一种HPV病毒检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种HPV病毒检测试剂盒。本发明专利技术通过筛选优化获得了HPV6/11特异性的免疫抗原肽，将所述抗原肽免疫小鼠制备获得了特异性的单克隆抗体，所述单克隆抗体能够特异性的结合HPV6/11，并且还具有抑制HPV6/11感染正常细胞的效果，将所述单抗制备成为试剂盒可以有效的用于HPV的检测，具有较好的应用前景。具有较好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种HPV病毒检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，更具体的涉及一种HPV病毒检测试剂盒。

技术介绍

[0002]宫颈癌是全球范围内女性第二大常见的恶性肿瘤，每年约有52.8万新发病例和27.5万死亡病例，其中，87％的新发病例发生在发展中国家。中国每年约有9.9万新发病例和3.1万死亡病例。大量研究表明，人乳头瘤病毒(hu
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manpapillomavirus，HPV)的持续感染与宫颈癌的发生密切相关，高危型HPV感染是引起宫颈上皮内瘤变(cervicalintraepithelialneoplasia，CIN)和子宫颈癌的主要因素。目前已发现200多种HPV基因型别，其中，约54种HPV基因型别可感染生殖道黏膜，并且还有更多的HPV亚型正在鉴定中。新的HPV基因型的判定标准是指该HPV基因型别在E6、E7或者L1区的核苷酸序列与其他任意已确定型别的HPV有超过10％的不同。根据其致病力及致病危险性的大小可将其分为高危型HPV和低危型HPV。高危型HPV感染可引起宫颈、阴道、肛门、阴茎和口咽部位的上皮内瘤变或癌变，其HPV型别主要包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82。低危型HPV感染仅可引起生殖器疣等良性病变，其HPV型别主要包括6、11、40、42、43、44、54、61、70、72和81。与高危型HPV相比，低危型HPV的E6和E7蛋白干扰P53基因和pRb基因的作用相对较弱。
[0003]HPV检测技术广泛应用于宫颈癌的筛查、流行病学调查及宫颈癌疫苗有效性的评价中。目前，国内外针对HPV的检测方法层出不穷，HPV不同检测方法的优劣主要通过两个方面进行评价：临床使用价值(即临床灵敏度)与检测极限(即分析灵敏度)。临床灵敏度(又称功能灵敏度)是指在HPV检测技术中试验结果为阳性的患者所占的比例以及HPV对CIN2级及以上2的检出能力；分析灵敏度(又称检测限量)是指可检测的最低分析物浓度。良好的HPV检测技术需要满足较高的临床灵敏度及较低的分析灵敏度。目前，全世界约完成150个不同的HPV检测实验，尚有一部分仍在进行中。已采用的检测方法主要包括DNA检测、RNA检测和与HPV相关的标志物检测以及抗原检测。
[0004]Aptima HPV于2012年获批，其是第一个也是唯一一个经过FDA认证的用于HPVmRNA检测技术。该技术基于转录介导的扩增(transcription—MediatedAmplification，TMA)技术检测HPV E6/E7mRNA：即在上游引物5
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端添加T7启动子，在反应体系中引入RNA聚合酶，目的mRNA经过逆转录成cDNA后，以转录的方式实现目的分子扩增。该技术目的在于检测HPV致癌基因E6/E7的mRNA，较之于HPV—DNA检测而言，可以有效避免HPV一过性感染对检测结果的干扰，但AptimaHPV检测费用也较昂贵。
[0005]HPV抗体血清学检测在HPV疫苗学和流行病学研究中具有重要意义。目前针对HPV的快速免疫检测试剂盒的研究还不够多，有待于进一步的研究，特别是能同时针对多种HPV亚型的检测试剂还不够多。因此，开发针对HPV多亚型检测的试剂盒变得尤为迫切。

