细胞摄取制造技术

本发明专利技术提供了一种胆汁酸或其药学上可接受的盐，所述胆汁酸或其药学上可接受的盐用于治疗人体或动物体的方法中，所述方法包括向所述人体或动物体施用治疗性化合物，其中：a.所述胆汁酸是鹅脱氧胆酸或脱氧胆酸，并且b.任选地，所述胆汁盐与EDTA联合使用，c.在所述方法中，所述胆汁酸或其盐和EDTA用于实现或增强所述治疗性化合物的细胞内摄取。述治疗性化合物的细胞内摄取。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞摄取


[0001]本专利技术涉及将材料引入生物细胞，特别是肠细胞内部的方法。所述方法适用于将包括大分子如蛋白质在内的治疗性化合物递送到细胞中，并且可用于涉及使用治疗性化合物在进入细胞内环境后发挥治疗作用的疾病治疗中。

技术介绍

[0002]以下对
技术介绍
的论述仅旨在促进对本专利技术的理解。该论述并不是认为或承认所提及的任何材料截至申请的优先权日为止是或曾经是公知常识的一部分。
[0003]由于有着显而易见的医学应用，所以促进治疗性化合物摄取到细胞中一直是重大科学兴趣的焦点。已经考虑了各种不同的方法，但所涉及的挑战意味着仍然非常需要改进的方法来实现这一目标。
[0004]因此，生物细胞具有许多特定的机制来调节材料摄取到其内部，最常见的是通过嵌入其表面膜中的结构选择性受体的作用。然而，一般地说，细胞结构被设计成将亲水分子排除在细胞内部之外，因为包裹所有哺乳动物细胞的磷脂膜本质上是可防止水溶性分子通过的疏水屏障。对于大分子尤其如此，近年来很大一部分的药物研究致力于促进大分子进入细胞。
[0005]细胞内摄取显然可用于引入在细胞内发挥有益作用的治疗性化合物，如在例如基因疗法或酶替代疗法中。基因疗法提供了通过在细胞内产生治疗性蛋白质来治疗疾病的希望。因此，对于用于基因疗法中的核酸分子，靶位点大多位于细胞内、细胞质或细胞核中，因此分子必须穿过质膜才能到达它们。然而，大多数遗传分子既大又带电，这使得它们难以自行穿过质膜，因此，需要适当的基因递送系统来实现有效的细胞摄取。合成或非病毒的基因递送系统可以规避与病毒载体相关的一些问题，如非特异性炎症和意外的免疫反应。此外，非病毒载体具有使用简单和易于大规模生产的优势。然而，相对较低的效率是非病毒载体的主要缺点，并且正在努力解决这个问题。
[0006]在迄今已开发的旨在将材料引入生物细胞内部的各种方法中，其中一种方法涉及降低治疗性化合物的极性或亲水性的目的，例如通过将它与亲脂部分复合。因此，可以通过将DNA与阳离子脂质如lipofectin静电结合来增强DNA的摄取(Felgner PL(1991)Cationic liposome
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mediated transfection with lipofectin
TM reagent.Methods Mol Biol 7:81
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9)。然而，这类方法效率低，并且在阳离子脂质的情况下，取决于细胞类型和试剂密度，会观察到高水平的细胞毒性，这使得这项技术不适合体内使用。还出现了稳定性和缺乏可重复性的问题。对于某些蛋白质分子，可以通过将蛋白质与长链烃化学缀合来实现类似的作用，不过这样的程序可能会导致相关蛋白质的免疫原性增强。
[0007]已考虑的另一种方法特别适用于当治疗性化合物是大分子时，所述方法将它包封在微粒载体如脂质体中，然后可以容易地被吞噬细胞吸收。这项技术用作治疗高雪氏病(Gaucher
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s disease)(葡萄糖脑苷脂酶的遗传缺陷)的潜在方法取得了一些成功，其中这种酶被掺入脂质体中并递送到缺乏分解葡萄糖基神经酰胺能力的细胞中(Belchetz PE,
Crawley JC,Braidman IP,Gregoriadis G(1977)Treatment of Gaucher's disease with liposome
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entrapped glucocerebroside:beta
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glucosidase.Lancet.16；2(8029):116
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7)。最近，用β
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半乳糖苷酶(Umezawa F,Eto Y,Tokoro T,Ito F,Maekawa K.Enzyme replacement with liposomes containing beta
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galactosidase from Charonia lumpas in murine globoid cell leukodystrophy(twitcher)Biochem Biophys Res Commun.1985年3月15日；127(2):663
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7)和转谷氨酰胺酶(Aufenvenne K,Fernando Larcher,Ingrid Hausser,Blanca Duarte,Vinzenz Oji,Heike Nikolenko,Marcela Del Rio,Margitta Dathe and Heiko Traupe(2013)Topical Enzyme
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Replacement Therapy Restores Transglutaminase 1Activity and Corrects Architecture of Transglutaminase
‑1‑
Deficient Skin Grafts The American Journal of Human Genetics 93,620
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630,2013年10月3日)进行了类似的工作。这种方法最适合表现出显著的吞噬活性的细胞。对于其它细胞类型，可以通过将聚乙二醇脂质和靶特异性抗体掺入外膜中来促进特异性靶向。虽然这可以确保囊泡与膜的外表面结合，但不能保证内化。
[0008]当治疗性化合物是蛋白质时，另一种方法也适用，它是将感兴趣的蛋白质与配体缀合，该配体可以与受体分子特异性相互作用，从而促进肽的内化。这种方法的实例是免疫毒素，其中通过与靶向肿瘤特异性抗体的抗体分子连接来增强蓖麻毒素A链内化到肿瘤中(ML Grossbard,JG Gribben,AS Freedman,JM Lambert,J Kinsella,SN Rabinowe,L Eliseo,JA Taylor,WA Blattler和CL Epstein(1993)Adjuvant Immunotoxin Therapy With Anti
