从抗-LAG3抗体生产中分离宿主细胞脂肪酶的方法技术

本文提供在色谱方法中从抗

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】从抗
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LAG3抗体生产中分离宿主细胞脂肪酶的方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年1月29日提交的的美国临时专利申请号62/967,347的权益，将其整体引入本文作为参考。
[0003]电子提交的序列表的引用
[0004]本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且通过引用整体并入本文。所述ASCII拷贝创建于2021年1月19日，命名为24955WOPCT
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SEQTXT
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19JAN2021.txt，大小为14.2千字节。专利

[0005]本文提供在色谱方法中从抗
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LAG3抗体分离宿主细胞蛋白(HCP)(例如，脂肪酶)的方法。本文还提供通过使用色谱方法从抗
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LAG3抗体(例如，单克隆抗体)分离HCP(例如，脂肪酶)来改善抗LAG3抗体制剂(例如，药物物质制剂或药物产品制剂)中的聚山梨醇酯
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80(PS
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80)稳定性的方法。
[0006]专利技术背景
[0007]LAG
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3(淋巴细胞活化基因
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3)是一种在活化的T细胞、B细胞、NK细胞和浆细胞样树突细胞上表达的细胞表面分子。LAG
‑
3在结构上与CD4类似，并且作为抑制受体与MHC II类分子结合。LAG
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3显示负调节T细胞活化和增殖，以及在肿瘤浸润淋巴细胞上与其他抑制受体共表达。LAG3的表达指示高度耗竭的T细胞表型。参见Goldberg MV1,Drake CG.Curr.Top.Microbiol.Immunol.2011；344:269
‑
78。
[0008]在抗体(例如单克隆抗体)的生物加工和制备中，宿主细胞蛋白(HCP)(例如脂肪酶)构成通常难以从抗体中除去的杂质的一部分。这样的杂质可以在生物药物的安全性和功效方面引起各种问题。全世界的监管机构要求生物制药产品满足某些验收标准，包括杂质水平和用于检测和定量杂质的测试。几种抗
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LAG3抗体处于临床开发中，并且期望开发从这些抗体中去除HCP(例如，脂肪酶)的有效且高效的方法。
[0009]专利技术简述
[0010]本公开内容提供通过色谱方法从抗
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LAG3抗体或抗原结合片段分离HCP(例如，脂肪酶)的方法，以及通过使用疏水相互作用(HIC)或阳离子交换(CEX)色谱方法从抗
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LAG3抗体或抗原结合片段分离HCP(例如，脂肪酶)来改善抗
‑
LAG3抗体制剂(例如，药物物质制剂或药物产品制剂)中PS
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80稳定性的方法。本公开内容至少部分地基于以下发现：在两种蛋白质之间的分离因子(α)和/或HCP(例如，脂肪酶)的分配系数(K
p
)达到某些数值范围的操作条件下，HCP(例如，脂肪酶)和抗
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LAG3抗体或抗原结合片段可以充分分离。
[0011]在一个实施方案中，脂肪酶是PLBL2。在又另一个实施方案中，脂肪酶是LPLA2。在一个实施方案中，脂肪酶是LP
‑
PLA2。在一个实施方案中，HCP是簇蛋白。
[0012]在另一个方面，本文提供药物组合物，其包含抗LAG3抗体或抗原结合片段和小于2ppm的宿主细胞脂肪酶。本公开内容还提供一种药物组合物，其在配制时包含抗LAG3抗体或抗原结合片段和聚山梨酯80(PS80)或聚山梨酯20(PS20)，其中在2
‑
8℃下3个月时，PS80或PS20的浓度维持在配制时浓度的≥90％。
[0013]附图简述
[0014]图1显示对于通过盐浓度调节结合而言典型的一系列HIC条件，PLBL2或LPLA2 log K
p
值。
[0015]图2显示PLBL2、LPLA2和两种不同mAb mAb2(Ab6)和mAb3在HIC树脂上的log K
p