技术实现思路

[0006]本专利技术克服现有技术的缺陷，筛选并获得了HPV6和HPV11高免疫原性抗原肽，其序
列如SEQ ID NO：1所示。
[0007]本专利技术另外一方面，以HPV6和HPV11高免疫原性抗原肽作为免疫原制备并获得了相应的单克隆抗体。
[0008]一方面，本专利技术提供了特异性针对HPV6/11的单克隆抗体，其特征在于其轻重链可变区序列分别如SEQ ID No：3和4所示。
[0009]本专利技术抗体，其片段或VH链条VL抗体的链包括具有序列同一性的那些抗体，片段或VH链条VL本文所述抗体的链。例如，本专利技术包括与本文所述例证序列(例如，SEQ ID NO:3
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4)具有至少65％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％，99.5％或99.8％序列同一性的序列。因此，抗体的氨基酸序列的重链和/或轻链可变区可以不同于本文提出的序列，并且仍然在本文公开的实施方案的范围内。例如，一个或多个互补决定区(CDR)可以不同于本文所述抗体氨基酸序列的重链和/或轻链可变区。或者，一个或多个互补决定区(CDR)可以与本文所述的序列(例如，SEQ ID NOS:3
‑
4)相同，但是重链或轻链可变区的其它部分可以不同。本文所述的示例性序列(例如，SEQ ID NOs:3
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4)的这种序列变化将被认为是本文所公开的本专利技术范围内的实施方案。
[0010]本专利技术的抗体的非限制性例子包括，例如，完整的免疫球蛋白及其本领域已知的保留抗原结合亲和力的变体和片段。抗体片段的例子包括但不限于Fv，Fab，Fab
’
，Fab
’‑
SH，F(ab
’
)2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。抗体片段包括通过修饰全抗体或使用重组DNA方法重新合成的抗原结合片段。
[0011]北专利技术的抗体包括保守变体：“保守的”氨基酸取代是那些基本上不影响或降低蛋白质的功能，例如蛋白质与靶蛋白质相互作用的能力的取代。例如，与参比抗体序列相比，FTC特异性抗体包括多达1，2，3，4，5，6，7，8，9或多达10个保守取代，并保留了对FTC的特异性结合活性。术语保守变异还包括使用取代的氨基酸代替未取代的亲本氨基酸。
[0012]另外，普通技术人员将认识到，单独的取代，改变的删除或添加，在编码序列中添加或删除单个氨基酸或小部分氨基酸(例如少于5％，在一些实施方案中少于1％)是保守变异，其中该变异导致氨基酸被化学上相似的氨基酸取代。
[0013]提供功能相似氨基酸的保守氨基酸取代表是本领域普通技术人员公知的。以下六个基团是被认为是彼此保守取代的氨基酸的例子：
[0014]1)丙氨酸(A)，丝氨酸(S)，苏氨酸(T)；
[0015]2)天冬氨酸(D)，谷氨酸(E)；
[0016]3)天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q)；
[0017]4)精氨酸(R)，赖氨酸(K)；
[0018]5)异亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，蛋氨酸(M)，缬氨酸(V)；
[0019]6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)。
[0020]本专利技术的抗体还偶联有可检测标记：可检测分子(也称为标记)，其直接或间接缀合到抗体，以促进检测。例如，可检测标记能够通过ELISA，分光光度法，流式细胞术，显微镜或诊断成像技术(例如CT扫描，MRI，超声，纤维光学检查和腹腔镜检查)进行检测。可检测标记物的具体，非限制性例子包括亲和素，生物素，荧光团，化学发光剂，酶键，放射性同位素和重金属或化合物(例如用于MRI检测的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.HPV6和HPV11的双特异性单克隆抗体7C4c在制备用于HPV6/11检测的试剂盒中的用途，其中，HPV6和HPV11的双特异性单克隆抗体轻链可变区序列如SEQ ID NO：3所示，HPV6和HPV11的双特异性单克隆抗体重链可变区序列如SEQ ID NO：4所示。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述单克隆抗体还偶联有可检测的标记。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于可检测的标记为酶。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于酶为过氧化氢酶，葡萄糖
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磷酸脱氢酶，葡糖淀粉酶或...

【专利技术属性】
技术研发人员：张倡埼，朱高茂，
申请(专利权)人：北京热燕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：