一种用于检测颅内葡萄球菌感染的试剂底物以及试剂盒的应用制造技术

本申请涉及生物技术领域，具体公开了一种用于检测颅内葡萄球菌感染的试剂盒及其应用。试剂盒底物包括含有NHS酯反应基团的荧光物质和糖肽类抗生素；其制备方法为：将含有NHS酯反应基团的荧光物质和糖肽类抗生素分别溶解于DMSO溶液中；待溶解完毕后，将二者搅拌混合，制得混合物；对搅拌后的混合物进行纯化，得到荧光物质

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测颅内葡萄球菌感染的试剂底物以及试剂盒的应用


[0001]本申请涉及生物
，更具体地说，它涉及一种用于检测颅内葡萄球菌感染的试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]颅内感染是神经外科手术患者医院感染的主要部位之一，是临床开颅手术患者最严重的并发症之一，感染率高达17.86％，死亡率高达21％，因此，颅内感染应尽快开始抗菌药物治疗。脑脊液细菌培养是颅内感染诊断的金标准，且能通过细菌鉴定及药敏试验结果指导临床治疗，但脑脊液培养阳性率不超过10％，且缺乏特异性，部分指标敏感性不够，污染率较高，给临床治疗带来了一定的困难。
[0003]颅内感染由于发病隐匿，进展迅速，治疗不及时往往导致严重的后遗症甚至死亡，因此早期诊断并及时治疗对改善患者的远期预后具有重要意义。颅内感染中葡萄球菌占重要地位，且MRSA感染高发，已成为临床上棘手问题。据美国疾病控制中心报告，由葡萄球菌引起的感染占世界第二位，仅次于大肠杆菌。2017年，世界卫生组织将葡萄球菌列为“高危害”监控对象，近几年，我国也逐步加强对葡萄球菌的监测工作。
[0004]脑脊液细菌培养是颅内感染诊断的金标准，且能通过细菌鉴定及药敏试验结果指导临床治疗，但脑脊液培养阳性率不超过10％，且仍缺乏特异性，部分指标敏感性不够，污染率较高，给临床治疗带来了一定的困难。因此，脑脊液细菌的早期诊断对改善患者的远期预后具有重要意义，显示出巨大的临床应用前景。
[0005]相关技术公开了一种葡萄球菌的分离方法，包括磁性纳米粒子与聚乙二醇进行偶联、用万古霉素偶联聚乙二醇包被的磁性纳米粒子复合物、聚乙二醇和万古霉素共修饰的磁性纳米粒子复合物捕获样品液中的目的菌，通过外加磁场的作用，将被捕获目标菌与样品液进行分离及重悬等步骤。通过磁分离捕获到的目的菌可以直接进行后续分析，与传统的细菌磁分离方法相比，该方法可以对血液中的革兰氏阳性菌进行磁分离，不仅提高了样品中金黄色葡萄球菌分离效率，同时也降低了成本。然而，该方法主要对血液已存在的葡萄球菌进行分离。对于如何检测验证血液中葡萄球菌的存在则很少介绍。
[0006]因此，本领域中仍然需要一种检测颅内葡萄球菌感染的方法，以便于从脑脊液中快速、特异性检测葡萄球菌。

