一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的方法，本发明专利技术以奶牛为对象，发现并获得了影响奶牛乳糖性状相关的分子标记，即I2

【技术实现步骤摘要】
一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的方法


[0001]本专利技术涉及奶牛的分子育种
，更具体地，涉及一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的方法。

技术介绍

[0002]由单个碱基发生转换、颠换、插入或缺失而导致DNA序列多态性即单核苷酸多态性是基因多态性的主要来源。SNP属第三代多态性标记，是动物品系遗传变异的重要依据，已被广泛用于群体遗传学研究。以凝胶电泳为主的经典SNP检测方法有限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RF LP)、单链构象多态性(single strand conformation polymorphism,SSCP)、变性梯度凝胶电泳(denatured gradient gel electrophoresis，DGGE)、等位基因特异PCR(allele specific PCR，AS
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PCR)。高通量测序是近年来迅速发展起来的SNP检测法，包括DNA测序法、DNA芯片检测、基于酶切的简化基因组测序(Restriction
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site Associated DNA Sequence，RAD
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Seq)、飞行质谱仪检测法(Matrix
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Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI
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TOFMS)、变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography，DHP LC)等等。对于一般的分子实验室来说，高通量测序法由于设备昂贵、所需技术熟练而不利于在普通分子实验室广泛展开研究。传统的研究方法中，SSCP法存在假阴性结果且操作复杂、耗时冗长，并非理想SNP检测法。
[0003]奶牛生产性能测定(dairy herd improvement，DHI)通过检测每头牛的生产性能，把奶牛的数量性状科学化、数据化，群体与个体水平两者兼顾，提高牧场管理水平，提高经济效应。
[0004]DHI报告大致分为营养指标、繁殖指标、牛奶质量及奶厅管理指标三个方面。营养指标包括日产奶量、脂蛋比、持续力、高峰奶、高峰日、校正奶、305天产奶量、成年当量等。繁殖指标包括泌乳天数、产犊间隔、尿素氮等。牛奶质量及奶厅管理指标包括体细胞数、乳脂率、乳蛋白率、隐形乳房炎比例等。基础检测指标有日产奶量、乳脂率、乳蛋白率、体细胞数、乳糖率及总固体率。
[0005](1)日产奶量：泌乳奶牛测试日的总产奶量，单位为千克，反应奶牛当前实际产奶水平。
[0006](2)乳脂率：牛奶中所含脂肪百分比。
[0007](3)乳蛋白率：牛奶中所含蛋白百分比。
[0008](4)乳糖率：牛奶中所含乳糖百分比。
[0009](5)体细胞数(SCC)：每毫升牛奶中白细胞的含量，包括淋巴细胞、巨噬细胞、多形核噬中性细胞等，是奶牛乳房健康与否的重要标志。
[0010]在自然界中，乳糖仅存在于哺乳动物的乳汁中，是乳汁中三大营养物质之一，牛奶中有1/4总热量来自乳糖。正常牛奶中含有4.6％
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5.0％乳糖，其高低会影响牛乳品质，同时参与维持肠道菌群的稳定，同时也提示机体发生某些病变。比如奶牛患有结核病、乳房炎
时，牛奶中乳糖含量急剧下降。乳糖由葡萄糖和半乳糖组成，其中半乳糖通过与神经酰胺结合而影响大脑发育。乳糖通过影响进入乳腺细胞的水分而影响产奶量。对乳糖调节的研究有助于解决乳糖不耐受症，通过降低牛奶中乳糖浓度可改善患者的乳糖不适反应，相比药物介导大大降低治疗成本。
[0011]中国专利已经公开了与荷斯坦奶牛乳蛋白率及305天产奶量相关的分子标记；与荷斯坦奶牛总产奶量及高峰奶相关的分子标记；与荷斯坦奶牛乳蛋白率及体细胞数相关的分子标记。目前尚未公开与奶牛乳糖率相关的SNP标记及应用。
[0012]脂多糖结合蛋白因其与脂多糖易结合而得名，在肝脏产生，存在于血清，是一种血浆蛋白。LBP通过与LPS结合形成复合体来控制LPS反应，CD14进一步与LBP/LPS复合体结合，激活Toll样受体4(Toll
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like receptors 4，TLR4)，释放促炎因子和趋化因子，诱导炎症反应。尚未发现其与奶牛生产性能相关。

技术实现思路

[0013]本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的方法。RFLP法技术简单，可直接根据琼脂糖电泳结果判断个体基因型，固本专利技术利用DNA直接测序法和PCR
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RFLP法相结合的技术，检测LBP基因SNP位点多态性对中国荷斯坦奶牛乳糖性状的影响。
[0014]本专利技术以奶牛为实验对象，通过DNA直接测序和PCR
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RFLP方法对LBP基因进行单核苷酸多态性分析，探究LBP基因多态性与奶牛生产性状的相关关系。以待测奶牛全基因组DNA为模板，以引物I2为引物，PCR扩增LBP基因第二内含子区的部分序列，把限制性内切酶Afl II作用于PCR产物，用琼脂糖电泳检测酶切产物，根据条带长度鉴定奶牛LBP基因上SNP位点的基因型。结果表明从该群体中，发现一个SNP位点，位于LBP基因第二内含子区第1095位碱基，即I2
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1095 G>A。相关性分析发现该SNP位点不同基因型与乳糖性状呈极显著关系，当个体基因型为GA，其乳糖性状极显著高于GG基因型个体。该位点可作为奶牛选种选育的分子标记。
[0015]本专利技术的第一个目的是提供一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的试剂。
[0016]本专利技术的第二个目的是提供所述的试剂在评估奶牛乳汁中乳糖含量或制备评估奶牛乳汁中乳糖含量的试剂盒中的应用。
[0017]本专利技术的第三个目的是提供一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的方法。
[0018]本专利技术的第四个目的是提供一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的试剂盒。
[0019]本专利技术的第五个目的是提供所述试剂、所述方法、或权利要求6所述试剂盒中的一种或几种在奶牛乳汁中乳糖含量的分子育种中的应用。
[0020]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：
[0021]本专利技术按要求保护一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的试剂，所述试剂用于检测ARS
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UCD1.2版本NC_037340.1：67219155的基因型，其基因型为GA的奶牛个体乳汁中乳糖含量高于基因型为GG的奶牛个体乳汁中乳糖含量。
[0022]还要求保护所述的试剂在评估奶牛乳汁中乳糖含量或制备评估奶牛乳汁中乳糖含量的试剂盒中的应用。
[0023]以及一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的方法，检测ARS
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UCD1.2版本NC_037340.1：
67219155的基因型，其基因型为GA的奶牛个体乳汁中乳糖含量高于基因型为GG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的试剂，其特征在于，所述试剂用于检测ARS
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UCD1.2版本NC_037340.1：67219155的基因型，其基因型为GA的奶牛个体乳汁中乳糖含量高于基因型为GG的奶牛个体乳汁中乳糖含量。2.权利要求1所述的试剂在评估奶牛乳汁中乳糖含量或制备评估奶牛乳汁中乳糖含量的试剂盒中的应用。3.一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的方法，其特征在于，检测ARS
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UCD1.2版本NC_037340.1：67219155的基因型，其基因型为GA的奶牛个体乳汁中乳糖含量高于基因型为GG的奶牛个体乳汁中乳糖含量。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，使用核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示的引物检测ARS
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UCD1.2版本NC_037340.1：67219155的基因型，其基因型为GA的奶牛个体乳汁中乳糖含量高于...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵志辉，李嘉灵，姜平，于海滨，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：