连续无血污染脑脊液的采集方法技术

一种连续无血污染脑脊液的采集方法，采用动物兔为采集体，将兔麻醉后，沿额顶正中线向枕骨隆突处切开皮肤及皮下组织，直至显露出颅骨，利用硬膜外导管由颅顶置入枕大池，缝合皮肤及皮下组织，将导管固定，让脑脊液自行流出，本发明专利技术采集标本量大，可根据时间要求反复采集标本，操作简单、易控制，得到的样本满足了无血源性污染脑脊液标本的要求，在中枢神经系统疾病的研究中，具有极大的实用价值和经济价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学领域里的一种样本采集方法，具体地说是一种。
技术介绍
在研究脂质体包裹神经生长因子通过血屏降的过程中，为保证研究成果的准确性，对采集的脑脊液样本要求甚高。目前通常采用的采集方法中，脑脊液样本的血污染是一个严重的问题。实现无血污染脑脊液的采集，不仅能够保证中枢神经系统的药物代谢的准确性，同时也是研究其它中枢神经系统疾病的重要条件。通过文献检索，国内外均无关于的报道，经我们研究，得到了利用家兔进行，由该方法采集的脑脊液样本完全能够满足医学研究要求，也为临床科研工作提供了一种有效的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种操作简单、。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的一种，采用动物兔为采集体，其特征在于包括以下步骤A)由兔耳缘静脉注入麻醉剂，待麻醉兔后，将兔俯卧位固定于兔手术台上，颅顶部剪毛，消毒手术野；为保证麻醉效果，麻醉剂可采用20％乌拉坦，麻醉剂量可为7毫升/千克体重，本专利技术中也可使用死亡时间不超过5分钟的兔作为采集体。B)沿兔额顶正中线向枕骨隆突处纵形切开皮肤及皮下组织，直至显露出颅骨，并彻底止血；通常切开深度在0.8厘米左右。C)固定兔头部，在中线距枕骨隆突0.3厘米～0.8厘米的两旁约0.2厘米～0.4厘米处，避开已暴露骨皮质内的血管作为操作点，以牙科钻斜40°～50°方向向下钻开颅骨，用硬膜外导管沿枕骨大孔方向置管，清亮脑脊液顺管内流出时，用血管钳距颅骨3厘米～8厘米处夹管；在实际操作中，可在中线距枕骨隆突0.5厘米的两旁约0.3厘米处作为操作点，牙科钻倾斜角度可为45°，硬膜外导管沿枕骨大孔方向置入深度为带侧孔端进入约2.0厘米，血管钳距颅骨约5厘米。D)缝合皮肤及皮下组织，将导管与兔毛一同固定，这样可防止兔头部甩动时导管脱落；需要长时间观察时，可将导管残端烧闭后再缝合固定在皮肤上，防止兔清醒后抓挠脱落。若进行外周静脉给药试验，需在置管后5分钟，待被搓破的毛细血管充分闭合后方可进行给药。E)用剪刀剪除夹闭处，Eppendorf管收集顺管内流出的脑脊液，待采集量达到后继续夹管固定直至下次采集。每次最大采集量为1.2ml，采集过程中不可轻易调整导管、更不可抽吸脑脊液，以防止颅内血管破裂造成血性脑脊液；若每次采集量大于0.8ml，则不要在短时间内重复采集。将以上装有脑脊液样本的Eppendorf管编号、置于零下70℃冰箱内备用。对采用以上方法采集得到的脑脊液样本采用肉眼、显微镜直接观察红细胞计数，利用便隐血胶体金检测试纸进行检测，得到结果是肉眼观察所采脑脊液清亮、无色、透明，显微镜未检出红细胞；脑脊液便隐血胶体金检测结果显示为阴性。具体操作方法如下1、取蒸馏水约0.5ml放入事先标记好的小试管中；2、将脑脊液200ul加入已放入试管的蒸馏水中搅拌；3、取出试纸条以标有MAX标记端插入试管中，1-5分钟内判读结果。5分钟后显示结果无效。便隐血胶体金检测试纸结果判读标准阳性出现控制线C和反应线T两条红色条带；阴性只出现控制线C一条色带，而无反应线T色带出现；无效控制线C和反应线T均不出现，或只出现反应线T一条色带，应用新条重新测试。本试验结果显示为只出现控制线C一条色带，而无反应线T)带出现，判定为阴性。在中枢神经系统疾病的研究中，尤其是考察药物在中枢神经系统的代谢情况时，连续无污染脑脊液的采集至关重要，是保证实验结果具有高度可靠性的重要条件。兔是常用的实验动物之一，它价格便宜，易获得，饲养方便，脑脊液含量较多。由于兔椎间隙狭窄，我们曾采用腰穿、枕骨大孔穿刺、硬膜外置管等方法均不能达到无血污染、连续采集标本的要求。本专利技术中，利用硬膜外导管由颅顶置入枕大池，让脑脊液自行流出，采集标本量大，可根据时间要求反复采集标本。它的优点是1、硬膜外导管直径略大于颅骨上的钻孔，能够避免板障内的出血渗入脑脊液中；2、而脑膜、脑实质被戳破后也可被其封闭，不至于发生出血；3、脑脊液不需抽吸即可自行流出，避免了抽吸脑脊液的负压引起脑内毛细血管的破裂、出血；4、采集标本量大、易控制、采集时间能够得到保证，少量的采集脑脊液循环能够补充损失量；5、解决了在同一动物体内观察不同时间段脑脊液的成分变化，减少了实验误差；6、避免多次重复操作，降低实验难度。