【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】平行核酸分析方法
[0001]本专利技术涉及平行核酸分析领域。
技术介绍
[0002]在短短几个月内，新出现的冠状病毒Sars
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CoV2导致了Covid
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19全球大流行病。世界在等待有效且可规模化的疫苗接种和抗病毒疗法，同时，必须尽可能好地控制Covid
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19。为此，有两种措施可用，即保持社交距离(例如通过封锁措施)和用于接触者追踪和随机监视的分子测试。然而，检测活动性疾病(即从拭子、漱口液、痰液或唾液中检测病毒RNA的存在)的分子方法目前成本高昂，并且受到设备和试剂供应短缺的阻碍。可以通过在混并的(pooled)RNA提取物中进行PCR检测来实施大规模测试(Ben
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Ami et al.,Clinical Microbiology and Infection 2020,26:1248
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1253)。但是，这种混并方法可能需要重新测试以识别阳性测试池中的单个阳性样本。为了在多重(multiplex)方法中识别单个样本，将样本来源的DNA通过特定的核...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种检测多个样本中目标核酸的方法，包括以下步骤：a)在用于每个样本的单独容器中提供来自多个样本的分析物核酸，其中所述容器布置成子集阵列，其中所述阵列包括两个或更多个子集；b)使用与所述分析物核酸杂交的至少一对引物对通过引物延伸反应扩增核酸，其中引物对包含正向引物和反向引物，其中所述正向引物和反向引物均分别包含接头序列、样本标识符序列和用于与所述分析物核酸杂交的结合序列；c)将两个或更多个子集的容器的步骤b)的扩增的核酸组合成组合容器的阵列，其中一个子集而非另一子集的容器组合成组合容器；d)使用与步骤c)的组合容器的所述扩增的核酸杂交的至少一对另外的引物对通过引物延伸反应扩增核酸，其中另外的引物对包含另外的正向引物和另外的反向引物，其中所述另外的正向引物和另外的反向引物均包含子集标识符序列和用于与所述接头序列杂交的序列；e)确定步骤d)扩增的核酸的序列；f)通过与具有所述子集标识符序列和所述样本标识符序列的子集和容器相关联，将步骤e)的确定的目标核酸序列分配给样本。2.根据权利要求1所述的方法，其中，i)在步骤b)中，对于给定的用于与所述分析物核酸杂交的结合序列，所述正向引物的每个样本标识符序列与其他正向引物的样本标识符序列不同；和/或ii)在步骤b)中，对于给定的用于与所述分析物核酸杂交的结合序列，所述反向引物的每个样本标识符序列与其他反向引物的样本标识符序列不同；和/或iii)在步骤d)中，所述另外的正向引物的每个子集标识符序列与其他另外的正向引物的子集标识符序列不同；和/或iv)在步骤d)中，所述另外的反向引物的每个子集标识符序列与其他另外的反向引物的子集标识符序列；优选i)、ii)、iii)和iv)的组合。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤d)的所述另外的引物包含测序接头序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，步骤a)包括提供来自样本的RNA并通过逆转录产生所述RNA的cDNA，其中在步骤b)中扩增的核酸包含所述cDNA。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，步骤b)的所述正向引物和反向引物中的至少一个在步骤b)期间和/或之后但在步骤c)之前被耗尽；优选其中所述耗尽在步骤b)期间并且包括用所述正向引物和/或反向引物扩增加标核酸；和/或优选其中所述正向引物和反向引物的所述耗尽包括用单链特异性核酸酶处理。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，步骤d)中的扩增核酸限于最多35个扩增循环，优选最多20个扩增循环。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述多个样本包括4000个或更多个样本和/或所述两个或更多个子集是40个或更多个子集和/或其中子集包括40个或更多个
容器。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，所述目标核酸是病原体核酸，优选病毒核酸。9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述目标核酸选自冠状病毒核酸，优选SARS
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CoV
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2核酸、流感病毒核酸、副流感病毒核酸、鼻病毒核酸或其组合。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，选择两种或更多种目标核酸，优选其中所述两种或更多种目标核酸来自病毒，所述病毒对于两种或更多种目标核酸是相同的...
【专利技术属性】
技术研发人员：U，
申请(专利权)人：IMBA莫利库尔生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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