基于微流控芯片测定2型糖尿病状态红细胞黏附力的方法技术

本发明专利技术公开了基于微流控芯片测定2型糖尿病状态红细胞黏附力的方法，包括以下步骤：步骤1：血样采集；步骤2：待测红细胞悬液制备，将采集到的静脉血样置于离心机中，获得压积红细胞；步骤3：微流控芯片制备；步骤4：微流控芯片通道表面修饰；步骤5：可视化的红细胞剪切流动实验系统搭建；步骤6：最后进行红细胞黏附实验。本发明专利技术通过结合微流控芯片技术实现病理状态下红细胞黏附力的测定，通过对黏附在通道壁面的红细胞施加流体剪切力，并不断调整流体剪切力强度使其脱黏，能够有效、无损、快速的测量病理状态下红细胞黏附力，是一种高通量非接触式的单细胞粘附性能检测技术。同时，该技术对操作者的经验要求不高，实验稳定性高，重复性好。好。好。

【技术实现步骤摘要】
基于微流控芯片测定2型糖尿病状态红细胞黏附力的方法


[0001]本专利技术涉及疾病检测
，尤其涉及基于微流控芯片测定2型糖尿病状态红细胞黏附力的方法。

技术介绍

[0002]糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病，也是心血管疾病发展的主要危险因素。2型糖尿病占糖尿病患者的90％以上，其患病率呈现逐年增长、患病年龄越趋年轻化的趋势。对2型糖尿病而言，持续的高糖化血红蛋白水平会导致红细胞变形性能下降和红细胞黏附性能增强，从而增加血液的外周阻力，影响到血液循环以及组织和器官的血液供应。病理状态下测定红细胞与血管内皮细胞的黏附力有助于分析红细胞异常黏附性能对血液循环的影响；同时，通过适当手段调节红细胞黏附力的大小，有可能成为干预疾病发生、发展的新策略，具有重要的临床意义。基于此，我们将借助微流控芯片技术在单细胞层面测定2型糖尿病病理状态下红细胞的黏附性能。
[0003]目前，用于定量检测病理状态下红细胞粘附力的主要方法包括基于力谱技术的原子力显微镜法和基于微吸管吸吮技术的微吸管法。原子力显微镜是测量细胞间作用力的常用设备，主要依赖于检测“本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于微流控芯片测定2型糖尿病状态红细胞黏附力的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：血样采集，使用K2
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EDTA血液标本真空采血管(紫色)采集2型糖尿病患者静脉血液；步骤2：待测红细胞悬液制备，将采集到的静脉血样置于离心机中，获得压积红细胞，弃置上清液；然后采用0.01M的磷酸盐(PBS)缓冲液清洗红细胞，并再次使用离心820
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g离心5分钟，清洗后吸去血浆及上清液；用等渗的牛血清白蛋白
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磷酸盐缓冲液稀释配置1％浓度的红细胞悬液备用；步骤3：微流控芯片制备，以聚二甲基硅氧烷(PDMS)为材质，采用感光干膜软光刻法加工制备PDMS微流控芯片；步骤4：微流控芯片通道表面修饰，使用无菌水冲洗微流控通道；配置10μg/ml的纤连蛋白(fibronectin)包被液；取1ml包被液，用注射器从通道一端缓慢连续注入微通道内对通道底部的玻璃表面进行修饰；将含有包被液的芯片孵育1小时并吸出剩余包被液，自然干燥1小时备用；步骤5：可视化的红细胞剪切流动实验系统搭建，采用倒置显微镜显微成像技术和sCMOS相机高速、高分辨率成像技术，搭建可实时观测红细胞在微流控通道内剪切变形特征的微流控可视化检测系统；步骤6：最后进行红细胞黏附实验。2.根据权利要求1所述的基于微流控芯片测定2型糖尿病状态红细胞黏附力的方法，其特征在于，所述步骤1中，每支采血管采集2ml；按照血液样本存储操作规范存储。3.根据权利要求1所述的基于微流控芯片测定2型糖尿病状态红细胞黏附力的方法，其特征在于，所述步骤2中使用密度梯度离心法，在820
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g相对离心力下离心5分钟获得压积红细胞。4.根据权利要求1所述的基于微流控芯片测定2型糖尿病状态红细胞黏附力的方法，其特征在于，所述步骤2中将牛血清白蛋白(BSA)添加到磷酸盐缓冲液中配置高粘度、等渗的牛血清白蛋白
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磷酸盐缓冲液。5.根据权利要求1所述的基于微流控芯片测定2型糖尿病状态红细胞黏附力的方法，其特征在于，所述步骤3中微流控芯片制备主要包括以下步骤:S3.1：首先在基板上层压100μm厚的感光干膜层，并通过打印机将图案在透明胶片上制成光掩膜；S3.2：紫外线透过光掩模对感光干膜照射70秒，之后用1％碳酸钠显影制成微通道阳...

【专利技术属性】
技术研发人员：励丽，李学进，钱劲，韩柯沁，马淑浩，孙杰辉，徐淼，李璐娟，戚晓菁，王烁，
申请(专利权)人：宁波市第一医院，
类型：发明
国别省市：