检测非洲猪瘟病毒抗原的酶联免疫试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种非洲猪瘟病毒抗原检测酶联免疫试剂盒及其应用。该试剂盒包括可与非洲猪瘟病毒抗原特异性结合的单克隆抗体作为捕获抗体包被的酶联反应板和与非洲猪瘟病毒抗原特异性结合的单克隆抗体作为检测抗体制成的酶标抗体。采用非洲猪瘟病毒的两株特异性单克隆抗体制成的双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒，利用本发明专利技术试剂盒进行检测与其他病毒均不发生交叉反应，灵敏度高、特异性强，可以有效地检测非洲猪瘟病毒抗原的含量。地检测非洲猪瘟病毒抗原的含量。

【技术实现步骤摘要】
检测非洲猪瘟病毒抗原的酶联免疫试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于生物检测
，更具体地，本专利技术涉及一种非洲猪瘟病毒抗原检测酶联免疫检测试剂盒，适用于非洲猪瘟病毒抗原的特异、快速、准确检测。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是OIE规定的一类法定呈报的动物疫病，是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的一种猪的急性、热性、高度接触性传染性疾病，临床上以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征。2018年8月首次传入我国，因其高致死性和高传染性对我国养猪业造成巨大损失，极大地影响了我国的生猪供应。至今仍有多个省、市均有疫情报道，市场上急需非洲猪瘟抗体检测试剂盒出现，用于该病的诊断和预防。
[0003]ASFV是一种大的、有囊膜的双链DNA病毒，粒子直径平均为200nm左右，病毒基因组大小为170～190kb之间，有150多个主要开放阅读框，可编码150～200种蛋白质，其中p30蛋白是病毒主要结构蛋白之一，由CP204L基因编码，位本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种非洲猪瘟病毒抗原检测的酶联免疫试剂盒，包括可与非洲猪瘟病毒抗原特异性结合的单克隆抗体作为捕获抗体包被的酶联反应板和酶标抗体。2.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述酶标抗体为可与非洲猪瘟病毒抗原特异性结合的单克隆抗体作为检测抗体制成的酶标抗体。3.根据权利要求1或2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述捕获抗体为含有重链可变区ASF
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V
H
和轻链可变区ASF
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；所述重链可变区ASF
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3C12
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V
H
和轻链可变区ASF
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3C12
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V
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均由决定簇互补区和框架区组成；所述ASF
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和所述ASF
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L
的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述ASF
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H
的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第50～54位氨基酸所示；所述ASF
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H
的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第69～84位氨基酸所示；所述ASF
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H
的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第117～126位氨基酸所示；所述ASF
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3C12
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V
L
的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第46～55位氨基酸所示；所述ASF
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3C12
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L
的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第71～77位氨基酸所示；所述ASF
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3C12
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V
L
的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第110～118位氨基酸所示。和/或；所述检测抗体为含有重链可变区ASF
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4F5
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H
和轻链可变区ASF
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4F5
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L
；所述重链可变区ASF
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4F5
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V
H
和轻链可变区ASF
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4F5
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V
L
均由决定簇互补区和框架区组成；所述ASF
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4F5
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V
H
和所述ASF
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4F5
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V
L
的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述ASF
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4F5
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V
H
的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.3的第50～54位氨基酸所示；所述ASF
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4F5
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V
H
的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.3的第69～85位氨基酸所示；所述ASF
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4F5
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V
H
的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.3的第118～125位氨基酸所示；所述ASF
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4F5
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V
L
的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第44～60位氨基酸所示；所述ASF
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4F5
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L
的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第76～82位氨基酸所示；所述ASF
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4F5
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V
L
的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第115～123位氨基酸所示。4.根据权利要求3所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述ASF
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3C12
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H
的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1的第1～137位所示；所述ASF
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3C12
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L
的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2的第1～128位所示。和/或；所述ASF
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H
的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.3的第1～136位所示；所述ASF
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4F5
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V
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的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.4的第1～133位所示。5.根据权利要求1
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4中任意一项所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述酶联反应板的获得方法是将所述捕获抗体溶于100μl的pH 9.6的碳酸盐溶液，然后加到96孔聚苯乙烯酶联反应板，每孔100ng～1000ng捕获抗体，2～8℃下放置8～12小时，使捕获抗体与酶联反应板充分结合，然后按照300μl/孔加入含有10mg/ml牛血清白蛋白pH7.4的PBS缓冲液，37℃封闭处理2～3小时，甩干后，待酶联反应板干燥后4℃密封保存。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括样品稀释液和20倍浓缩洗涤液；样品稀释液为含有5mg/ml酪蛋白的0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液；20倍浓缩洗涤液为含有浓度为0.8％～1.2％(ml/ml)的Tween
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20的0.01M，p...

【专利技术属性】
技术研发人员：董春娜，张蕾，李静，毕建敏，李鹏宇，于之清，宋芳，石守定，刘伟，刘鹏，肖进，齐鹏，
申请(专利权)人：中牧实业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：