高效测定神经节苷脂GM1及其杂质的药物分析方法技术

本发明专利技术名称为高效测定神经节苷脂GM1及其杂质的药物分析方法，属于药物分析技术领域。本发明专利技术以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱为固定相，以缓冲盐溶液与有机相的混合溶液为流动相能够有效分离、测定神经节苷脂GM1有关物质及含量。有关物质及含量。有关物质及含量。

【技术实现步骤摘要】
高效测定神经节苷脂GM1及其杂质的药物分析方法
[0001]本申请为2017年10月27日提交的申请号为201711030431.2专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种高效测定神经节苷脂GM1单组份及有关物质的药物分析方法。该分析方法能够有效分离和测定神经节苷脂GM1单组份及其相关杂质的含量，具有操作简便、快捷，可作为神经节苷脂GM1质量控制的重要组成部分。

技术介绍

[0003]神经节苷脂(gangliosides)是最复杂的鞘糖脂，广泛分布于脊椎动物的细胞膜上,在中枢神经系统中含量最高。它由带唾液酸的寡糖链和神经酰胺构成,根据唾液酸和寡糖的糖基数目及唾液酸连接位点的不同,可将神经节苷脂进行分类。其中含量较高的神经节苷脂为GM1、GDla、GDlb、GD3及GTlb。
[0004]GM1主要包括GM1A和GM1B两种组分，且所述GM1A和GM1B具有如下的结构。GM1通过对Na+，K+
‑
ATP酶活性的“补偿”而发挥作用，在Na+，K+
‑
ATP酶保持膜稳定和兴奋性方面起着重要的作用，对细胞正常功能非常重要。GM1的功能大致可归纳为以下几种：1.促进神经细胞及大脑组织的正常发育,防治脑瘫等疾病；2.修复损伤神经及大脑组织,防治脑中风；3.增强记忆功能；4.延缓神经细胞的衰老,防治帕金森、老年痴呆等疾病。GM1作用备受医药领域关注，目前国内已有多家产品上市。
[0005][0006]神经节苷脂GM1的制备来源于生物组织，成分复杂，而产品中杂质的种类和含量直接关系到药品质量和用药安全，因此如何准确测定神经节苷脂GM1单组份有关物质及含量则成为一个丞待解决的问题。国家药典(2015)关于神经节苷脂GM1原料药WS1‑
XG
‑
001
‑
2015、注射用WS1‑
XG
‑
002
‑
2015、注射剂WS1‑
XG
‑
003
‑
2015中规定一种测定神经节苷脂GM1有
关物质及含量的检测方法，特征是均采用氨基柱为分离基质、以大量有机溶剂为流动相的等度分离技术。上述方法的选择性有限，分离能力弱，存在对结构相似的有关物质不能有效分离的风险；使用205nm低紫外波长为检测波长、四氢呋喃为流动相，使得基线基础吸收值增高，基线噪音增大，杂质的检测灵敏度会随之减弱，存在对杂质低估甚至对杂质谱分析不完全的风险；且方法稳定性和重现性较差。为有效分析和检测药品质量，保证用药安全，仍需要开发出一种便捷、高效、准确测定神经节苷脂GM1及有关物质含量的分析方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术第一方面提供一种测定神经节苷脂GM1及其有关物质的高效液相色谱方法，该方法采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以缓冲盐溶液
‑
有机相为流动相。
[0008]其中，所述缓冲盐溶液选自下列盐的溶液：磷酸盐、高氯酸盐、甲酸盐、乙酸盐，优选磷酸二氢盐，更优选磷酸二氢钾；所述磷酸盐包括磷酸正盐、磷酸氢二盐、磷酸二氢盐；所述盐选自钠、钾、铷、铯、锂、铵或胺、钙的盐；所述有机相选自甲醇、乙醇、乙腈、丙醇、异丙醇中的一种或混合，优选乙腈。
[0009]优选地，所述缓冲盐溶液的pH值为6.0～9.0，优选6.5～7.5，更优选6.8、7.0、7.2。
[0010]优选地，所述色谱柱为反向色谱柱，选自Kromasil、Apollo、Waters、Merk。
[0011]优选地，所述色谱柱的规格为150mm
×
4.6mm,3.5um，或其他效能相当的色谱柱。
[0012]优选地，所述方法的柱温为40℃；检测波长为200～210nm，优选205nm。
[0013]优选地，所方法的流动相流速为：0.5ml/min～1.5ml/min，优选1.0ml/min；
[0014]优选地，缓冲盐溶液的pH值可以使用磷酸、碳酸钾、碳酸钠、三乙胺及其溶液进行调解；用于调节pH值的溶液的浓度为本领域的常规浓度，优选0.1～1.0mol/L。
