一种有核红细胞模拟物及制备方法技术

本发明专利技术涉及血细胞分析荧光检测技术领域，具体涉及一种有核红细胞模拟物及制备方法；获取动物血液并过滤，得到过滤血液；将所述过滤血液离心，得到离心液，并去掉所述离心液中的上清和白细胞，得到纯红细胞；使用固定剂重悬固化所述纯红细胞，得到全固化细胞；使用PBS缓冲液离心洗涤所述全固化细胞去除固定剂，得到半成品细胞，并将所述半成品细胞保存在细胞保存液中，得到有核红细胞模拟物；通过荧光

【技术实现步骤摘要】
一种有核红细胞模拟物及制备方法


[0001]本专利技术涉及血细胞分析荧光检测
，尤其涉及一种有核红细胞模拟物及制备方法。

技术介绍

[0002]正常人成熟红细胞不含细胞核，红细胞发育过程中的幼稚状态称为有核红细胞，正常情况下存在于骨髓中，但在某些病理条件下，外周血中也会存在有核红细胞。随人体外周血内的有核红细胞进行检测，可以为某些疾病的诊断提供证据，具有非常大的临床意义。越来越多的血细胞分析仪具备有核红细胞的检测功能，血细胞分析仪检测结果的准确性需要质控物进行质量控制。
[0003]现有技术CN102109430B采用荧光染色抑制剂降低白细胞与荧光染料的结合能力的方法模拟有核红细胞，但容易干扰检测用荧光信号，现有技术CN109459372A通过在红细胞上加载DNA或RNA片段用来模拟人有核红细胞的荧光特性。
[0004]但上述技术分析血细胞都存在工艺复杂，成本较高的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种有核红细胞模拟物及制备方法，旨在解决现有血细胞分析技术成本较高的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了一种有核红细胞模拟物制备方法，包括以下步骤：
[0007]获取动物血液并过滤，得到过滤血液；
[0008]将所述过滤血液离心，得到离心液，并去所述离心液中的掉上清和白细胞，得到纯红细胞；
[0009]使用固定剂重悬固化所述纯红细胞，得到全固化细胞；
[0010]使用PBS缓冲液离心洗涤所述全固化细胞，直至去除所述全固化细胞中的固定剂，得到半成品细胞，并将所述半成品细胞保存在细胞保存液中，得到有核红细胞模拟物；
[0011]通过血细胞分析仪对所述有核红细胞模拟物进行分析，得到分析结果。
[0012]其中，所述固定剂为醛类固剂，选自甲醛、乙醛和戊二醛。所述醛类固定剂的浓度优选为0.01％～5％(W/V)，所述醛类固定剂包括固定剂一、固定剂二和固定剂三，所述固定剂一包括0.5％甲醛、0.2g/L NaCl、0.34g/L Na2HPO4和0.24g/LKH2PO4，pH为7.2
±
0.2，渗透压为300
±
20mOsm/kgH2O，所述固定剂二包括3％乙醛、0.2g/LNaCl、0.34g/LNa2HPO4和0.24g/LKH2PO4，pH为7.2
±
0.2，渗透压为300
±
20mOsm/kgH2O，所述固定剂三包括0.1％戊二醛、0.2g/LNaCl、0.34g/L Na2HPO4和0.24g/L KH2PO4，pH为7.2
±
0.2，渗透压为300
±
20mOsm/kgH2O。。
[0013]其中，所述PBS缓冲液包括8g/L NaCl、0.2g/L KCl、1.44g/L Na2HPO4和0.24g/LKH2PO4，pH为7.2
±
0.2，渗透压为300
±
20mOsm/kgH2O。
[0014]其中，所述细胞保存液包括0.05g/L柠檬酸、11g/LNaCl、16g/L柠檬酸三钠和10g/L
牛血清白蛋白，pH为7.2
±
0.2，渗透压为300
±
20mOsm/kgH2O。
[0015]其中，所述有核红细胞模拟物由哺乳类、爬行类的红细胞制备。
[0016]本专利技术的一种有核红细胞模拟物制备方法，获取动物血液并过滤，得到过滤血液；将所述过滤血液离心，得到离心液，并去掉所述离心液中的上清和白细胞，得到纯红细胞；使用固定剂重悬固化所述纯红细胞，得到全固化细胞；使用PBS缓冲液离心洗涤所述全固化细胞，直至去除所述全固化细胞中的固定剂，得到半成品细胞，并将所述半成品细胞保存在细胞保存液中，得到有核红细胞模拟物；通过荧光