技术实现思路

[0007]为了解决现有技术存在的缺陷，本申请提供一种用于检测颅内葡萄球菌感染的试剂底物以及试剂盒的应用，以便于从脑脊液中快速、特异性检测葡萄球菌。
[0008]第一方面，本申请提供一种用于检测球菌感染的试剂底物，采用如下的技术方案：一种用于检测球菌感染的试剂盒底物，包括含有琥珀酰亚胺酯(NHS酯)反应基团的荧光物质和糖肽类抗生素。
[0009]通过采用上述技术方案，糖肽类抗生素能够用于治疗细菌感染，尤其是对革兰阳性球菌，具有靶向性。含有NHS酯反应基团的荧光物质广泛应用于血管造影。同时，含有NHS酯反应基团的荧光物质对伯胺(
‑
NH2)反应迅速且特异性高，可以在短时间内标记含有胺(
‑
NH2)的抗体和胺修饰寡核苷酸。
[0010]本申请中，糖肽类抗生素作为配体，用于结合球菌，含有NHS酯反应基团的荧光物质具有荧光效果，对细菌起到示踪作用，糖肽类抗生素本身携带有NH2，该基团与含有NHS酯反应基团的荧光物质中的NHS基团偶联链接于一体，得到的产物经过纯化后，直接靶向球菌，从而对球菌进行检测鉴定。
[0011]可选的，所述含有NHS酯反应基团的荧光物质为吲哚菁绿
‑
琥珀酰亚胺酯(ICG NHS酯)，所述糖肽类抗生素为万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁中的一种。
[0012]优选的，所述糖肽类抗生素为万古霉素。
[0013]通过采用上述技术方案，ICG NHS酯是一种近红外荧光物质，能够有效吸收800nm左右的近红外波长，且对可见光范围波长的吸收率低，因此自发荧光引起的噪声低。另外，ICG NHS酯与糖肽类抗生素结合反应速度快，直接进行链接，而无需引入其他基团。
[0014]万古霉素能够干扰球菌细胞壁肽聚糖的交联，从而使球菌细胞发生溶解，从而杀死球菌。
[0015]第二方面，本申请提供一种用于检测球菌感染的试剂盒底物的制备方法，采用如下的技术方案：一种用于检测颅内葡萄球菌感染的试剂盒底物的制备方法，包括以下步骤：将含有NHS酯反应基团的荧光物质和糖肽类抗生素分别溶解于DMSO溶液中；待溶解完毕后，将二者搅拌混合，制得混合物；对搅拌后的混合物进行纯化，得到荧光物质
‑
糖肽类抗生素荧光靶向探针，所述荧光物质
‑
糖肽类抗生素荧光靶向探针即为试剂盒底物。
[0016]其中，当含有NHS酯反应基团的荧光物质为ICG NHS酯，糖肽类抗生素为万古霉素时，ICG NHS酯和万古霉素之间的反应具体为：
[0017]通过采用上述技术方案，二甲基亚砜(DMSO)溶液是极性非质子溶剂，能够溶解含有NHS酯反应基团的荧光物质和糖肽类抗生素，另外，DMSO是一种渗透性保护剂，能够迅速投入细胞，降低冰点，保持细胞活性。
[0018]将含有NHS酯反应基团的荧光物质和糖肽类抗生素分别溶解于DMSO溶液后，使含有NHS酯反应基团的荧光物质、糖肽类抗生素分别与DMSO溶液反应，最后再经过纯化，得到纯种的荧光物质
‑
糖肽类抗生素荧光靶向探针。
[0019]可选的，所述混合物搅拌温度为20℃
‑
30℃。
[0020]通过采用上述技术方案，设置混合物搅拌温度为20℃
‑
30℃，当搅拌温度低于20℃时，含有NHS酯反应基团的荧光物质、糖肽类抗生素分别与DMSO溶液反应的速度较慢；当搅
拌温度超过30℃时，含有NHS酯反应基团的荧光物质容易分解，而失去活性。
[0021]第三方面，本申请提供一种试剂盒底物的应用，采用以下技术方案：一种试剂盒底物，可用于检测球菌感染；所述球菌包括但不限于肺炎链球菌、化脓性链球菌、肠球菌。
[0022]可选的，所述试剂盒底物可用于检测颅内葡萄球菌感染。
[0023]第四方面，本申请提供一种用于检测颅内葡萄球菌的方法，采用以下技术方案：一种用于检测颅内葡萄球菌的方法，包括以下步骤：取2
‑
5ml脑脊液，去除脑脊液中的细胞；在脑脊液中加入荧光物质
‑
糖肽类抗生素荧光靶向探针并孵育1
‑
30min；通过离心去除游离的荧光物质
‑
糖肽类抗生素荧光靶向探针，制得样品；若样品内的细菌呈现红色荧光，则脑脊液中含有葡萄球菌。
[0024]通过采用上述技术方案，糖肽类抗生素上的NH2与含有NHS的酯反应基团的荧光物质反应，得到的产物通过纯化后形成荧光物质
‑
糖肽类抗生素荧光靶向探针，荧光物质
‑
糖肽类抗生素荧光靶向探针表面的五个氢键与脑脊液中葡萄球菌表面的D
‑
丙氨酰
‑
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测球菌感染的试剂盒底物，其特征在于，包括含有NHS酯反应基团的荧光物质和糖肽类抗生素。2.根据权利要求1所述的用于检测球菌感染的试剂盒底物，其特征在于：所述含有NHS酯反应基团的荧光物质为ICG NHS酯，所述糖肽类抗生素为万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁中的一种。3.根据权利要求1
‑
2任一项所述的一种用于检测球菌感染的试剂盒底物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将含有NHS酯反应基团的荧光物质和糖肽类抗生素分别溶解于DMSO溶液中；待溶解完毕后，将二者搅拌混合，制得混合物；对搅拌后的混合物进行纯化，得到荧光物质
‑
糖肽类抗生素荧光靶向探针，所述荧光物质
‑
糖肽类抗生素荧光靶向探针即为试剂盒底物。4.根据权利要求3所述的用于检测球菌感染的试剂盒底物的制备方法，其特征在于：所述混合物搅拌温度为20℃
‑
30℃。5.一种如权利要求3
‑
4任一项所述的试剂盒底物的应用，其特征在于：所述试剂盒底物可用于检测球菌感染。6.根据权利要求5 所述的试剂盒底物的应用，其特征在于：所述试...

【专利技术属性】
技术研发人员：盛宗海，郑海荣，胡德红，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：