7.2。
[0030](2)驯化培养基：
[0031]驯化培养基
①
：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，腐植酸0.005g，蒸馏水1L，琼脂20g，pH＝7.0
‑
7.2；
[0032]驯化培养基
②
：牛肉膏0.1g，蛋白胨0.1g，NaCl0.05g，腐植酸0.015g，蒸馏水1L，琼脂20g，pH＝7.0
‑
7.2。
[0033](3)初筛培养基：腐植酸0.03g，蒸馏水1L，琼脂20g，pH＝7.0
‑
7.2。
[0034]1.3腐植酸溶液的配制
[0035]称取1g腐植酸，加入到900mL去离子水中，充分搅拌使其完全溶解，然后加入去离子水稀释至1L，调节pH为7，储存在棕色瓶中备用。
[0036]1.4实验仪器及设备
[0037]电子天平；恒温气浴振荡器；高压蒸汽灭菌锅；电热恒温培养箱；紫外可见分光光度计；光学显微镜；冰箱；pH计；扫描电子显微镜；可调试电热板；无菌操作台；便携式色度测定仪。
[0038]1.5土壤稀释度的选择
[0039]取10g采集的土样，放入装有90mL水的锥形瓶中，然后加入2
‑
3颗玻璃珠，30℃、150r/min摇床振荡1小时，静置20min后取上清液，即10
‑1稀释度的土壤悬液，然后依次将其稀释为10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5，再将各稀释度的菌液吸取100μL，分别涂布于富集培养基平板上，每个稀释度设置3个平行样，30℃培养24h，实验发现10
‑3稀释度下培养基中各菌落分布较为均匀，容易挑出单菌落，因此选10
‑3稀释度的土壤悬液做后续细菌筛选实验。
[0040]1.6腐植酸降解细菌的初筛
[0041]将10
‑3稀释度的富集培养基上的细菌分离纯化，得到20株细菌，将分离纯化出的菌株接种在驯化培养基
①
中，30℃培养一定时间，将长出的菌落转接至驯化培养基
②
，进行梯度驯化。待驯化培养基
②
中的菌落长出，再转接至初筛培养基中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株腐殖酸降解细菌，其特征在于：所述腐殖酸降解细菌为海滨芽孢杆菌Bacillus litoralis HA
‑
X1菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC 24268。2.腐殖酸降解细菌菌液，其特征在于：是将海滨芽孢杆菌HA
‑
X1菌株扩大培养得到的。3.根据权利要求2所述的腐殖酸降解细菌菌液，其特征在于：所述扩大培养具体为：将海滨芽孢杆菌HA
‑
X1菌株接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中30℃摇床培养18
‑
30h。4.权利要求1所述的腐殖酸降解细菌或权利要求2所述的腐殖酸降解细菌菌液在制备降...

【专利技术属性】
技术研发人员：张庆芳，曹玉洁，王天烽，白承祥，赵敏敏，吴若愚，彭程，史海龙，
申请(专利权)人：兰州理工大学，
类型：发明
国别省市：