杂交瘤细胞、洋葱黄矮病毒抗体及其应用、ELISA检测试剂盒和ELISA检测方法技术

本发明专利技术提供了杂交瘤细胞、洋葱黄矮病毒抗体及其应用、ELISA检测试剂盒和ELISA检测方法，涉及生物技术领域。本发明专利技术提供的杂交瘤细胞分泌单抗4G12、单抗6D7、单抗6E10或单抗10C8，能够用于上述单抗的制备。经发明专利技术人研究发现，上述单抗均能够特异性的与洋葱黄矮病毒结合，能够用于构建洋葱黄矮病毒的检测方法。本发明专利技术提供的洋葱黄矮病毒的ELISA检测方法，包括采用本发明专利技术提供的葱黄矮病毒抗体包被酶标板，然后依次进行待测样本孵育、抗体标记的辣根过氧化酶孵育和显色。该方法检测灵敏度高，特异性强，检测准确性好，方便快捷，为葱属植物病害检测、检疫、脱毒提供关键技术支持。脱毒提供关键技术支持。脱毒提供关键技术支持。

【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞、洋葱黄矮病毒抗体及其应用、ELISA检测试剂盒和ELISA检测方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及杂交瘤细胞、洋葱黄矮病毒抗体及其应用、ELISA检测试剂盒和ELISA检测方法。

