用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用，通过选用新疆驴NUMB基因特定SNP位点作为分子标记物，匹配特异性引物及相适应的扩增体系，制备获得用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，通过检测能够准确筛选获得产奶量、以及驴乳中乳脂率、总固体含量和尿素氮相对较高的个体，根据相对应的基因型进行新疆驴优良产奶形状个体的选育，从而加快其育种进程，促进驴产业的进一步发展。促进驴产业的进一步发展。

【技术实现步骤摘要】
用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用


[0001]专利技术涉及动物遗传选育的鉴定方法，具体的，本专利技术涉及用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用的


技术介绍

[0002]驴奶是一种低脂肪、低胆固醇、高钙、富硒、美容、抗衰老的天然乳品，驴奶中各营养成分的比例最为接近人乳，被称为最接近母乳的乳中珍品，其脂肪含量比牛奶略低，胆固醇的含量仅为牛奶的15％，维生素C的含量高，为牛奶的4.75倍，驴奶中含氨基酸齐全，其中必须氨基酸含量高，占蛋白质总量的46.7％，远高于牛奶42.2％和人乳38.1％的含量，此外，驴奶中微量元素含量充足，钙含量丰富，尤其是硒的含量较高，为牛奶的5.2倍，与我国目前《富硒食品含硒量标准》相比，属于富硒食品，所以驴奶具有强身健体、延年益寿、治疗疾病等众多功效。
[0003]但是，目前未有乳用驴的专门化品种，且生产用母驴的个体乳产量较低，远低于牛奶产量，甚至低于驴奶产量，无法满足人们对驴奶的乳制品的需要。新疆驴是一种具有肉、皮、药、乳、役等多种经济用途的畜种。选育具有高产奶性能的乳用驴既可弥补驴奶的市场空缺，又可显著提升新疆驴的饲用价值及经济价值，是促进驴产业发展的重要工作。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中未见报道关于新疆驴泌乳性能筛选准确有效的分子标记以及未见专门针对NUMB基因在新疆驴泌乳性状筛选中的SNP标记研究的技术现状，本专利技术旨在提供了含NUMB基因用于提高新疆驴泌乳性状的检测试剂盒，利用新疆驴血液样本作为测试材料，利用本专利技术检测试剂盒通过检测，用于选育提高新疆驴泌乳性状为提高驴产奶量的选育中，期望选择与产奶性状密切相关的DNA标记，从而加快育种进程。
[0005]本专利技术提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，所述试剂盒中含有用于检测NUMB基因的SNP位点为g.46709914。
[0006]本专利技术提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，所述试剂盒中NUMB基因的SNP位点g.46709914等位基型因包括GG、GT和TT。
[0007]本专利技术提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，所述的试剂盒通过以下共建体系建成获得：
[0008](1)根据新疆驴NUMB基因的SNP位点g.46709914，自行人工设计特异性引物；
[0009](2)PCR反应试剂：2
×
KASP Mix、上下游引物、DNA模板和水。
[0010]所述的特异性引物序列如下所示：
[0011]上游引物1：5'
‑
GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCACCTCAAGGTGTCTAATCCATAG
‑
3'；
[0012]上游引物2：5'
‑
GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCACCTCAAGGTGTCTAATCCATAT
‑
3'；
[0013]下游引物1：5'
‑
TGAGGAAGTGATATTTGAGTAGAGC
‑
3'。
[0014]本专利技术还提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒的应用，所述试剂盒的应用中，
通过检测方法体现，具体包括如下步骤：
[0015](1)利用装有枸橼酸钠抗凝剂的采血管，活体采集新疆驴颈静脉血5ml，
‑
20℃保存；提取基因组DNA，
‑
20℃保存待用；
[0016](2)采用步骤(1)总共提取获得的新疆驴基因组DNA进行，NUMB基因PCR扩增，根据设计的引物，利用权利要求1或2任意一项提供的试剂盒特异性扩增NUMB基因；PCR反应体系为，2
×
KASP Mix 5μL，100μM上游引物10.015μL，100μM上游引物20.015μL，100μM下游引物0.04μL上下游引物各0.07μL，基因组DNA2μL，ddH2O补充至10μL；反应条件为，94℃起始步骤，1个循环10min；94℃10个循环20s；61℃45s；94℃35个循环20s；55℃20s；