本专利技术所采集脑脊液经肉眼、显微镜直接观察红细胞计数，利用便隐血胶体金检测试纸检测无红细胞及血红蛋白，满足了无血源性污染脑脊液标本采集的要求。具体实施例方式一种本专利技术所述的，采用普通级新西兰家兔作为采集体，兔重2.0Kg，雌雄不限，采集前禁食4小时。采集所需材料为兔操作台，7号头皮针，20ml注射器，生理盐水，牙科钻，硬膜外导管，静切包，Eppendorf管，显微镜，便隐血胶体金检测试纸，-70℃冰箱。具体步骤如下A)由兔耳缘静脉注入麻醉剂，麻醉剂采用20％乌拉坦，麻醉剂量为7毫升/千克体重，待麻醉兔后，将兔俯卧位固定于兔手术台上，颅顶部剪毛，消毒手术野；B)沿兔额顶正中线向枕骨隆突处纵形切开皮肤及皮下组织，直至显露出颅骨，通常切开深度在0.8厘米左右，并彻底止血；C)固定兔头部，在中线距枕骨隆突0.5厘米的两旁约0.3厘米处，避开已暴露骨皮质内的血管作为操作点，以牙科钻斜45°方向向下钻开颅骨，用硬膜外导管沿枕骨大孔方向置管，置入深度为带侧孔端进入约2.0厘米，待清亮脑脊液顺管内流出时，用血管钳距颅骨5厘米处夹管；D)缝合皮肤及皮下组织，将导管与兔毛一同固定，这样可防止兔头部甩动时导管脱落；需要长时间观察时，可将导管残端烧闭后再缝合固定在皮肤上，防止兔清醒后抓挠脱落。若进行外周静脉给药试验，需在置管后5分钟，待被搓破的毛细血管充分闭合后方可进行给药。E)用剪刀剪除夹闭处，Eppendorf管收集顺管内流出的脑脊液，待采集量达到后继续夹管固定直至下次采集。每次最大采集量为1.2ml，采集过程中不可轻易调整导管、更不可抽吸脑脊液，以防止颅内血管破裂造成血性脑脊液；若每次采集量大于0.8ml，则不要在短时间内重复采集。将以上装有脑脊液样本的Eppendorf管编号、置于零下70℃冰箱内备用。对采用以上方法采集得到的脑脊液样本进行检测，具体操作方法如下1、采用肉眼、显微镜直接观察脑脊液样本红细胞计数肉眼观察所采脑脊液清亮、无色、透明，显微镜未检出红细胞。2、利用便隐血胶体金检测试纸检测脑脊液1)取蒸馏水约0.5ml放入事先标记好的小试管中；2)、将脑脊液200ul加入已放入试管的蒸馏水中搅拌；3)、取出试纸条以标有MAX标记端插入试管中，5分钟内判读结果，5分钟后显示结果无效。。便隐血胶体金检测试纸结果判读标准阳性出现控制线C和反应线T两条红色条带；阴性只出现控制线C一条色带，而无反应线T色带出现；无效控制线C和反应线T均不出现，或只出现反应线T一条色带，应用新条重新测试。本试验结果2分钟显示为只出现控制线C一条色带，而无反应线T)带出现，判定为阴性。本专利技术中，利用硬膜外导管由颅顶置入枕大池，让脑脊液自行流出，采集标本量大并且无外周血污染，可根据时间要求反复采集标本。本专利技术在中枢神经系统疾病的研究中，尤其是考察药物在中枢神经系统的代谢情况时，具有极大的实用价值和经济价值，为临床科研工作提供了一种有效的方法。权利要求1.一种，采用动物兔为采集体，其特征在于包括以本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种连续无血污染脑脊液的采集方法，采用动物兔为采集体，其特征在于包括以下步骤：Ａ）由兔耳缘静脉注入麻醉剂，待麻醉兔后，将兔俯卧位固定于兔手术台上，颅顶部剪毛，消毒手术野；Ｂ）沿兔额顶正中线向枕骨隆突处纵形切开皮肤及皮下组织， 直至显露出颅骨，并彻底止血；Ｃ）固定兔头部，在中线距枕骨隆突０．３厘米～０．８厘米的两旁约０．２厘米～０．４厘米处，避开已暴露骨皮质内的血管作为操作点，以牙科钻斜４０°～５０°方向向下钻开颅骨，用硬膜外导管沿枕骨大孔方向置管，清亮脑 脊液顺管内流出时，用血管钳距颅骨３厘米～８厘米处夹管；Ｄ）缝合皮肤及皮下组织，将导管与兔毛一同固定；Ｅ）用剪刀剪除夹闭处，Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管收集顺管内流出的脑脊液，待采集量达到后继续夹管固定直至下次采集，Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ 管内即为采得的无血污染脑脊液样本。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曹晓建，刘军，吕天润，陈骐，张宁，金正帅，李法卿，李素芹，姚乐申，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]