技术介绍

[0002]洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus，OYDV)隶属于马铃薯Y病毒属，是导致大葱、洋葱、蒜、韭菜等葱属植物病害的主要病毒之一，该病毒于1929年在美国的洋葱中首次被发现。OYDV基因组全长约为10.5千nt左右，核酸分子为正义单链RNA，含1个大的开放阅读框，编码多聚蛋白，通过蛋白酶裂解成10个成熟蛋白，从N端到C端依次为P1、HC
‑
Pro、P3、6K1、CI、6K2、NIa
‑
VPg、NIa
‑
Pro、NIb和CP。其中衣壳蛋白(Coat Protein，CP)是唯一的结构蛋白，前人研究发现，CP主要参与病毒包装、症状表现和细胞间长距离运输，也是检验和检疫的主要靶标。
[0003]分蘖洋葱(Allium cepa var.aggregatum)，又名株葱，俗称毛葱、鬼子葱，为百合科葱属植物，是北方的1种特色经济作物，具有重要的经济意义和保健功能，年产值超20亿元。2018年在吉林省分蘖洋葱中发现叶片局部发黄、皱缩向下卷曲的症状，经鉴定该病害由OYDV侵染引起，导致分蘖洋葱产量下降35％
‑
80％，这是中国首次报道OYDV侵染分蘖洋葱。OYDV侵染分蘖洋葱后会出现叶片发黄、萎缩、起皱等症状，通过鳞茎母体带毒传给后代，引起种性退化，严重时甚至会毁种。目前尚无有效治疗植物病毒病的药剂，高效、精准的病毒检测技术是该病害防治的前提。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一目的在于提供杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞能够分泌特异性识别洋葱黄矮病毒衣壳蛋白(CP)的抗体。
[0006]本专利技术的第二目的在于提供一种洋葱黄矮病毒抗体，该抗体能够特异性识别洋葱黄矮病毒衣壳蛋白(CP)。
[0007]本专利技术的第三目的在于提供上述洋葱黄矮病毒抗体在构建洋葱黄矮病毒检测方法中的应用。
[0008]本专利技术的第四目的在于提供一种抗体标记的辣根过氧化酶。
[0009]本专利技术的第五目的在于提供一种洋葱黄矮病毒的ELISA检测试剂盒，以解决上述问题中的至少一种。
[0010]本专利技术的第六目的在于提供一种洋葱黄矮病毒的ELISA检测方法，为葱属作物OYDV病害防控及脱毒提供技术支持。
[0011]第一方面，本专利技术提供了杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞分泌单抗4G12、单抗6D7、单抗6E10或单抗10C8；
[0012]分泌单抗4G12的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10301；
[0013]分泌单抗6D7的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10302；
[0014]分泌单抗6E10的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10303；
[0015]分泌单抗10C8的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10304。
[0016]第二方面，本专利技术提供了一种洋葱黄矮病毒抗体，所述洋葱黄矮病毒抗体包括单抗4G12、单抗6D7、单抗6E10和单抗10C8中的至少一种；
[0017]分泌单抗4G12的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10301；
[0018]分泌单抗6D7的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10302；
[0019]分泌单抗6E10的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10303；
[0020]分泌单抗10C8的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10304。
[0021]作为进一步技术方案，所述洋葱黄矮病毒抗体为单抗10C8。
[0022]第三方面，本专利技术提供了一种洋葱黄矮病毒抗体在构建洋葱黄矮病毒检测方法中的应用；
[0023]优选地，所述检测方法包括ELISA检测方法。
[0024]第四方面，本专利技术提供了一种抗体标记的辣根过氧化酶，所述抗体包括上述洋葱黄矮病毒抗体。
[0025]第五方面，本专利技术提供了一种洋葱黄矮病毒的ELISA检测试剂盒，包括：上述洋葱黄矮病毒抗体、抗体标记的辣根过氧化酶、酶标板、洗涤液和显色液。
[0026]作为进一步技术方案，所述洋葱黄矮病毒抗体为单抗10C8；
[0027]优选地，所述洋葱黄矮病毒抗体的浓度为1
‑
2μg/mL，优选为2μg/mL；
[0028]优选地，所述辣根过氧化酶为单抗10C8标记的辣根过氧化酶；
[0029]优选地，所述辣根过氧化酶的浓度为1
‑
2μg/mL，优选为2μg/mL；
[0030]优选地，所述ELISA检测试剂盒还包括封闭剂；
[0031]优选地，所述封闭剂包括5％脱脂奶粉。
[0032]第六方面，本专利技术提供了一种洋葱黄矮病毒的ELISA检测方法，包括如下步骤：
[0033]采用上述洋葱黄矮病毒抗体包被酶标板，然后依次进行待测样本孵育、上述抗体标记的辣根过氧化酶孵育和显色。
[0034]作为进一步技术方案，所述洋葱黄矮病毒抗体为单抗10C8；
[0035]优选地，所述洋葱黄矮病毒抗体的浓度为1
‑
2μg/mL，优选为2μg/mL；
[0036]优选地，所述洋葱黄矮病毒抗体包被酶标板的温度为2
‑
37℃，优选为4℃；所述洋葱黄矮病毒抗体包被酶标板的时间为6
‑
16h，优选为16h；
[0037]优选地，所述辣根过氧化酶为单抗10C8标记的辣根过氧化酶；
[0038]优选地，所述的浓度为1
‑
2μg/mL，优选为2μg/mL；
[0039]优选地，所述辣根过氧化酶孵育的温度为25
‑
39℃，优选为37℃；所述辣根过氧化酶孵育的时间为30
‑
60min，优选为45min。
[0040]作为进一步技术方案，所述洋葱黄矮病毒抗体包被酶标板之后和待测样本孵育之前还包括封闭步骤；
[0041]优选地，所述封闭的封闭剂包括5％脱脂奶粉；
[0042]优选地，所述封闭的温度为25
‑
39℃，优选为37℃；
[0043]优选地，所述封闭的时间为10min
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.杂交瘤细胞，其特征在于，所述杂交瘤细胞分泌单抗4G12、单抗6D7、单抗6E10或单抗10C8；分泌单抗4G12的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10301；分泌单抗6D7的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10302；分泌单抗6E10的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10303；分泌单抗10C8的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10304。2.一种洋葱黄矮病毒抗体，其特征在于，所述洋葱黄矮病毒抗体包括单抗4G12、单抗6D7、单抗6E10和单抗10C8中的至少一种；分泌单抗4G12的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10301；分泌单抗6D7的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10302；分泌单抗6E10的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10303；分泌单抗10C8的杂交瘤细胞保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10304。3.根据权利要求2所述的洋葱黄矮病毒抗体，其特征在于，所述洋葱黄矮病毒抗体为单抗10C8。4.权利要求2或3所述的洋葱黄矮病毒抗体在构建洋葱黄矮病毒检测方法中的应用；优选地，所述检测方法包括ELISA检测方法。5.一种抗体标记的辣根过氧化酶，其特征在于，所述抗体包括权利要求2或3所述的洋葱黄矮病毒抗体。6.一种洋葱黄矮病毒的ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括：权利要求2或3所述的洋葱黄矮病毒抗体、权利要求5所述的辣根过氧化酶、酶标板、洗涤液和显色液。7.根据权利要求6所述的EL...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书二页说明书九页附图二页，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院，
类型：发明
国别省市：