一种小鼠肺癌胸腔积液模型的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种小鼠肺癌胸腔积液模型的构建方法，包括如下步骤：（1）体外培养LLC细胞，待细胞进入指数生长期时，生理盐水稀释细胞浓度至2x105～5x106/mL；（2）取6

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠肺癌胸腔积液模型的构建方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种小鼠肺癌胸腔积液模型的构建方法。

技术介绍

[0002]胸腔积液是晚期肺癌的临床事件之一，严重影响患者的生活质量和临床药物治疗。随着我国国民经济改革的不断深化，城市化、工业化进程不断加速，肺癌的发病率和死亡率之间增长，现已成为发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。晚期肺癌给患者及其家属造成了巨大的身体的和经济负担，尤其胸腔积液的发生往往严重影响肺癌患者的生活质量、制约临床医生的用药选择。由于不能直接利用人体进行试验，因此构建动物肺癌胸腔积液模型是相关治疗、相关药物开发及相关诊断标志物和诊断方法开发的重要手段。
[0003]目前，已申报通过的有关胸腔积液的模型主要为体外医学教学用教具，例如：中国专利申请CN202601058U公开了肺通气功能障碍模型。常用的肺癌动物模型主要包括诱导模型和移植模型，例如：中国专利申请CN104826136A公开了大鼠移植性肺癌模型的构建方法，中国专利申请CN108721256B公开了小鼠诱导性肺癌模型的构建方法。然而，目前的肺癌动物模型构建中均未涉及稳定的胸腔积液模型，均未与临床晚期肺癌患者的胸腔积液事件产生直接关联，无法实际模拟并促进解决晚期患者因胸腔积液导致的生活质量降低、临床用药限制等问题。因此，上述肺癌及胸腔积液相关模型的构建方法均难以满足相关要求。

