一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方法，包括以下步骤：以地方优质白羽鸡为母本，罗曼白羽蛋鸡为父本杂交，在F1代中选留白羽自交，提取F2代基因组DNA，PCR扩增，测序，选留SNP位点基因型为TT型的个体进行横交和扩繁，经过3个世代以上的选育，得到遗传性状稳定的地方优质白羽鸡高产蛋品系。通过位于鸡5号染色体的ESRβ基因的与产蛋性状相连锁的SNP标记位点(E5：g.53215082)，并将该标记应用于鸡产蛋性状的选育，快速判断出该位点基因型，提高地方优质白羽鸡的产蛋性状，进而加快该品种遗传改良进度，该育种方法可以有效快速推进贵州地方鸡高产量等新品系的育种进程。产量等新品系的育种进程。产量等新品系的育种进程。

【技术实现步骤摘要】
一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方法


[0001]本专利技术属于家禽分子育种
，尤其涉及一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方法。

技术介绍

[0002]家禽不同品种间杂交主要是利用基因的非加性效应，产生杂种优势。随着我国畜禽改良工作的深入，杂种优势已经在畜禽生产上有了大规模应用。在地方鸡的杂交改良中，借助外来鸡生长快、产蛋量高等特点，开展杂种优势利用，可有效提高地方鸡资源利用价值，杂交后代在43周龄产蛋量、开产蛋重等传统杂交优势指标均有不同程度的提高。
[0003]鸡5号染色体上的ESRβ基因，属于甾体激素核酸受体，具有促进生殖器官发育成熟，促进雌性副性征的出现，维持性行为等功能。通过有效挖掘ESRβ基因上与产蛋等性状相关的单核苷酸多态性(SNP)标记，并将相关标记用于杂交后代选择来实现产蛋量等繁殖性状的早期选择。该方法可使目标性状基因纯合进展加快，在避免商品代出现性状分离的同时，更快更高效的选育出目标性状优良的鸡品种新品系。专利申请公开了CN201510756381.0公开了一个鸡翻毛性状相关的分子标记及其应用，在E22C19W28_E50C23区域鸡的KRT基因连锁群(genbank序列号AADN03009152.1)第56648位碱基处有一个A56648
‑
G56648的碱基替换，该替换引起SNP多态性，通过采用检测引物在该位点碱基替换情况来作鸡标记辅助选择关联分析，判断鸡翻毛性状。但是该方案并不能用于培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方法。r/>[0004]兴义矮脚鸡白羽系为代表的贵州地方鸡白羽系是从以兴义矮脚鸡为代表的贵州地方鸡选育出的一种节粮型蛋肉兼用型鸡，一般作为地方鸡配套系母本使用，其典型特征为隐性白羽，体型适中，遗传性能稳定，但产蛋性能不突出，导致制种成本较高。关于地方优质白羽鸡高产蛋品系培育公开的文献有一些，但是，现有技术中还没有利用SNP标记辅助选育的相关技术公开，且选育方法比较繁琐，选育所需时间比较长，大大提高了选育成本。