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B4
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Blocked Ricin After Autologous Bone Marrow Transplantation for Patients With B
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Cell Non
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Hodgkin
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s Lymphoma Blood 81 2263
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2271；以及Antignani A和FitzGerald D.(2013)Immunotoxins:The Role of the Toxin Toxins 5 1486
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1502)。相思子毒素(Abrin)已出于相同的目的而用于免疫毒素中(Gadadhar S,Karande AA(2013)Abrin Immunotoxin:Targeted Cytotoxicity and Intracellular Trafficking Pathway.PLo本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种胆汁酸或其药学上可接受的盐，所述胆汁酸或其药学上可接受的盐用于治疗人体或动物体的方法中，所述方法包括向所述人体或动物体施用治疗性化合物，其中：a)所述胆汁酸是鹅脱氧胆酸或脱氧胆酸，并且b)所述方法所述胆汁酸或胆汁盐用于实现或增强所述治疗性化合物的细胞内摄取。2.根据权利要求1所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如权利要求1中所限定的方法中，其中所述胆汁盐与EDTA联合使用。3.根据权利要求1或2所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如权利要求1或2中所限定的方法中，其中所述治疗性化合物是大分子。4.根据权利要求1或2所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如权利要求1或2中所限定的方法中，其中所述治疗性化合物是蛋白质。5.根据权利要求1至4中任一项所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如权利要求1至4中的任一项所限定的方法中，其中所述胆汁酸或其药学上可接受的盐是鹅脱氧胆酸盐，优选鹅脱氧胆酸钠。6.根据前述权利要求中任一项所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如前述权利要求中的任一项所限定的方法中，其中在所述方法中，在要实现或增强细胞内摄取的细胞表面处所达到的所述胆汁酸或胆汁盐的浓度为2mg/ml至40mg/ml。7.根据权利要求2至6中任一项所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如权利要求2.6中的任一项所限定的方法中，其中在所述方法中，在要实现或增强细胞内摄取的细胞表面处所达到的所述EDTA的浓度为0.1mg/ml至10mg/ml。8.根据权利要求2至6中任一项所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如权利要求2.6中的任一项所限定的方法中，其中在所述方法中，在要实现或增强细胞内摄取的细胞表面处所达到的所述EDTA的浓度为0.2mg/ml至10mg/ml。9.根据前述权利要求中任一项所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如前述权利要求中的任一项所限定的方法中，其中在所述方法中，胆汁酸或胆汁盐受体介导的通过网格蛋白包被小窝的内化用于实现或增强所述治疗性化合物的细胞内摄取。10.根据前述权利要求中任一项所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如前述权利要求中的任一项所限定的方法中，其中在所述胆汁酸或胆汁盐的所述用途中，所述胆汁酸或胆汁盐为胶束形式。11.根据前述权利要求中任一项所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如前述权利要求中的任一项所限定的方法中，其中在所述方法中，所述胆汁酸或其盐与一种或多种另外的剂组合使用。12.根据权利要求11所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如权利要求11中所限定的方法中，其中在所述胆汁酸或胆汁盐的所述用途中，所述胆汁酸或胆汁盐为胶束形式，并且所述一种或多种另外的剂包括一种或多种如下的剂：a)稳定所述胆汁酸或其盐的所述胶束形式；和/或b)实现或增强所述胶束形式的形成。13.根据权利要求11或12所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如权利要求11或12中所限定的方法中，其中所述一种或多种剂包括没食子酸丙酯。14.根据权利要求11、12或13所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如权利
要求11、12或13中所限定的方法中，其中所述一种或多种另外的剂包括一种或多种选自以下的剂：a)融合脂质，优选选自阳离子脂质体、中性辅助脂质如DOPE和阴离子脂质如磷脂酸；b)细胞穿透肽，优选为具有2至12个氨基酸的细胞穿透肽，如八精氨酸、九精氨酸和八赖氨酸；c)亲溶酶体剂，优选为氯喹；d)膜破坏肽，优选为INF7、H5WYG、43E或组氨酸10；e)膜破坏聚合物，优选为聚乙烯亚胺；f)光化学内化剂，优选为异硫氰酸荧光素或包含它的化合物；和/或g)改变细胞内囊泡转运的剂，优选为布雷非德菌素A。15.根据前述权利要求中任一项所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如前述权利要求中的任一项所限定的方法中，其中所述治疗性化合物是核酸聚合物并且所述治疗方法是基因治疗方法。16.根据前述权利要求中任一项所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如前述权利要求中的任一项所限定的方法中，其中所述治疗性化合物包含疏水部分。17.根据前述权利要求中任一项所述的胆汁酸或胆汁盐，所述胆汁酸或胆汁盐用于如前述权利要求中的任一项所限定的方法中，其中在所述方法中，所述胆汁酸或其盐以与所述治疗性化合物非共价缀合的胶束形式使用，以实现或增强所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：爱克赛斯英国有限公司，
类型：发明
国别省市：