技术实现思路

[0004]为解决现有技术中存在的问题，本专利技术通过小鼠胸腔局部移植的方式成功构建了小鼠肺癌胸腔积液模型。直接利用短暂性麻醉，创造微小创口，并采用胸腔局部移植肺癌细胞。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术的一种小鼠肺癌胸腔积液模型的构建方法，包括如下步骤：（1）体外培养LLC细胞，待细胞进入指数生长期时，生理盐水稀释细胞浓度至2x105～5x106/mL；（2）取6
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8周龄的C57BL/6J野生型小鼠，适应3
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5天，利用异氟烷麻醉机麻醉后，用镊子夹起小鼠胸骨柄左侧5
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6肋间的皮肤，用眼科剪在夹起处制造一个2
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3 mm的纵向切口，针尖注入深度为3
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5 mm，进针缓慢推注10 ml/g LLC细胞悬液；（3）小鼠正常供食供水培养时间为6
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12天后，制得小鼠肺癌胸腔积液模型。
[0006]进一步地，在步骤（1）中，体外培养LLC细胞，待细胞进入指数生长期时，生理盐水稀释细胞浓度至2x105～5x106/mL，细胞培养条件包括：10%胎牛血清，90% DMED高糖培养液，37℃，5%二氧化碳细胞培养箱，胰蛋白酶，无菌超净台，离心机，倒置显微镜。
[0007]进一步地，在步骤（2）中，取6
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8周龄的C57BL/6J野生型小鼠，适应3
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5天，利用异氟烷麻醉机麻醉后，用镊子夹起小鼠胸骨柄左侧5
‑
6肋间的皮肤，用眼科剪在夹起处制造一个2
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3 mm的纵向切口，针尖注入深度为3
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5 mm，进针缓慢推注10 ml/g LLC细胞悬液，注射完
毕后快速拔出针头后，适当碘伏消毒后创口，并迅速停止呼吸麻醉，放置待小鼠苏醒后放回鼠笼观察生命体征，注意保暖。所述小鼠包括雄性和雌性小鼠；所述麻醉机为动物吸入式麻醉机；所述注射器为一次性无菌注射器小号；所述小鼠培养条件参数包括：温度为19
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25℃，相对湿度为50
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70%，日常白炽灯白天为8
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10小时照明。
[0008]更进一步地，在步骤（1）中，所述的造模所有LLC体外培养细胞均处于指数生长期，活细胞数达到90%以上。
[0009]进一步地，在步骤（2）中，用于造模的小鼠体重为16
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18g，造模过程在无菌操作台上进行，小鼠麻醉采用异氟烷呼吸麻醉机。
[0010]进一步地，在步骤（2）中，所述的小鼠包括雄性和雌性小鼠；所述的麻醉机为动物吸入式麻醉机；所述的注射器为一次性无菌注射器小号；所述的小鼠条件参数包括：温度为19
‑
25℃，相对湿度为50
‑
70%，日常白炽灯白天为8
‑
10小时照明。
[0011]更进一步地，在步骤（3）中，所述的小鼠正常供食供水培养时间为7
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10天。
[0012]进一步地，在步骤（3）中，所述的小鼠正常供食供水培养时间为10
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12天。
[0013]进一步地，在步骤（2）中，所述的5
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6肋间制造一个2 mm的微小上皮组织创口。
[0014]更进一步地，在步骤（3）中，小鼠正常供食供水培养时间为7天。
[0015]本专利技术所述的小鼠肺癌胸腔积液模型在检测胸腔积液状态、筛选和开发相关药物、确定相关治疗方案、及发现相关诊断标志物和开发相关诊断方法中的应用。
[0016]有益效果：本专利技术所需要的实验设备简单，操作方便，造模周期短，可成功构建小鼠胸腔积液模型，且小鼠生存时间足够支持后续进一步进行相应的药物实验，重复性好，适用范围广。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：（1）本专利技术能有效且迅速的模拟临床晚期肺癌胸腔积液的情况，小鼠日常活动和体重在模型构建过程中不会受到影响，符合人体实际原发性肺癌的发展过程，能够反映晚期肺癌患者发生胸腔积液情况的实际情况。有利于肺癌胸腔积液相关治疗方案的制订、相关治疗药物的筛选和研发，以及发现肺癌胸腔积液诊断标志物和诊断试剂研发。
[0018]（2）本专利技术通过LLC细胞体外移植的方式直接构造小鼠晚期肺癌胸腔积液模型，能有效对应临床肺癌晚期患者胸腔积液时间情况，且造模周期短，能反应肺癌胸腔积液在人体的实际发生情况，有利于胸腔积液相关治疗策略及相关新药的研发。
附图说明
[0019]图1为本专利技术造模前处在指数生长期的LLC细胞的示意图；图2为本专利技术造模后小鼠胸腔积液显微图；图3为本专利技术造模组和对照组小鼠造模过程的体重变化曲线图；图4为本专利技术造模组和对照组小鼠造模后的体重变化曲线图；图5为本专利技术造模组和对照组小鼠造模第7天的胸腔积液体积图。
具体实施方式
[0020]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0021]实施例1本专利技术的一种小鼠肺癌胸腔积液模型的构建方法，包括如下步骤：（1）体外培养LLC细胞，待细胞进入指数生长期时，血球计数板和台盼蓝计数，利用生理盐水稀释细胞浓度至2x105～5x106/mL；所述的造模所有LLC体外培养细胞均处于指数生长期，活细胞数达到90%以上。
[0022]（2）取8周龄的C57BL/6J野生型小鼠10只，雌雄各半，适应5天，利用异氟烷麻醉机浅度麻醉本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小鼠肺癌胸腔积液模型的构建方法，其特征在于包括如下步骤：（1）体外培养路易斯肺癌细胞（LLC），待细胞进入指数生长期时，生理盐水稀释细胞浓度至2x105～5x106/mL；（2）取6
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8周龄的C57BL/6J野生型小鼠，适应3
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5天，利用异氟烷麻醉机麻醉后，用镊子夹起小鼠胸骨柄左侧5
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6肋间的皮肤，用眼科剪在夹起处制造一个2
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3 mm的纵向切口，针尖注入深度为3
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5 mm，进针缓慢推注10 ml/g LLC细胞悬液；（3）小鼠正常供食供水培养时间为6
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12天后，制得小鼠肺癌胸腔积液模型。2.根据权利要求1所述的小鼠肺癌胸腔积液模型的构建方法，其特征在于：在步骤（1）中，体外培养LLC细胞，待细胞进入指数生长期时，生理盐水稀释细胞浓度至2x105～5x106/mL，细胞培养条件包括：10%胎牛血清，90% DMED高糖培养液，37℃，5%二氧化碳细胞培养箱，胰蛋白酶，无菌超净台，离心机，倒置显微镜。3.根据权利要求1所述的小鼠肺癌胸腔积液模型的构建方法，其特征在于：在步骤（2）中，取6
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8周龄的C57BL/6J野生型小鼠，适应3
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5天，利用异氟烷麻醉机麻醉后，用镊子夹起小鼠胸骨柄左侧5
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6肋间的皮肤，用眼科剪在夹起处制造一个2
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3 mm的纵向切口，针尖注入深度为3
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5 mm，进针缓慢推注10 ml/g LLC细胞悬液，注射完毕后快速拔出针头后，适当碘伏消毒后创口，并迅速停止呼吸麻醉，放置待小鼠苏醒后放回鼠笼观察生命体征，注意保暖，所述小鼠包括雄性和雌性小鼠；所述麻醉机为动物吸入式麻醉机；所述注射器为一...

【专利技术属性】
技术研发人员：华子春，郁文亮，
申请(专利权)人：南京吉芮康生物科技研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：