多肽及其用途制造技术

提供了多肽及其用途。多肽包含N端序列和C端序列，其中N端序列包含一个或多个重复单元，该重复单元包含以SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本发明专利技术中提供了一种用于组织填充与增容的人体结构性材料的用途，因其无需从人体移植，但又具有人体组织填充的天然优势，所以有望在隆乳、隆鼻和面中部填充等领域得到广泛的应用。用。

【技术实现步骤摘要】
多肽及其用途


[0001]本专利技术属于合成生物
，并且具体涉及胶原蛋白多肽，可用于组织填充与增容的人体结构性材料。

技术介绍

[0002]由于遗传因素、营养情况、年龄因素等，有些人会出现颞部凹陷、鼻基底凹陷、下颏短小退缩、鼻梁低平等面部结构性缺陷；也有部分女性会出现乳房发育不良或下垂萎缩等问题，严重影响美感。随着人们生活水平的不断提高和思想观念的开放，越来越多的人开始关注美容整形。目前可通过填充手术来改善女性的容貌和身材，以获得挺翘优美的鼻形、平整光滑的面部和饱满圆润的乳房。现在阶段的填充手术，主要可分为假体植入手术、自体组织移植手术、注射填充手术。
[0003]因为硅胶具有较好的组织相容性，没有致癌、致突变、致畸等问题，抗撕力、硬度、弹性回缩力等各方面都比较令人满意，所以早期的隆乳手术和隆鼻术往往采用硅胶假体作为植入物。这具有操作简单，外形美观，效果立竿见影等优点。然而，硅胶假体因表面存在静电，容易吸附一些尘屑或者纤毛，易导致伤口产生感染；也会在术后产生一些并发症。例如：隆乳切口瘢痕明显、乳沟过宽、抬举困难、假体破裂、渗漏、包膜挛缩等并发症，且发生假体挛缩、破裂的概率随着假体植入时间的延长而增大；隆鼻则容易出现假体透光、组织相容性差、材料坚硬、植入后触感差、容易移位等问题，且引发鼻部肿胀、鼻尖皮炎以及皮下张力过大等并发症，无法支撑鼻背。
[0004]随着整形技术的发展，自体组织移植在美容外科中发挥了日益重要的作用。其中自体脂肪隆胸、隆鼻、面中部填充是将自身脂肪较丰厚部位的脂肪颗粒移植到所需部位。自体脂肪移植通常采用注射方式，疼痛感较小且手术创伤较小、耗时短，手术区域瘢痕不明显，术后恢复快；其填充物来源于自身，具有生物相容性，移植后无免疫排斥反应，且不会影响其本身的乳房或鼻部功能；具有优异的融合性，不易发生移位；术后并发症少；同时又可瘦身塑形。但是传统的脂肪采集技术和注射技术存在着高吸收率、低存活率等不足，一次性移植过量也会引起乳房结节等并发症，所以常需要多次脂肪移植才能达到预期效果。除了自体脂肪外，自体软骨也可以作为隆鼻和面中部填充的原料，具有与自体脂肪相似的优势，但是其会产生自体扭曲变形，从而对后续的填充效果产生较大的影响。
[0005]注射填充是指将人工化学物质通过注射填充到乳房或面部缺陷部位的手术方式。其中人造脂肪是最常用的注射填充材料，其化学成分是亲水性聚丙烯胺水凝胶，常被用于隆乳术中，但是在后续的长期应用中发现其具有许多并发症和不良反应。该水凝胶在生产过程中会带有有毒重金属，易通过皮肤黏膜被人体吸收和累积，从而引起中毒；且对细胞和肾脏也有不同程度的毒副作用。注射后会引起乳房内硬块或硬结、疼痛、双侧乳房不对称、感染、哺乳期乳腺炎、无菌性炎症、乳房破溃穿孔、注射物移位、上肢活动受限等并发症，有些患者数种并发症共存。
[0006]随着现代技术的发展，重组胶原蛋白已经可以通过基因工程技术生产，但是目前
市面上的胶原蛋白主要是通过人源胶原蛋白的序列进行突变得到，属于类胶原蛋白，仍具有一定的免疫原性；且仍需要与交联剂混合制备得到凝胶产品，才可实现其生物力学性能，完成组织的增容和填充。但是往往交联剂的使用会导致具有低免疫原性且无毒性的胶原蛋白产生未观察到的副作用和异物反应。因此，本领域亟需专利技术一种不具有外源基因序列、无免疫原性、高生物相容性、可自主交联的人源化胶原蛋白，并作为人体结构性材料用于组织填充和增容。

