一种小鼠造影剂肾病模型及其构建方法技术

本发明专利技术涉及一种小鼠造影剂肾病模型及其构建方法。本发明专利技术采用肾血管收缩药物预处理以构建造影剂肾病模型，具有操作简便、动物损伤小、可重复性高等优点。通过观察各实验组肾小管损伤程度，进行量化评分，同时对比各实验组小鼠肾小管细胞凋亡比例及ROS水平，发现前列腺素抑制剂联合一氧化氮合成酶抑制剂干预后再予以碘克沙醇尾静脉注射，小鼠的肌酐和尿素氮明显升高水平达到了造影剂肾病的诊断标准，同时肾小管损伤程度、凋亡率和氧化应激水平均高于对照组，成功建立造影剂肾病小鼠模型。成功建立造影剂肾病小鼠模型。成功建立造影剂肾病小鼠模型。

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠造影剂肾病模型及其构建方法


[0001]本专利技术涉及造影剂肾病动物模型构建
，尤其涉及一种小鼠造影剂肾病模型及其构建方法。

技术介绍

[0002]造影剂肾病（contrast
‑
induced nephropathy，CIN）是指排除其他疾病影响的前提下，在造影剂注射后短时间内出现的急性肾功能不全。冠脉介入手术的不断进步和影像学硬件设施的快速升级，为心脑血管系统疾病的诊治提供了强有力的支撑，同时造影剂的大量使用及合并的基础疾病增多使得CIN成为了心导管术及冠脉介入治疗术后的常见并发症，CIN目前已成为医院获得性肾功能受损的主要原因之一。
[0003]CIN的诊断标准尚不完全统一，根据KDIGO的最新推荐，CIN的定义为：造影剂使用后48h内肌酐水平较基线水平上升≥0.3 mg/dL（26.5
ꢀµ
mol/L），或在7天内升高超过1.5倍基线值。
[0004]目前普遍认为，造影剂肾病的发病机制与其直接毒性作用、肾脏血流灌注改变、氧化应激、炎症反应、细胞凋亡等关系密切。其中氧化应激被较多关注。造影剂由于自身独特的高粘滞性、高渗透性，相对于其他药物而言可延长其在肾脏的滞留时间，对细胞造成毒性作用，导致肾小管上皮细胞大量坏死，肾小球滤过率下降。同时可影响血管内皮细胞的正常生理功能，使具有扩张血管效应的物质生成减少，导致肾血管持续收缩，加重肾脏组织缺血、缺氧。上述每个阶段均可以产生过量的活性氧物质（reactive oxygen species，ROS），ROS可抑制一氧化氮合酶（nitric oxide synthetase，NOS）和前列环素合酶的功能，导致一氧化氮（nitric oxide，NO）和前列腺素（prostaglandin，PG）生成减少，进一步加重肾脏损伤。有研究发现，降低肾脏ROS水平可减轻CIN的损伤。还有研究表明，高血压、冠心病、糖尿病、心力衰竭等疾病常伴有内皮源性血管舒张功能障碍，肾脏组织中的PGs和NO对局部血管舒缩调节具有重要作用。
[0005]CIN的发病率因合并有慢性肾脏病（CKD）、糖尿病、高血压等的心血管患者人群数量增多而显著上升。对健康人群而言，由于肾脏的贮备能力和机体的代偿功能，使用造影剂后不容易对肾脏造成损害。
[0006]因此，既往关于造影剂肾病动物模型构建的实验中，大多采取各种措施预先对肾脏造成一定的损伤，以增加肾脏对造影剂损伤的易感性，也能更好的模拟临床实际。
[0007]目前关于构建实验用造影剂肾病动物模型的方法众多，从实验动物、造影剂种类、造模前干预药物的选择都不尽相同。常用的实验动物有SD大鼠、C57BL/6J小鼠，少数使用家兔、狗、猪等。造影剂根据其物理性质，分为高渗离子型（泛影葡胺）、等渗非离子型（碘克沙醇）、低渗非离子型（碘海醇、碘佛醇等）三类。目前动物模型构建常选用等渗性或低渗性造影剂，高渗造影剂少有使用。临床工作中，需要行冠脉检查的患者多数合并有一定的基础病，为更好地模拟临床实际，增加动物造模成功率，多会在造影剂给药前通过药物或手术方式提前干预。
[0008]动物造模前干预可大致分为：1.肾毒性药物运用。如庆大霉素、甘油等，此类药物毒性大，最终导致的肾脏功能损伤难以区别由于造影剂所致损伤还是单纯药物导致，此方法已较少使用。
[0009]2.脱水预处理。研究证实，脱水状态是造影剂肾病的危险因素，因此常采用禁水、呋塞米利尿联合处理的方式，但是脱水可能会影响实验动物进食，导致肌酐、尿素氮水平波动。同时过量利尿可能会带来电解质代谢紊乱，从而对实验结果产生混杂因素影响。
[0010]3.手术切除部分肾脏。有部分研究采用造模前通过手术切除单侧肾脏，同时结扎对侧肾脏部分肾血管，可模拟临床慢性肾功能不全患者肾脏的高灌注、高滤过状态，增加对造影剂损伤的敏感性。但此类方法对实验动物损伤较大，手术处理要求苛刻，过程繁琐，不便于推广。
[0011]4.预先建立糖尿病模型。通常采用高脂饮食饲养后，予以链脲佐菌素处理选择性破坏胰岛细胞，使得实验动物血糖长期处于较高水平，较好模拟了临床上合并后糖尿病病史的患者。但由于糖尿病模型构建的实验周期较长，单纯为构建造影剂肾病模型而采用此类方法预处理的并不多。