[0015]优选地，所述方法采用梯度洗脱；具体地，所述流动相包含流动相A、流动相B，或者由流动相A、流动相B组成；所述流动相A为乙腈
‑
磷酸二氢盐溶液混合液，所述流动相B为乙腈；其中，流动相A中乙腈与磷酸二氢盐溶液的体积比为30～80：70～20，优选60～70：40～30，更优选65～70：35～30；在本专利技术的一个优选技术方案中，流动相A中乙腈与磷酸二氢盐溶液的体积比为68：32。
[0016]在本专利技术的流动相中，缓冲盐溶液的浓度为0.001～0.50mol/L，优选0.005～0.10mol/L、0.01～0.05mol/L，更优选0.02mol/L或0.01mol/L；在一个优选技术方案中，所述缓冲盐溶液为0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液、0.01mol/L的磷酸二氢钠、或者0.01mol/L的磷酸二氢铵。
[0017]优选地，本专利技术流动相采用如下梯度进行洗脱：
[0018][0019]注：100
‑
A是指除流动相A以外，其他全部为流动相B；
[0020]在本专利技术的一个技术方法中，本专利技术采用如下的洗脱梯度：
[0021][0022][0023]供试样品、对照品溶液、系统适用性溶液按照国家药典(2015)关于神经节苷脂GM1原料药WS1‑
XG
‑
001
‑
2015标准规定的方法或本领域的其他常规方法制备即可。在本专利技术的一个技术方案中，供试样品溶液、对照品溶液、系统适用性溶液可以按照下述方法制备：
[0024](1)供试品溶液：取供试样品适量，精密称定，加水或乙腈水溶液溶解并稀释制成0.5～10mg/ml的溶液，优选1.0mg/ml～5.0mg/ml，更优选1.0mg/ml，5.0mg/ml，作为供试品溶液。更具体地，供试品溶液可以通过下述方法制备得到：取本品约50mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得到浓度为5.0mg/ml的供试品溶液。
[0025](2)对照品溶液：取神经节苷脂GM1对照品适量，精密称定，选择水或者乙腈水溶液溶解并稀释制成约0.05～1.5mg/ml(优选0.05mg/ml或1mg/ml)的溶液，作为对照品溶液。更具体地，含量对照品溶液可以通过如下方法制备得到：取GM1A、GM1B对照品各约25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。有关物质对照品溶液可以通过如下方法制备得到：取单唾液酸四己糖神经节苷脂钠A(即GM1的钠盐形式)或者单唾液酸四己糖神经节苷脂钠B(即GM1B的钠盐形式)对照品约25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定神经节苷脂GM1及其有关物质的高效液相色谱方法，该方法采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，其流动相包含流动相A、流动相B；所述流动相A为乙腈
‑
磷酸二氢盐溶液混合液，用三乙胺调节pH值至6.5～7.5；所述流动相B为乙腈；流动相A中乙腈与磷酸二氢盐溶液的体积比为65～70：35～30；并采用如下梯度进行洗脱所述磷酸二氢盐溶液为0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液、0.01mol/L的磷酸二氢钠。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，流动相A中乙腈与磷酸二氢盐溶液的体积比为68：32。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A用三乙胺调节pH值至6.8、7.0、或7.2。4.根据权利要求1所述的方法所述方法，其特征在于，色谱柱的规格为150mm
×
4.6mm，3.5μm。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，柱温为40℃，检测波长为205nm。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：李慧，姜小平，宋玉平，魏长峰，李晓磊，管凯林，翟建华，邹丽红，吕园园，马明辉，梁鑫淼，郭志谋，丰加涛，
申请(专利权)人：齐鲁制药有限公司，
类型：发明
国别省市：