一种Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系及其应用制造技术

本发明专利技术提供了人Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系，其保藏号为CGMCC NO.45145，本发明专利技术从Angptl3敲除的小鼠中提取原代足细胞，慢病毒转染制备永生化的Angptl3敲除的鼠足细胞系，使用Nephrin和WT

【技术实现步骤摘要】
一种Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系及其应用


[0001]本专利技术属于生物和医疗
，具体涉及一种Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系及其应用。

技术介绍

[0002]肾病综合征(nephrotic syndrome，NS)是一组具有类似临床表现，不同病因及病理病变的肾小球疾病构成的临床综合征。可由多种病因引起，分为原发性、继发性和遗传性三大类。许多疾病可引起肾小球毛细血管滤过膜的损伤，导致肾病综合征。肾病综合征发展到后期往往演变为尿毒症，使肾病综合征的危害威胁生命。
[0003]Angptl3是一种分泌性糖蛋白，正常情况下主要在肝脏表达，发生肾病综合征时在足细胞中表达增高。研究表明Angptl3是导致肾病综合征的一个很重要的靶点，敲除Angptl3或降低Angptl3的表达可以在很大程度上保护足细胞，减少蛋白尿。
[0004]既往对Angptl3的体外研究需要向足细胞中转染质粒来降低其表达，或者从Angptl3敲除的小鼠中直接提取原代足细胞进行培养。但是上述两种方法均有弊端，质粒转染率低，降低Angptl3的表达程度有限；从Angptl3基因敲除的小鼠中直接提取原代足细胞培养周期长，失败率高，并且原代足细胞生长周期有限，需要反复提取。
[0005]以上缺点严重影响了对Angptl3的体外研究，需要一种新的Angptl3的体外研究的细胞。

技术实现思路

[0006]为了克服现有技术的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系及其应用。/>[0007]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]本专利技术的第一方面，提供了一种Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系，其保藏号为：CGMCC NO.45145。
[0009]本专利技术的第二方面，提供前述Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系的子代细胞系。
[0010]前述的Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系或子代细胞系，能够表达Nephrin蛋白和WT
‑
1蛋白。能够稳定增殖和传代。
[0011]本专利技术第三方面，提供前述的Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系或子代细胞系的用途，为制备肾病综合征细胞模型或制备肾病综合征动物模型。
[0012]本专利技术第四方面，提供前述的Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系或子代细胞系的用途，为制备肾病综合征诊断产品。
[0013]本专利技术第五方面，提供前述的Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系或子代细胞系的用途，为开发肾病综合征相关的生物工程产品。
[0014]本专利技术第六方面，提供前述的Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系或子代细胞系的用途，为开发Angptl3缺失相关疾病的生物工程产品。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0016]本专利技术从Angptl3敲除的小鼠中提取原代足细胞，慢病毒转染制备永生化的Angptl3敲除的鼠足细胞系，使用Nephrin和WT
‑
1抗体进行了足细胞的验证，永生化的足细胞可以稳定传30代以上，为研究在肾病综合征中Angptl3基因表达缺失对足细胞保护提供了理想和稳定的细胞系。该细胞系以进行永生化处理，能大量培养传代，培养要求相对较为简单，能够短时间内获得大量的实验用细胞，总体实验周期较短，适合推广。
[0017]本专利技术细胞株保藏信息如下：
[0018]细胞株名称：Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系
[0019]保藏号为：CGMCC NO.45145
[0020]保藏日期：2022.3.31
[0021]保藏单位名称：中国普通微生物菌种保藏管理中心
[0022]保藏单位简称：CGMCC
[0023]保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
附图说明
[0024]图1小鼠肾脏足细胞。(左图100x；右图200x)
[0025]图2永生化小鼠肾脏足细胞。(100x)
[0026]图3Nephrin抗体免疫荧光染色(由上至下依次为Nephrin、DAPI和Merge)。(100x)
[0027]图4WT
‑
1抗体免疫荧光染色(由上至下依次为WT
‑
1、DAPI和Merge)。(100x)
具体实施方式
[0028]在进一步描述本专利技术具体实施方式之前，应理解，本专利技术的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本专利技术实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本专利技术的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。
[0029]当实施例给出数值范围时，应理解，除非本专利技术另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本专利技术中使用的所有技术和科学术语与本
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
的技术人员对现有技术的掌握及本专利技术的记载，还可以使用与本专利技术实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本专利技术。
[0030]除非另外说明，本专利技术中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。
[0031]本专利技术的细胞系用于非诊断或治疗目的。可以用于基础研究。
[0032]本专利技术的一实施例提供Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系，其保藏号为：CGMCC NO.45145。
[0033]细胞永生化是指体外培养的细胞经过外界影响而具有无限增殖的能力的状态。
[0034]所述鼠永生化足细胞系能够传代30代以上。
塑料培养皿中，37℃，CO2恒温培养箱孵育。
[0057]1.3实验结果
[0058]Angptl3敲除的小鼠肾脏足细胞如图1所示。图1是放大100倍的从肾小球中爬出来的原代Angptl3敲除的足细胞，结果表明，细胞形态清晰、完整。
[0059]2、小鼠肾脏足细胞永生化
[0060]2.1实验材料
[0061]Puromycin、Polybrene(Sigma公司)；0.25％胰酶(上海碧云天)；CO2培养箱(上海博讯)。
[0062]2.2实验步骤
[0063]1、当图1所示的原代小鼠肾脏足细胞体外培养10天后，用PBS清洗细胞3次(pH值为7.3
±
0.1)，用0.25％胰酶培养箱中消化3分钟，用KI
‑
3T3完全培养基终止消化，然后把细胞悬液通过40uM细胞筛过滤，细胞悬液经1200rpm离心5min，最后用KI
‑
3T3完全培养基重悬细胞沉淀并将其铺于鼠尾胶原包被的6cm培养皿中；
[0064]2、当上述细胞生长本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系，其保藏号为：CGMCC NO.45145。2.如权利要求1所述的Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系，其特征在于，所述Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系能够传代30代以上。3.如权利要求1所述的Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系，其特征在于，所述Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系能够表达Nephrin蛋白和WT
‑
1蛋白。4.如权利要求1
‑
3任一所述的Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系的子代细胞系。5.如权利要求1
‑
3任一所述的Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系或如权利要求4所述的Angptl3敲除的鼠永生化足细胞系的子代细胞系，不表达Angptl3基因。6.如权利要求1
‑
3任一所述的Angptl3敲除的鼠永生...

【专利技术属性】
技术研发人员：冀保威，徐虹，刘俊朝，沈茜，
申请(专利权)人：复旦大学附属儿科医院，
类型：发明
国别省市：