[0017](3)基于步骤(2)中扩增获得的产物进行KASP分型：基于引物末端碱基的特异匹配来对SNP分型，利用Douglas平台，对SNP进行双等位基因判断，从而进行基因分型。
[0018]进一步的，本申请还提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒在产奶量高的新疆驴的选育中的应用。
[0019]更进一步的，本申请还提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒在乳脂率、总固体含量和尿素氮相对较高的新疆驴的选育中的应用。
[0020]本专利技术中，新疆驴的NUMB基因特异性引物设计中，通过国际分子生物信息网站NCBI(National Center for Biotechnology)，检索得到驴的NUMB基因的DNA序列(GenBank ID:106827673)，自行人工设计特异性引物。
[0021]通过采用上述提供的技术方案，本专利技术获得以下有益效果：
[0022](1)本专利技术通过提供用于选育新疆驴泌乳性状的试剂盒，利用试剂盒对新疆驴的NUMB基因的SNP位点g.46709914进行检测，得出NUMB基因的SNP位点g.46709914与新疆驴日均产奶量(kg/d)密切相关，GG型在整个泌乳期产奶量显著高于TT(P＜0.01)，在高峰和日均产奶量GG的总产奶量也远高于TT(P<0.05)。在实际生产应用中，可通过选择GG基因型和GT基因型个体，淘汰基因型为TT的个体，选育提高新疆驴的产奶量，用于专门化乳用驴品种的培育，对于保护新疆驴的优良品种资源、提高农牧民经济收入、加快乳用驴发展具有实际应用价值。
[0023](2)本专利技术中，虽然如上所述，在构建一种用于选育新疆驴泌乳性状的检测试剂盒中，在采用现有技术中NUMB基因作为影响家畜泌乳性状候选基因并构建试剂盒，在新疆驴群体中，NUMB基因SNP位点与新疆驴的产奶量相关，存在3种基因型：GG、GT、TT，G为优势等位基因，此位点突变使新疆驴产奶量上升，为选育泌乳性状优良的新疆驴品种，提供分子辅助育种的理论基础和技术支持。
[0024](3)本专利技术通过提供用于选育新疆驴泌乳性状的试剂盒，利用试剂盒对新疆驴的NUMB基因的SNP位点g.46709914进行检测，得出NUMB基因的SNP位点g.46709914与新疆驴乳品质密切相关，TT型显著提高了乳脂率、总固体含量和尿素氮。在实际生产应用中，可通过选择TT基因型个体，选育提高新疆驴的乳品质，用于专门化乳用驴品种的培育，对于保护新疆驴的优良品种资源、提高农牧民经济收入、加快乳用驴发展具有实际应用价值。
附图说明
[0025]图1所示为检测NUMB基因的SNP位点分型结果图。
具体实施方式
[0026]下面结合具体实施例详细说明本专利技术，但本专利技术并不限于下述的实施例。
[0027]下列实施案列中若无特殊说明，所用技术手段为本领域技术人员熟知的常规手段。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，其特征在于，所述用于检测NUMB基因的SNP位点为g.46709914。2.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，其特征在于，NUMB基因的SNP位点g.46709914等位基型因包括GG、GT和TT。3.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒通过以下共建体系建成获得：(1)根据新疆驴NUMB基因的SNP位点g.46709914，自行人工设计特异性引物；(2)PCR反应试剂：2
×
KASP Mix、上下游引物、DNA模板和水。4.如权利要求2所述用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒，其特征在于，所述的特异性引物序列如下所示：上游引物1：5'
‑
GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCACCTCAAGGTGTCTAATCCATAG
‑
3'；上游引物2：5'
‑
GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCACCTCAAGGTGTCTAATCCATAT
‑
3'；下游引物1：5'
‑
TGAGGAAGTGATATTTGAGTAGAGC
‑
3'。5.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘玲玲，刘武军，方超，曹行，马海玉，陈斌，何海迎，
申请(专利权)人：新疆农业大学，
类型：发明
国别省市：