‑
散射原理的血细胞分析仪对所述有核红细胞模拟物进行分析，得到分析结果，该方法利用哺乳类、爬行类动物红细胞，特别是猪、狗、龟的红细胞模拟有核红细胞，优选固化剂处理红细胞后可显著提高红细胞与检测时的荧光染色试剂的结合能力，可用于模拟有核红细胞，对有核红细胞的分析测定进行准确的质量控制。本专利技术中的红细胞原料来源易得，制备方法简单，生产成本低廉，稳定性和重复性好，便于大规模生产，解决现有血细胞分析技术成本较高的问题。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0018]图1是通过荧光
‑
散射原理的血细胞分析仪测试人血结果示意图。
[0019]图2是将制备好的有核红细胞模拟物加入到人血样本重复混匀后结果示意图。
[0020]图3是实施例一的结果示意图。
[0021]图4是实施例二的结果示意图。
[0022]图5是实施例三的结果示意图。
[0023]图6是本专利技术提供的一种有核红细胞模拟物制备方法流程图。
具体实施方式
[0024]下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。
[0025]请参阅图6，本专利技术提供一种有核红细胞模拟物制备方法，包括以下步骤：
[0026]S01获取动物血液并过滤，得到过滤血液；
[0027]具体的，动物血液为为哺乳类、爬行类的血液，更优选为猪、狗和龟的血液。
[0028]S02将所述过滤血液离心，得到离心液，并去掉所述离心液中的上清和白细胞，得到纯红细胞；
[0029]S03使用固定剂重悬固化所述纯红细胞，得到全固化细胞；
[0030]具体的，所述固定剂为醛类固剂，选自甲醛、乙醛和戊二醛。所述醛类固定剂的浓度优选为0.01％～5％(W/V)，所述醛类固定剂包括固定剂一、固定剂二和固定剂三，所述固定剂一包括0.5％甲醛、0.2g/LNaCl、0.34g/LNa2HPO4和0.24g/LKH2PO4，pH为7.2
±
0.2，渗透压为300
±
20mOsm/kgH2O，所述固定剂二包括3％乙醛、0.2g/LNaCl、0.34g/LNa2HPO4和
0.24g/LKH2PO4，pH为7.2
±
0.2，渗透压为300
±
20mOsm/kgH2O，所述固定剂三包括0.1％戊二醛、0.2g/LNaCl、0.34g/L Na2HPO4和0.24g/L KH2PO4，pH为7.2
±
0.2，渗透压为300
±
20mOsm/kg本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种有核红细胞模拟物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：获取动物血液并过滤，得到过滤血液；将所述过滤血液离心，得到离心液，并去掉所述离心液中的上清和白细胞，得到纯红细胞；使用固定剂重悬固化所述纯红细胞，得到全固化细胞；使用PBS缓冲液离心洗涤所述全固化细胞，直至去除所述全固化细胞中的固定剂，得到半成品细胞，并将所述半成品细胞保存在细胞保存液中，得到有核红细胞模拟物；通过荧光
‑
散射原理的血细胞分析仪对所述有核红细胞模拟物进行分析，得到分析结果。2.如权利要求1所述的一种有核红细胞模拟物的制备方法，其特征在于，所述固定剂为醛类固剂，选自甲醛、乙醛和戊二醛。所述醛类固定剂的浓度优选为0.01％～5％(W/V)，所述醛类固定剂包括固定剂一、固定剂二和固定剂三，所述固定剂一包括0.5％甲醛、0.2g/L NaCl、0.34g/L Na2HPO4和0.24g/L KH2PO4，pH为7.2
±
0.2，渗透压为300
±
20mOsm/kgH2O，所述固定剂二包括3％乙醛、0.2g/L NaCl、0.34g/L Na2HPO4和0.24g/L KH2PO4，pH为7.2
±
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【专利技术属性】
技术研发人员：祝毅，周永杨，龚喜，
申请(专利权)人：桂林优利特医疗电子有限公司，
类型：发明
国别省市：