技术实现思路

[0005]本专利技术为解决上述技术问题，提供了一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方法。本专利技术通过实验鉴定了与以兴义矮脚鸡白羽系为代表的贵州地方鸡白羽系产蛋性状连锁相关的1个SNP标记，并将该标记应用于相关地方鸡产蛋性状的选育，具有良好育种效果。本专利技术首次得到与优质地方白羽鸡产蛋性状相关的SNP位点，具体是鸡5号染色体的ESRβ基因上的E5：g.53215082位点C/T突变，包括检测该突变位点的引物，利用引物检测该位点的基因型，即可在生长早期选留该位点的优势表型基因型TT的个体，加快产蛋性能优秀的新品系选育进度，为地方鸡选育提供了一种新途径。该方法可以有效快速推进贵州地方鸡高产蛋等新品系的育种进程。
[0006]为了能够达到上述所述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]用于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的引物对，其特征在于：所述引物对是用于鸡5号染色体的ESRβ基因与产蛋性状相关的SNP标记位点的PCR扩增，该引物对的核苷酸序列为：P
‑
F 5
’‑
ACTTTTCCCCTTCTCCCC
‑3’
，P
‑
R 5
’‑
ACTGCACATTTACAGTGCTATGT
‑3’
。
[0008]进一步地，一种含有权利要求1引物对(即P
‑
F 5
’‑
ACTTTTCCCCTTCTCCCC
‑3’
，P
‑
R 5
’‑
ACTGCACATTTACAGTGCTATGT
‑
3)的试剂盒也属于本专利技术的保护范围之内。
[0009]进一步地，一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方法，包括以下步骤：
[0010](1)以地方优质鸡白羽系为育种素材，组建基础育种群；
[0011](2)以步骤(1)育种群的地方优质白羽鸡为母本，以罗曼白羽蛋鸡为父本进行杂交，在F1代中选留白羽后代；
[0012](3)选用步骤(2)选留的白羽F1代自交，得到F2代；
[0013](4)提取步骤(3)的F2代鸡基因组DNA，借助权利要求1的引物对或权利要求2的试剂盒对DNA进行PCR扩增反应，采用直接测序法对扩增得到的PCR产物进行测序获得F2代5号染色体的ESRβ基因与产蛋性状相关的SNP标记位点，然后对SNP位点进行基因分型分析，选留基因型为TT型的个体，剔除CC、CT基因型个体；
[0014](5)按照家系选择法对步骤(4)得到的TT型个体进行横交和扩繁，经过3个世代以上的选育，得到遗传性状稳定的地方优质白羽鸡高产蛋品系。
[0015]进一步地，在步骤(1)，所述地方优质白羽鸡为兴义矮脚鸡白羽系、黔东南小香鸡白羽系及以上两种白羽鸡为父本或母本培育的白羽鸡品种品系。
[0016]进一步地，在步骤(4)，基因组DNA提取是通过翅静脉采血方式对所有试验鸡采血，使用蛋白酶K法提取血液DNA，
‑
20℃保存备用。
[0017]进一步地，在步骤(4)，每10μL的PCR扩增体系含有：Primer Mix 5μL，Sterilized ddH2O 3.4μL，P
‑
F 0.3μL，P
‑
R 0.3μL，DNA模板1μL。
[0018]进一步地，在步骤(4)，所述PCR反应体系为：94℃预变性10min，30个循环(94℃变性45s，54℃退火40s，72℃延伸50s)，72℃延伸8min，4℃保存。
[0019]进一步地，在步骤(4)，所述SNP标记位点是鸡5号染色体的ESRβ基因上的E5：g.53215082。用于检测SNP标记位点的引物对的核苷酸序列如权利要求1所示。
[0020]进一步地，在步骤(4)，SNP标记位点基因分型有TT型、CC型、CT型，通过检测分析，确定F2代ESRβ基因E5：g.53215082位点的TT基因型个体产蛋量较高，因此选留SNP标记位点基因型为TT型的个体，剔除CC、CT基因型个体。
[0021]进一步地，在步骤(4)，直接测序法是利用DNAstar软件中的MegAlign和Editseq程序结合测序峰图进行序列比对并拼接得到F2代鸡ESRβ基因CDS区的序列，与GenBank已上传的鸡ESRβ基因序列比对鉴定单核苷酸突变位点，然后用Excel和Word软件对数据进行统计、归类，运用SPSS软件进行方差分析，运用SeqMan分析测序峰图，利用MWSnap.3软件中的标尺测量各SNPs等位基因的相应峰高，按照崔建勋(2005)的方法估算等位基因频率，再运用DNAstar软件对ESRβ基因SNP位点(E5：g.53215082)与产蛋性状的关联性分析。
[0022]进一步地，一种鸡5号染色体上ESR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的引物对，其特征在于：所述引物对是用于鸡5号染色体的ESRβ基因与产蛋性状相关的SNP标记位点的PCR扩增，该引物对的核苷酸序列为：P
‑
F 5
’‑
ACTTTTCCCCTTCTCCCC
‑3’
，P
‑
R 5
’‑
ACTGCACATTTACAGTGCTATGT
‑3’
。2.一种含有权利要求1引物对的用于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的试剂盒。3.一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以地方优质鸡白羽系为育种素材，组建基础育种群；(2)以步骤(1)育种群的地方优质白羽鸡为母本，以罗曼白羽蛋鸡为父本进行杂交，在F1代中选留白羽后代；(3)选用步骤(2)选留的白羽F1代自交，得到F2代；(4)提取步骤(3)的F2代鸡基因组DNA，借助权利要求1的引物对或权利要求2的试剂盒对DNA进行PCR扩增反应，采用直接测序法对扩增得到的PCR产物进行测序获得F2代5号染色体的ESRβ基因与产蛋性状相关的SNP标记位点，然后对SNP位点进行基因分型分析，选留基因型为TT型的个体，剔除CC、CT基因型个体；(5)按照家系选择法对步骤(4)得到的TT型个体进行横交和扩繁，经过3个世代以上的选育，得到遗传性状稳定的地方优质白羽鸡高产蛋品系。4.根据权利要求3所述的一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方法，其特征在于：在步骤(1)，所述地方优质白羽鸡为兴义矮脚鸡白羽系、黔东南小香鸡白羽系及以上两种白羽鸡为父本或母本培育的白羽鸡品种品系。5.根据权利要求3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张福平，王文涛，龙广丽，林家栋，朱丽莉，何琦，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：