技术实现思路

[0012]本申请为了解决上述技术问题提供一种小鼠造影剂肾病模型及其构建方法，运用前列腺素抑制剂吲哚美辛（Indomethacin，以下简称Indo）和一氧化氮合成酶抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯（L
‑
NAME）干预，使小鼠肾脏皮质血管收缩，增加肾脏对造影剂损伤的易感性，可较好的模拟临床上合并有基础疾病的患者，且不增加混杂因素对肾功能的影响，其次，小鼠饲养周期短且便于结合基因编辑等手段。
[0013]本申请通过下述技术方案实现：一种小鼠造影剂肾病模型的构建方法，包括以下步骤：S1，对小鼠禁水；S2，给步骤S1禁水后的小鼠注射肾血管收缩药物；S3，给步骤S2预处理后的小鼠注射造影剂，得到所述造影剂肾病模型。
[0014]进一步的，所述步骤S1中，禁水时间为24h。
[0015]进一步的，所述步骤S2中采用腹腔注射；所述步骤S2与步骤S3之间的间隔时间为15min。现有肾血管收缩药物的注射一般采用尾静脉注射，但由于小鼠的尾部一般较细小，因此采用尾静脉注射时往往要求操作者具有较高的专业基础。相对来说，腹腔注射比尾静脉注射的难度低很多，对操作者的要求也低很多。
[0016]优选地，所述肾血管收缩药物包括前列腺素抑制剂和一氧化氮合成酶抑制剂。
[0017]进一步的，所述前列腺素抑制剂包括吲哚美辛，所述一氧化氮合成酶抑制剂包括亚硝基左旋精氨酸甲酯。
[0018]进一步的，所述前列腺素抑制剂还包括DMSO溶液、生理盐水，所述吲哚美辛的浓度为2.5 mg/mL；所述一氧化氮合成酶抑制剂还包括生理盐水，所述亚硝基左旋精氨酸甲酯的浓度为4 mg/mL。
[0019]进一步的，所述步骤S2中，注射前列腺素抑制剂和一氧化氮合成酶抑制剂的前后
间隔时间为15min。
[0020]优选地，所述前列腺素抑制剂的注射剂量为4 mL/Kg体重，所述一氧化氮合成酶抑制剂的注射剂量为2.5 mL/Kg体重。
[0021]进一步的，所述造影剂包括碘克沙醇；所述碘克沙醇的注射剂量为10 mL/Kg体重。
[0022]本专利技术还提供一种小鼠造影剂肾病模型，所述小鼠造影剂肾病模型根据上述小鼠造影剂肾病模型的构建方法构建得到。
[0023]与现有技术相比，本申请具有以下有益效果：本专利技术采用肾血管收缩药物预处理以构建造影剂肾病模型，具有操作简便、动物损伤小、可重复性高等优点。本申请中，在动物模型评判指标上，采用肾脏功能学联合形态学评分双重标准作为判断和评价建模成功的指标。
[0024]通过观察各实验组肾小管损伤程度，进行量化评分，同时对比各实验组小鼠肾小管细胞凋亡比例及ROS水平，发现吲哚美辛联合亚硝基左旋精氨本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小鼠造影剂肾病模型的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：S1，对小鼠禁水；S2，给步骤S1禁水后的小鼠注射肾血管收缩药物；S3，给步骤S2预处理后的小鼠注射造影剂，得到所述造影剂肾病模型。2.根据权利要求1所述的小鼠造影剂肾病模型的构建方法，其特征在于：所述步骤S1中，禁水时间为24h。3.根据权利要求1或2所述的小鼠造影剂肾病模型的构建方法，其特征在于：所述步骤S2中采用腹腔注射；所述步骤S2与步骤S3之间的间隔时间为15min。4.根据权利要求3所述的小鼠造影剂肾病模型的构建方法，其特征在于：所述肾血管收缩药物包括前列腺素抑制剂和一氧化氮合成酶抑制剂。5.根据权利要求4所述的小鼠造影剂肾病模型的构建方法，其特征在于：所述前列腺素抑制剂包括吲哚美辛，所述一氧化氮合成酶抑制剂包括亚硝基左旋精氨酸甲酯。6.根据权利要求5所述的小鼠造影剂肾病模型的构建方法，其特征在于：所述前列腺素抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：王沛坚，王新全，杨伦，侯霁芯，杨怡，刘敏，刘栖廷，何平，
申请(专利权)人：成都医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：