技术实现思路

[0007]本专利技术人对人源化胶原蛋白进行长期的研究，并且在中国专利申请CN201210482543.2和CN201811438582.6中发现了多种III型胶原蛋白多肽。本专利技术人对这些发现的胶原蛋白多肽进一步进行了研究，发现这些胶原蛋白多肽在低温下不能自身形成凝胶。令人惊讶地，专利技术人在先前专利技术的胶原蛋白多肽的基础上添加小肽段，能够使形成的胶原蛋白多肽在低温下形成凝胶。本专利技术的凝胶可以不含交联剂。
[0008]在一个方面，本专利技术提供了多肽，包含N端序列和C端序列，其中N端序列包含一个或多个重复单元，该重复单元包含以SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，并且C端序列为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。SEQ ID NO.1的氨基酸序列为gergapgfrgpagpngipgekgpagergap。SEQ ID NO.2的氨基酸序列gapgpccgg。
[0009]在一个实施方案中，重复单元可以是SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的突变(取代、插入、删除或添加)后得到的氨基酸序列。
[0010]在一个实施方案中，C端序列可以是SEQ ID NO.2的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的突变(取代、插入、删除或添加)后得到的氨基酸序列。
[0011]在一个实施方案中，重复单元的数目是1
‑
20。
[0012]在一个实施方案中，重复单元的数目是2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
[0013]在一个实施方案中，N端序列和C端序列是直接连接的或间隔一个或多个氨基酸残基。
[0014]在一个实施方案中，各重复单元是直接连接的或间隔一个或多个氨基酸残基；
[0015]在一个实施方案中，多肽包含SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列或SEQ ID NO.3的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的突变(取代、插入、删除或添加)后得到的氨基酸序列。
[0016]在一个实施方案中，在多肽序列发生突变的情况下，得到的多肽保留本专利技术的功能，如细胞粘附、自身形成凝胶的能力等。
[0017]在一个方面中，本专利技术提供了多核苷酸，其编码本文所述的多肽。
[0018]在一个实施方案中，多核苷酸包含SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。
[0019]在一个方面中，本专利技术提供了核酸，该核酸包含本文的多核苷酸。
[0020]在一个实施方案中，核酸还包含编码纯化标签，例如His标签、GST标签、MBP标签、SUMO标签或NusA标签的核苷酸。
[0021]在一个实施方案中，核酸还包含编码前导序列的核苷酸。
[0022]在一个方面，本专利技术提供了载体，该载体包含本文的多核苷酸或核酸。在一个实施
方案中，载体是表达载体。在一个实施方案中，载体包含与多核苷酸或核酸可操作连接的表达控制元件，如启动子、终止子和/或增强子。
[0023]在一个方面，本专利技术提供了宿主细胞，其包含本文的多核苷酸、核酸或载体。
[0024]在一个实施方案中，宿主细胞是细菌、真菌或动物细胞。在一个实施方案中，细菌是大肠杆菌。在一个实施方案中，真菌是酵母，例如酿酒酵母。
[0025]在一个方面，本专利技术提供生产多肽的方法，其包括：
[0026](1)在合适的培养条件下培养本文的宿主细胞；
[0027](2)收获包含多肽的宿主细胞和/或培养基；
[0028](3)纯化多肽。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.多肽，包含N端序列和C端序列，其中N端序列包含一个或多个重复单元，该重复单元包含以SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，并且C端序列为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；优选地，N端序列和C端序列是直接连接的或间隔一个或多个氨基酸残基，各重复单元是直接连接的或间隔一个或多个氨基酸残基；优选地，其中重复单元的数目是1
‑
20；优选地，多肽包含SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。2.多核苷酸，其编码根据权利要求1所述的多肽；优选地，所述多核苷酸包含SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。3.核酸，其包含根据权利要求2所述的多核苷酸，任选地还包含编码纯化标签，例如His标签、GST标签、MBP标签、SUMO标签或NusA标签的核苷酸，任选地还包含编码前导序列的核苷酸。4.载体，其包含根据权利要求2所述的多核苷酸或根据权利要求3所述的核酸，优选地，其中载体是表达载体，优选地，其中载体包含与多核苷酸或核酸可操作连接的表达控制元件，如启动子、终止子和/或增强...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨霞，
申请(专利权)人：山西锦波生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：