一种外泌体piRNA的用途制造技术

本发明专利技术属于生物医学技术领域，具体涉及一种外泌体piRNA的用途，将血清来源的外泌体非编码RNA piR

【技术实现步骤摘要】
TGAGAACTGAATTCCATAGGCTGC，引物为Human
‑
piR
‑
hsa
‑
164586，其上游引物序列Human
‑
piR
‑
hsa
‑
164586
‑
F为CGCGTGAGAACTGAATTCCATA，下游引物序列Human
‑
piR
‑
hsa
‑
164586
‑
R为AGTGCAGGGTCCGAGGTATT。
[0007]本专利技术涉及的RNA piR
‑
hsa
‑
164586通过外泌体提取试剂盒从血清中提取；
[0008]通过TEM(透射电子显微镜)、NTA(纳米颗粒跟踪分析)和 Western
‑
Blot(蛋白质印迹法)三种技术对提取的RNA piR
‑
hsa
‑ꢀ
164586的结构进行验证；
[0009]通过总RNA(总核糖核酸)抽提试剂(TRIZOL试剂)裂解细胞或外泌体，提取包含piR
‑
hsa
‑
164586中的总RNA，将总RNA反转录成 cDNA(互补脱氧核糖核酸)，通过qRT
‑
PCR(实时荧光定量逆转录聚合酶链反应)分析RNA piR
‑
hsa
‑
164586的表达量；
[0010]根据组织高通量测序得出：RNA piR
‑
hsa
‑
164586在非小细胞肺癌组织中的表达是显著上调的，具有潜在的生物学功能和调节的信号通路。
[0011]本专利技术涉及的RNA piR
‑
hsa
‑
164586的稳定性验证过程为：
[0012]将同一血清样本分为两组：提取外泌体组与外泌体耗竭组，通过 qRT
‑
PCR分别检测两组的RNA piR
‑
hsa
‑
164586的表达量，根据表达量判断外泌体悬液中是否富集了RNA piR
‑
hsa
‑
164586；
[0013]将同一血清来源的RNA piR
‑
hsa
‑
164586分为两组：RNase A处理组与RNase A未处理组，通过qRT
‑
PCR检测两组的RNA piR
‑
hsa
‑ꢀ
164586的表达量，根据表达量判断外泌体是否对所包裹的RNA piR
‑ꢀ
hsa
‑
164586起保护作用；
[0014]将血清来源的RNA piR
‑
hsa
‑
164586在室温下分别放置0h、 12h、24h和48h，通过qRT
‑
PCR检测在室温下放置不同时间后的RNA piR
‑
hsa
‑
164586的表达量，根据表达量判断血清来源的外泌体在室温下长期放置后的稳定性。
[0015]本专利技术涉及的RNA piR
‑
hsa
‑
164586的对非小细胞肺癌早期的检测效能的评估方法为：
[0016]通过构建ROC曲线(接收者操作特征曲线)将RNA piR
‑
hsa
‑ꢀ
164586与生物标志物CYFRA21
‑
1的检测性能进行分析和比较。
[0017]本专利技术涉及的RNA piR
‑
hsa
‑
164586的对非小细胞肺癌术后的预后效果的评估方法为：
[0018]通过qRT
‑
PCR技术和构建ROC曲线评估同一组织术前和术后一周血清来源外泌体的RNA piR
‑
hsa
‑
164586判断手术对非小细胞肺癌组织的干预效果。
[0019]本专利技术涉及的RNA piR
‑
hsa
‑
164586的对非小细胞肺癌临床特征的反映情况的评估方法为：
[0020]通过qRT
‑
PCR技术评估血清来源外泌体的RNA piR
‑
hsa
‑
164586 的表达情况，结合肺癌的临床特征的相关性，进行综合分析。
[0021]本专利技术涉及的RNA piR
‑
hsa
‑
164586的靶向作用效果的验证过程为：
[0022]将RNA piR
‑
hsa
‑
164586转染入非小细胞肺癌A549和HCC2279细胞系中，通过CCK8试剂盒(细胞计数试剂盒)和Edu(胸苷(T)类似物)染色检测非小细胞肺癌细胞增殖指标，根据非小细胞肺癌细胞增殖指标判断RNA piR
‑
hsa
‑
164586对细胞增殖活力的影响；
[0023]通过Trannswell(侵袭实验)小室和划痕实验检测非小细胞肺癌细胞迁移指标，根据非小细胞肺癌细胞迁移指标判断RNA piR
‑ꢀ
hsa
‑
164586对细胞迁移能力的影响；
[0024]通过流式细胞术检测凋亡指标，根据凋亡指标判断RNA piR
‑ꢀ
hsa
‑
164586对细胞凋亡的影响。
[0025]本专利技术与现有技术相比，将血清来源的外泌体非编码RNA piR
‑ꢀ
hsa
‑
164586用于非小细胞肺癌的早期检测和寻找用于克服癌症的潜在靶点，通过探究RNA piR
‑
hsa
‑
164586对非小细胞肺癌细胞系功能的影响，提高非小细胞肺癌的临床检测性能，具体过程是：首先，从组织、细胞和血清外泌体三个方面筛选出在非小细胞肺癌组织中显著高表达的RNA piR
‑
hsa
‑
164586；然后，通过构建ROC曲线对RNA piR
‑
hsa
‑
164586的检测性能进行统计分析；最后，将RNA piR
‑
hsa
‑ꢀ
164586的表达与非小细胞肺癌临床特征进行关联性比较和分析，进一步探究RNA piR
‑
hsa
‑
164586的激动剂和抑制剂对非小细胞功能的影响；基于大样本量的数据分析和反复实验验证，可信度高，性能显著，为非小细胞肺癌的早期检测提供了一种新型的血清标志物，为克服小细胞肺癌提供了潜在的治疗靶点。
附图说明：
[0026]图1为本专利技术实施1例涉及的组织高通量测序结果示意图。其中，a为差异表达基因聚类分析图本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种外泌体piRNA的用途，其特征在于，作为检测非小细胞肺癌的生物标志物和克服癌症的潜在靶点。2.根据权利要求1所述的外泌体piRNA的用途，其特征在于，外泌体piRNA为血清外泌体来源的，与PIWI蛋白作用的非编码RNA piR
‑
hsa
‑
164586。3.根据权利要求2所述的外泌体piRNA的用途，其特征在于，piR
‑
hsa
‑
164586的核苷酸序列片段为TGAGAACTGAATTCCATAGGCTGC，引物为Human
‑
piR
‑
hsa
‑
164586。4.根据权利要求3所述的外泌体piRNA的用途，其特征在于，上游引物序列Human
‑
piR
‑
hsa
‑
164586
‑
F为CGCGTGAGAACTGAATTCCATA。5.根据权利要求3所述的外泌体piRNA的用途，其特征在于，下游引物序列Human
‑
piR
‑
hsa
‑
164586
‑
R为AGTGCAGGGTCCGAGGTATT。6.根据权利要求2或3所述的外泌体piRNA的用途，其特征在于，RNA piR
‑
hsa
‑
164586由外泌体提取试剂盒从血清中提取，通过TEM、NTA和Western
‑
Blot技术对RNA piR
‑
hsa
‑
164586的结构进行验证。7.根据权利要求2或3所述的外泌体piRNA的用途，其特征在于，RNA piR
‑
hsa
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：徐文华，李艳丽，刘伊明，董妍涵，李濛，王萌远，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：