值的比较。当与PLBL2和LPLA2比较时，mAb3具有非常类似的与HIC结合，但mAb2的结合比mAb3、PLBL2和LPLA2更弱，提供了PLBL2和LPLA2与mAb2的分离潜力比与mAb3的分离潜力更大。
[0016]图3显示在5
±
3℃下，在2、4、6和14周间隔下，Ab6 AEX池药物物质(AEX DS)和Ab6 HIC结合和洗脱池药物物质(HIC B&E DS)或Ab6 HIC流过物药物物质(HIC FT DS)的PS
‑
80浓度。
[0017]图4显示在5℃
±
3℃(倒置)、25℃的加速条件(25℃
±
2℃，60％相对湿度，倒置)和40℃的应激条件(40℃
±
2℃，75％相对湿度，倒置)下3个月，实施例6的Ab6a药物产品的PS
‑
80浓度。
[0018]专利技术详述
[0019]定义
[0020]下面具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文件中其他地方特别地定义，否则本文使用的所有其他技术和科学术语具有本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的含义。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。
[0021]如本文中可互换地使用的术语“操作条件”、“运行条件”、“加工条件”或“工艺条件”指用于操作色谱方法的条件。操作条件可以是平衡条件、加载条件、洗涤条件和/或洗脱条件等。操作条件包括但不限于色谱树脂的类型、树脂骨架、树脂配体、操作溶液的pH、操作溶液的组成、操作溶液的每种成分的浓度、操作溶液的电导率、操作溶液的离子强度、操作溶液的阳离子强度、操作溶液的阴离子强度或两种或多种上述因素的组合。
[0022]术语“操作溶液”指用于操作色谱方法的溶液。操作溶液可以是平衡溶液、加载或进料溶液、洗涤溶液和/或洗脱溶液等。
[0023]如本文使用的术语“分配系数”或“K
p”指在特定操作条件下平衡时与色谱树脂结合的蛋白质的浓度(Q)与保留在溶液(C)中的蛋白质的浓度的比率。特定蛋白质的分配系数可以如下计算：K
p
＝Q/C。
[0024]如本文使用的术语“分离因子”或“α”指第一蛋白质的分配系数(K
p
，
蛋白质1
)和第二蛋白质的分配系数(K
p，蛋白质2
)之比。分离因子量化了在特定操作条件下色谱树脂在两种蛋白质之间的选择性。其可以用于预测在操作条件下，两种蛋白质通过色谱树脂的分离程度。两种蛋白质之间的分离因子可以如下计算：α＝K
p,蛋白质1
/K
p,蛋白质2
；或logα＝log K
p,蛋白质1
–
log K
p,蛋白质2
。
[0025]如本文使用的“洗脱液”指通过色谱的液体。在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种通过疏水相互作用色谱(HIC)方法从包含抗
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LAG3抗体或抗原结合片段和宿主细胞脂肪酶的组合物中分离宿主细胞脂肪酶的方法，其包括：(a)在加载操作条件下，使包含所述组合物的加载流体通过HIC树脂；和(b)收集流过物中的所述抗
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LAG3抗体或抗原结合片段；其中分离因子(α)是所述脂肪酶的分配系数(K
p
)与所述抗
‑
LAG3抗体或抗原结合片段的K
p
的比率，并且其中在所述加载操作条件下，logα大于0.5；其中所述抗
‑
LAG3抗体或抗原结合片段包含：(a)SEQ ID NO:6、7和8的轻链CDR，和(b)SEQ ID NO:9、10和11的重链CDR。2.一种通过疏水相互作用色谱(HIC)方法从包含抗
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LAG3抗体或抗原结合片段和宿主细胞脂肪酶的组合物中分离宿主细胞脂肪酶的方法，其包括：(a)在加载操作条件下，使包含所述组合物的加载流体通过HIC树脂；和(b)在洗脱操作条件下，用洗脱溶液从色谱树脂洗脱所述抗
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LAG3抗体或抗原结合片段；其中分离因子(α)是所述脂肪酶的分配系数(K
p
)与所述抗
‑
LAG3抗体或抗原结合片段的K
p
的比率，并且其中在所述洗脱操作条件下，logα大于0.5；其中所述抗
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LAG3抗体或抗原结合片段包含：(a)SEQ ID NO:6、7和8的轻链CDR，和(b)SEQ ID NO:9、10和11的重链CDR。3.一种通过阳离子交换(CEX)方法从包含抗LAG3抗体或抗原结合片段和宿主细胞脂肪酶的组合物中分离宿主细胞脂肪酶的方法，其包括：(a)在加载操作条件下，使包含所述组合物的加载流体通过CEX树脂；和(b)在洗脱操作条件下，用洗脱溶液从色谱树脂洗脱所述抗
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LAG3抗体或抗原结合片段；其中分离因子(α)是所述脂肪酶的分配系数(K
p
)与所述抗
‑
LAG3抗体或抗原结合片段的K
p
的比率，并且其中在所述洗脱操作条件下，logα大于0.5；其中所述抗
‑
LAG3抗体或抗原结合片段包含：(a)SEQ ID NO:6、7和8的轻链CDR，和(b)SEQ ID NO:9、10和11的重链CDR。4.一种改善抗
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LAG3抗体或抗原结合片段制剂中的聚山梨酯
