【技术实现步骤摘要】
一种ZIF
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8抗菌机制的研究方法
[0001]本专利技术涉及ZIF
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8纳米粒子抗菌研究
，具体为一种ZIF
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8抗菌 机制的研究方法。
技术介绍
[0002]众所周知，近年来，细菌感染已成为人类健康的主要威胁。细菌感染最 常见和有效的方法是抗生素治疗。但抗生素的不合理使用导致耐药菌的爆发， 对临床细菌感染的治疗构成巨大威胁。由于新抗生素的开发远远滞后于细菌 耐药性的演变，迫切需要针对细菌感染制定替代治疗策略，以缓解细菌耐药 性问题。随着全球细菌耐药性、动物源性食品安全问题日益严重以及抗生素 使用监管的不断加强，研发新型药物替代抗生素迫在眉睫。作为抗耐药细菌 感染的竞争性替代药物，多功能纳米抗菌剂因其耐药可忽略、侵袭性小、全 身毒性风险低、选择性高而备受关注，而MOF材料已成为抗菌应用的研究热 点。ZIF
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8纳米粒子是MOFs的一个亚类，是由锌离子和2
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甲基咪唑组成的一 种多孔材料，具有分散性好、比表面积大、多孔性好、合成方...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种ZIF
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8抗菌机制的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1:扫描电镜观察ZIF
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8处理细菌后细菌细胞膜的变化，ZIF
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8与细菌共孵育后，8000rpm离心10min，PBS洗3次后，加入2.5％戊二醛4
°
固定过夜，菌体经梯度酒精脱水后，干燥喷金后扫描观察；步骤2：细菌β
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半乳糖苷酶含量的变化检测，MRSA过夜培养后离心，PBS重悬后，不同浓度ZIF
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8与细菌共孵育后，取上清液100μL，加入终浓度为3mmol/L的邻硝基苯β
‑
D
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半乳吡喃糖苷(ONPG)，37℃孵育30min后测定溶液在420nm的吸光值；步骤3：细菌膜电位的变化检测，MRSA培养后离心，HEPES洗涤3次后重悬，加入DiSC3(5)至0.5μM进行荧光探针的装载，37℃孵育15min后，加入90μL至96孔板中，再加入10μLZIF
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8(终浓度分别为0、25、50、100和200μg/mL)与细菌共孵育后，用多功能酶标仪M5测定激发波长622nm，发射波长670nm的荧光值；步骤4：细菌胞内ATP的变化检测，MRSA培养后，PBS重悬后,加入不同的ZIF
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8(0、25、50、100和200μg/mL)处理后，离心收集细菌细胞，每管加入200uL裂解液，充分涡动以裂解细胞，裂解后4C,12,000g离心5分钟，取上清，分别加入100uLATP检测工作液到96孔酶标板中，室温放置3
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5分钟，加入20uL不同浓度的标准品及样品，迅速用枪混匀，用化学发光仪液闪仪测定RLU值；步骤5：细菌呼吸链复合酶变化的检测，MRSA过夜培养后离心，PBS重悬后，ZIF
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8终浓度分别为0、25、50、100和200μg/...
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