【技术实现步骤摘要】
一种高通量酵母双杂交文库筛选方法
[0001]本专利技术涉及分子生物
，更具体的说是涉及一种高通量酵母双杂交文库筛选方法。
技术介绍
[0002]酵母菌是一种微生物，其生长条件简单，遗传背景清楚，高效低成本的特点使得酵母适合用于突变筛选和功能研究，在分析蛋白质相互作用方面尤为突出。通过DNA结合结构域和转录激活结构域结合共同启动蛋白的转录与翻译，通过涂板观察酵母菌落的生长情况来鉴定蛋白之间是否具有相互作用。经典方法在进行大批量筛选互作蛋白时涂板，挑选单克隆验证都会消耗大量时间。
[0003]综上，如何提供一种不需进行涂板筛选鉴定互作蛋白的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
[0004]有鉴于此，本专利技术提供了一种高通量酵母双杂交文库筛选方法。本专利技术的方法提高了工作效率，免除了杂交后涂板生长的步骤。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]一种高通量酵母双杂交文库筛选方法，包括如下步骤：
[0007](1)酵母诱饵菌株的...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种高通量酵母双杂交文库筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)酵母诱饵菌株的制备；(2)酵母诱饵菌株与文库菌的杂交；(3)交配后培养物的培养与检测：将交配后培养物置于半固态培养基中，冰上培养，使液态培养基凝固成半固态胶冻状，之后培养收集酵母细胞，并提取酵母细胞质粒进行PCR扩增，凝胶电泳检测。2.如权利要求1所述的一种高通量酵母双杂交文库筛选方法，其特征在于，步骤(1)的具体操作为：将质粒和carrier DNA混合后加入到酵母感受态细胞中培养，经Solution B孵育和Solution C清洗后，使用SD/
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Trp筛选培养基培养，得到酵母诱饵菌株；其中，Solution B包括如下质量浓度的组分：200mM/L的BICINE和40％的PGE1000；Solution C包括如下质量浓度的组分：10mM/L的BICINE和150mM/L的NaCl；SD/
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Trp筛选培养基包括如下质量浓度的组分：SD/
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Leu/
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Trp 1.19g/L、Yeast Nitrogen Base W/O Amino acids 6.7g/L、Leu 10～200mg/L和Agar 20g/L；调节pH至5.8，且使用时加入葡萄糖，使葡萄糖的终质量浓度为2～20％。3.如权利要求2所述的一种高通量酵母双杂交文库筛选方法，其特征在于，步骤(1)的具体操作为：(11)取质粒和carrierDNA；其中，质粒和carrier DNA的质量体积比为1:10μg/μL，且carrier DNA的质量浓度为10mg/mL；(12)将质粒和carrierDNA混合后加入到酵母感受态细胞中，37℃培养3～5min，且转速为200～250rpm/min；(13)培养完成后加入1mL SolutionB，混匀后30℃孵育1小时；(14)24～30℃条件下3000～4000rpm/min离心1min，弃上清，加入1mL Solution C，24～30℃条件下3000～4000rpm/min离心1min，弃上清，再加入100μL Solution C重悬细胞；(15)涂布在SD/
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Trp筛选培养基中，封闭膜封闭，28℃培养2～3天，得酵母诱饵菌株。4.如权利要求2所述的一种高通量酵母双杂交文库筛选方法，其特征在于，carrier DNA使用前需要100℃预热3～5min，之后冰上放置1～2min；酵母感受态细胞类型为Y187。5.如权利要求1所述的一种高通量酵母双杂交文库筛选方法，其特征在于，步骤(2)的具体操作为：将文库菌与酵母诱饵菌株混合，培养，待有受精卵后即得交配后培养物。6.如权利要求5所述的一种高通量酵母双杂交文库筛选方法，其特征在于，步骤(2)的具体操作为：(21)培养完成后，挑选直径2～3mm的酵母细胞接种到30～50mL SD/
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Trp液体培养基中，28℃下振荡培养至OD
600
＝0.6～1.0，震荡培养参数200～250rpm/min，1000g离心3～5min，弃上清，重悬于3～5mL SD/
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Trp液体培养基中；...
【专利技术属性】
技术研发人员：张健，袁洋，童晓红，王以锋，应杰政，
申请(专利权)人：中国水稻研究所，
类型：发明
国别省市：
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