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80(PS
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80)稳定性的方法，其包括：(a)在加载操作条件下，使包含宿主细胞脂肪酶和抗
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LAG3抗体或抗原结合片段的加载流体通过HIC色谱树脂；(b)收集流过物中的所述抗
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LAG3抗体或抗原结合片段；和(c)配制所述抗
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LAG3抗体或其抗原结合片段，使得所述抗
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LAG3抗体或其抗原结合片段制剂为含有PS
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80的溶液；其中分离因子(α)是所述脂肪酶的分配系数(K
p
)与所述抗
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LAG3抗体或抗原结合片段的K
p
的比率，并且其中在所述加载操作条件下，logα大于0.5；其中所述抗
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LAG3抗体或抗原结合片段包含：(a)SEQ ID NO:6、7和8的轻链CDR，和(b)SEQ ID NO:9、10和11的重链CDR。5.权利要求1
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4中任一项的方法，其中在洗脱操作条件下，log a大于1.0。6.权利要求1
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4中任一项的方法，其中所述脂肪酶的log K
p
大于1.0。7.权利要求1
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4中任一项的方法，其中所述脂肪酶的log K
p
大于1.5。8.权利要求1
‑
6中任一项的方法，其中所述脂肪酶是CHO细胞脂肪酶。9.权利要求1
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8中任一项的方法，其中所述脂肪酶选自磷脂酶B样2(PLBL2)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、溶酶体磷脂酶A2(LPLA2)、磷脂酶A2 VII(LP
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PLA2)和溶酶体酸性脂肪酶A
(LAL)。10.权利要求1
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8中任一项的方法，其中所述脂肪酶是PLBL2。11.权利要求1
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8中任一项的方法，其中所述脂肪酶是LPLA2。12.权利要求1
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2和4中任一项的方法，其中所述加载操作条件或洗脱溶液包含选自氯化钠、乙酸钠、磷酸钠、硫酸铵、硫酸钠和Tris
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HCl的盐，并且pH为约5
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7.5。13.权利要求12的方法，其中所述盐为氯化钾或氯化钠。14.权利要求13的方法，其中所述操作溶液中氯化钠的浓度为约100mM至约225mM，所述色谱树脂为CEX，所述操作条件的pH为约5.0至约6.0。15.权利要求13的方法，其中所述操作溶液中氯化钠的浓度为约150mM至约180mM，所述色谱树脂为CEX，所述操作条件的pH为约5.0至约6.0。16.一种通过疏水相互作用色谱方法从包含抗
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LAG3抗体或抗原结合片段和PLBL2或LPLA2的组合物中分离PLBL2或LPLA2的方法，其包括：(a)使包含所述组合物的加载流体通过疏水相互作用色谱树脂；和(b)收集流过物中的所述抗
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LAG3抗体或抗原结合片段；并且，其中所述加载流体具有约25至80mS/cm的电导率；其中所述抗
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LAG3抗体或抗原结合片段包含：(a)SEQ ID NO:6、7和8的轻链CDR，和(b)SEQ ID NO:9、10和11的重链CDR。17.一种通过疏水相互作用色谱方...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：默沙东有限公司，
类型：发明
国别省市：